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猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的鉴定: 1; 作者林琪虹李长尧 +2 位作者张朝霞宋厚辉翁长江《中国预防兽医学报》北大核心 2025年第2期179-184,共6页; 为制备猪瘟病毒(CSFV)鼠源E2蛋白单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究通过昆虫细胞杆状病毒表达系统表达并纯化了重组E2蛋白(rE2),将其免疫BALB/c小鼠后通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌E2蛋白MAb的杂交瘤细胞株3D5。经MAb... 展开更多; 关键词猪瘟病毒 E2蛋白单克隆抗体抗原表位; 在线阅读下载PDF 职称材料

非洲猪瘟病毒免疫调节基因的功能及其在病毒感染和致病中的作用被引量：2: 2; 作者翁长江《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第11期74-84,共11页; 非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,ASFV强毒株感染家猪的发病率和致死率可达100%。由于没有安全有效的疫苗和药物,ASF疫情已经给世界养猪产业造成了巨大的经济损失。ASFV是一... 展开更多; 关键词非洲猪瘟免疫调节基因减毒活疫苗细胞凋亡细胞自噬; 在线阅读下载PDF 职称材料

Annexin蛋白家族调控病毒复制和抗病毒天然免疫反应的研究进展: 3; 作者薛梦迪黄丽翁长江《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1014-1019,共6页; 病毒复制一般包括吸附、穿入、脱壳、生物合成及装配与释放5个阶段,Annexin蛋白能够与流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等病毒编码的蛋白相互作用进而影响病毒吸附、穿入及脱壳等复制过程。天然免疫是机体针对各种病原微生物和... 展开更多; 关键词病毒吸附模式识别受体病毒复制复制过程病原相关分子模式第一道防线病原微生物流感病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

非洲猪瘟病毒B318L蛋白的多克隆抗体的制备及应用被引量：2: 4; 作者刘晓红刘宏扬 +4 位作者叶光强焦爽宿志民黄丽翁长江《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期922-929,共8页; 非洲猪瘟病毒(ASFV)B318L是ASFV编码的晚期蛋白,具有香叶基香叶基合成酶活性。为了制备B318L的多克隆抗体并将其初步应用,本研究利用PCR方法从重组质粒p CAGGS-HA-B318L中扩增ASFV B318L基因构建重组表达质粒p GEX-6p-1-B318L,经PCR和... 展开更多; 关键词非洲猪瘟病毒 B318L蛋白多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

非洲猪瘟病毒E184L蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备: 5; 作者李雪雯李婷婷 +4 位作者李长尧焦爽郑君荣俊翁长江《中国动物传染病学报》 2025年第3期130-136,共7页; 本研究旨在表达非洲猪瘟病毒(ASFV)E184L蛋白(pE184L),并制备单克隆抗体(mAb),为其功能研究提供物质基础。首先,构建出了原核表达质粒pET21a-E184L并表达重组pE184L-His蛋白,使用镍亲和层析的方法对pE184L进行纯化,用纯化后的蛋白对小... 展开更多; 关键词 ASFV E184L 原核表达单克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的鉴定: 1; 作者林琪虹李长尧张朝霞宋厚辉翁长江; 机构浙江农林大学动物科技学院动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/基础免疫创新团队黑龙江省兽医免疫学重点实验室; 出处《中国预防兽医学报》北大核心 2025年第2期179-184,共6页; 基金黑龙江省自然科学基金资助项目(C2016061)。; 文摘为制备猪瘟病毒(CSFV)鼠源E2蛋白单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究通过昆虫细胞杆状病毒表达系统表达并纯化了重组E2蛋白(rE2),将其免疫BALB/c小鼠后通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌E2蛋白MAb的杂交瘤细胞株3D5。经MAb亚类鉴定试剂盒检测结果显示3D5 MAb为IgM型。采用western blot检测制备的3D5 MAb与293T细胞中过表达的E2蛋白及CSFV感染猪肾细胞(PK-15细胞)后(感染后不同时间)天然表达E2蛋白的反应性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测3D5 MAb与PK-15细胞中天然表达E2蛋白的反应性。Western blot结果显示,过表达E2蛋白的293T细胞和感染CSFV的PK-15细胞中(感染后12 h)均出现了40 ku左右的特异性条带。IFA结果显示,感染CSFV的PK-15细胞中出现红色荧光。以上结果表明,制备的3D5 MAb均能够与过表达的和天然表达的E2蛋白有较强的反应性。利用一系列表达截短的重组E2片段,通过western blot鉴定3D5 MAb识别的抗原表位,结果显示,E2蛋白氨基酸序列中的157REKPFPHRMD167为3D5 MAb的抗原表位。