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A546D突变型TGFBI基因真核表达载体的构建及体外表达
被引量：
1
1
作者
曹文萍
苑海刚
+3 位作者
刘平
朱静
李雪
胡琦
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2015年第6期525-528,共4页
目的构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体和体外转染体系,为研究野生型及A546D突变型TGFBI基因的功能提供实验基础。方法应用重叠延伸PCR法定点诱变,构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人...
目的构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体和体外转染体系,为研究野生型及A546D突变型TGFBI基因的功能提供实验基础。方法应用重叠延伸PCR法定点诱变,构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人角膜上皮(human corneal epithelium,HCE)细胞,Western Blot法检测转染后培养基中HCE细胞分泌的TGFBI蛋白的表达。结果重组质粒总长约7.5 kb,由HindⅢ、XbaⅠ双酶切鉴定产生5.4 kb和2.1 kb两条片段者为克隆正确质粒。测序鉴定证实了TGFBI基因编码区完整插入到载体pcDNA3.1的多克隆位点中,突变载体的第1685位碱基由C替换为A,使其编码的第546个氨基酸由Ala突变为Asp即A546D突变。野生型及A546D突变型载体转染入HCE细胞后,TGFBI蛋白有效表达。结论成功构建了A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,为TGFBI基因相关性角膜营养不良致病机制的研究奠定了基础。
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关键词
TGFBI
重叠延伸PCR
人角膜上皮细胞
转染
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职称材料
题名
A546D突变型TGFBI基因真核表达载体的构建及体外表达
被引量：
1
1
作者
曹文萍
苑海刚
刘平
朱静
李雪
胡琦
机构
哈尔滨医科
大学
附属
第一
医院
眼科
黑龙江省中医药大学附属第一医院普外科
哈尔滨医科
大学
遗传学教研室
出处
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2015年第6期525-528,共4页
基金
黑龙江省博士后科研启动基金(编号:LBH-Q13126)
黑龙江省卫生厅科研基金(编号:2012-554)
哈医大一院科研基金(编号:2011BS017)~~
文摘
目的构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体和体外转染体系,为研究野生型及A546D突变型TGFBI基因的功能提供实验基础。方法应用重叠延伸PCR法定点诱变,构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人角膜上皮(human corneal epithelium,HCE)细胞,Western Blot法检测转染后培养基中HCE细胞分泌的TGFBI蛋白的表达。结果重组质粒总长约7.5 kb,由HindⅢ、XbaⅠ双酶切鉴定产生5.4 kb和2.1 kb两条片段者为克隆正确质粒。测序鉴定证实了TGFBI基因编码区完整插入到载体pcDNA3.1的多克隆位点中,突变载体的第1685位碱基由C替换为A,使其编码的第546个氨基酸由Ala突变为Asp即A546D突变。野生型及A546D突变型载体转染入HCE细胞后,TGFBI蛋白有效表达。结论成功构建了A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,为TGFBI基因相关性角膜营养不良致病机制的研究奠定了基础。
关键词
TGFBI
重叠延伸PCR
人角膜上皮细胞
转染
Keywords
TGFBI
SOE-PCR
human corneal epithelial cell
transfection
分类号
R382.31 [医药卫生—医学寄生虫学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
A546D突变型TGFBI基因真核表达载体的构建及体外表达
曹文萍
苑海刚
刘平
朱静
李雪
胡琦
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2015
1
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