本研究首次制备了CSFV E2蛋白的MAb,并对其进行了表位鉴定,为进一步深入研究CSFV E2蛋白的结构、功能、抗原表位的筛选及新疫苗的研制提供参考依据。; 关键词猪瘟病毒 E2蛋白单克隆抗体抗原表位; Keywords classical swine fever virus E2 protein monoclonal antibody epitope; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名非洲猪瘟病毒免疫调节基因的功能及其在病毒感染和致病中的作用被引量：2: 2; 作者翁长江; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江省兽医免疫学重点实验室; 出处《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第11期74-84,共11页; 基金国家自然科学基金(U21A20256)。; 文摘非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,ASFV强毒株感染家猪的发病率和致死率可达100%。由于没有安全有效的疫苗和药物,ASF疫情已经给世界养猪产业造成了巨大的经济损失。ASFV是一种有囊膜的双链DNA病毒,能够编码150~200种蛋白。ASFV编码的一些蛋白参与病毒入侵、基因组复制、DNA修复和病毒粒子组装;另外一些蛋白还执行免疫调节功能,在逃逸宿主抗病毒免疫反应中发挥着重要的作用,如调控NF-κB信号、干扰素(IFN)信号和炎症反应,调控细胞死亡和细胞自噬等。本综述将编码调控NF-κB信号、天然免疫反应、炎症反应、细胞死亡和细胞自噬等功能的ASFV蛋白的基因,统一称为ASFV免疫调节基因。大量研究证据表明,ASFV免疫调节基因与病毒的致病力密切相关。缺失一个或多个ASFV免疫调节基因的ASFV毒株毒力降低,用这些减毒毒株免疫猪可以抵抗ASFV强毒株的攻击。然而,ASFV免疫调节基因在ASFV感染和发病过程中如何发挥作用仍然未知。因此,本综述对ASFV免疫调节基因的功能及其在病毒感染和致病中的作用进行了总结,以期为研究ASFV感染、致病性和疫情防控提供重要的科技信息参考。; 关键词非洲猪瘟免疫调节基因减毒活疫苗细胞凋亡细胞自噬; Keywords African swine fever immunoregulatory gene attenuated live vaccine apoptosis autophagy; 分类号 S855.3 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Annexin蛋白家族调控病毒复制和抗病毒天然免疫反应的研究进展: 3; 作者薛梦迪黄丽翁长江; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室基础免疫创新团队/黑龙江省兽医免疫学重点实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1014-1019,共6页; 基金国家自然科学基金(31941002)。; 文摘病毒复制一般包括吸附、穿入、脱壳、生物合成及装配与释放5个阶段,Annexin蛋白能够与流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等病毒编码的蛋白相互作用进而影响病毒吸附、穿入及脱壳等复制过程。天然免疫是机体针对各种病原微生物和异物的侵袭而介导抗病毒免疫反应的第一道防线,其激活依赖于模式识别受体(Pattern-recognition receptors,PRRs)识别病原体保守的分子结构称病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),以激活下游相关信号通路,发挥抵御病原体侵入的功能。; 关键词病毒吸附模式识别受体病毒复制复制过程病原相关分子模式第一道防线病原微生物流感病毒; 分类号 R392.12 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名非洲猪瘟病毒B318L蛋白的多克隆抗体的制备及应用被引量：2: 4; 作者刘晓红刘宏扬叶光强焦爽宿志民黄丽翁长江; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江省兽医免疫学重点实验室山东畜牧兽医职业学院; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期922-929,共8页; 基金黑龙江省自然科学基金(YQ2020C022)。; 文摘非洲猪瘟病毒(ASFV)B318L是ASFV编码的晚期蛋白,具有香叶基香叶基合成酶活性。为了制备B318L的多克隆抗体并将其初步应用,本研究利用PCR方法从重组质粒p CAGGS-HA-B318L中扩增ASFV B318L基因构建重组表达质粒p GEX-6p-1-B318L,经PCR和测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导并克隆至p GEX-6p-1载体中,采用GST亲和层析柱纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE检测该蛋白的表达,采用western blot鉴定重组蛋白的纯化效果和反应原性,采用超微量紫外分光光度计测定蛋白浓度。结果显示,在约60 ku处出现特异性条带,且重组B318L蛋白(rB318L)主要以可溶性形式表达;纯化后在约60 ku处出现了单一特异性条带,经超微量紫外分光光度计测定蛋白浓度为10 mg/m L。将纯化的r B318L 4次免疫小鼠并于3免后一周采血,采用western blot鉴定该多克隆抗体(pAb),经Protein G亲和层析介质纯化后采用SDS-PAGE进一步鉴定纯化效果,采用间接ELISA检测p Ab的效价。结果显示,制备的小鼠血清(pAb)在60 ku处出现特异性条带,其与原核表达的r B318L发生了反应;该p Ab包含重、轻链且纯度较好,且其效价可达1∶32000。将不同剂量的p CAGGS-HA-B318L(1μg、2μg、4μg)分别转染HEK293T细胞,24 h后收集细胞,将MOI 1的ASFV HLJ/18株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM),并分别于感染后6 h、12 h、24 h收集细胞。上述细胞均经相应处理后分别采用western blot、间接免疫荧光试验(IFA)(pCAGGS-HA-B318L转染剂量为1μg)检测制备的p Ab的反应原性。Western blot结果显示,HEK293T细胞中出现约35 ku的特异性条带,并随转染质粒浓度的增加B318L蛋白表达量增多;ASFV感染24 h后的PAM在35 ku处出现特异性条带,其余时间点均无该条带。IFA结果显示,过表达B318L蛋白的HEK293T细胞中出现红色荧光;ASFV感染12 h后的PAM中出现红色荧光,24 h后PAM中红色荧光的量增加。将制备的B318L p Ab用于免疫共沉淀(Co-IP)试验检测293T细胞中过表达的B318L、ASFV感染PAM后内源表达的B318L,以及两种细胞中表达的B38L蛋白与p Ab、Protein A/G Magnetic beads三者结合物的反应性。结果显示,B318L p Ab可以检测到上述细胞中内源过表达和外源表达的B318L蛋白以及结合在beads上的B318L蛋白,均出现约35 ku的特异性条带。上述结果表明,B318L蛋白是ASFV晚期表达的蛋白,且制备并纯化的B318L p Ab反应原性较强,既可以与HEK293T细胞中过表达的B318L蛋白也可以与ASFV感染的PAM中内源表达的B318L蛋白反应,反应原性较强,且可以用于Co-IP试验检测细胞中表达的B318L蛋白,本研究为深入研究ASFV B318L的生物学功能奠定了基础。; 关键词非洲猪瘟病毒 B318L蛋白多克隆抗体; Keywords African swine fever virus(ASFV) B318L protein polyclonal antibody; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名非洲猪瘟病毒E184L蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备: 5; 作者李雪雯李婷婷李长尧焦爽郑君荣俊翁长江; 机构长江大学生命科学院; 出处《中国动物传染病学报》 2025年第3期130-136,共7页; 文摘本研究旨在表达非洲猪瘟病毒(ASFV)E184L蛋白(pE184L),并制备单克隆抗体(mAb),为其功能研究提供物质基础。首先,构建出了原核表达质粒pET21a-E184L并表达重组pE184L-His蛋白,使用镍亲和层析的方法对pE184L进行纯化,用纯化后的蛋白对小鼠进行免疫,随后取阳性小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选出能稳定分泌pE184L mAb的杂交瘤细胞。Western blot结果显示,该抗体能够特异性识别过表达的外源pE184蛋白以及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)表达的内源pE184蛋白。IFA结果表明该株mAb能特异性标记过表达的pE184L蛋白及在ASFV感染的PAMs细胞中表达的内源pE184L蛋白。Co-IP试验结果表明该株mAb能特异性结合过表达的pE184L蛋白及在ASFV感染的PAMs细胞中表达的内源pE184L蛋白。本研究成功表达并纯化了可溶性E184L蛋白,并制备了1株pE184L mAb,该mAb与pE184L蛋白具有良好的反应性,这为ASFV pE184L的生物学功能研究奠定了基础。; 关键词 ASFV E184L 原核表达单克隆抗体; Keywords ASFV E184L prokaryotic expression monoclonal antibody; 分类号 S852.65 [农业科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的鉴定	林琪虹李长尧张朝霞宋厚辉翁长江	《中国预防兽医学报》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	非洲猪瘟病毒免疫调节基因的功能及其在病毒感染和致病中的作用	翁长江	《中国兽医杂志》 CAS 北大核心	2023	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	Annexin蛋白家族调控病毒复制和抗病毒天然免疫反应的研究进展	薛梦迪黄丽翁长江	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2022	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	非洲猪瘟病毒B318L蛋白的多克隆抗体的制备及应用	刘晓红刘宏扬叶光强焦爽宿志民黄丽翁长江	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2023	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	非洲猪瘟病毒E184L蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备	李雪雯李婷婷李长尧焦爽郑君荣俊翁长江	《中国动物传染病学报》	2025		在线阅读下载PDF 职称材料