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猪圆环病毒2型ORF2-ORF1串联基因的原核表达及活性分析被引量：5: 1; 作者闻晓波李冬野 +8 位作者李树东冉旭华李晓娟邵磊王密朴范泽杨焕民侯喜林倪宏波《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第2期41-44,共4页; 为探讨原核表达的PCV-2ORF2-ORF1串联蛋白的抗原性及其作为基因工程亚单位疫苗的可能性,以构建好的PCV-2大庆分离株质粒pMD-18T/PCV-2为模板,PCR分别扩增去掉核定位信号的Cap蛋白基因(dNLS-ORF2)和Rep蛋白基因(ORF1),将其串联克隆到原... 展开更多; 关键词猪圆环病毒2型 ORF2 ORF1 表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪戊型肝炎病毒ORF2主要抗原表位区间接ELISA方法的初步建立被引量：4: 2; 作者闻晓波王密 +4 位作者冉旭华周恩民李晓娟侯喜林朴范泽《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第5期99-102,共4页; 应用原核表达系统表达猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端和N端的主要抗原表位区,重组蛋白命名为ORF2-C和ORF2-N,初步建立间接ELISA诊断方法。用重组蛋白ORF2-C和ORF2-N作为诊断抗原,对反应条件进行优化,初步建立ELISA诊断方法。抗原最适包被浓... 展开更多; 关键词猪戊型肝炎病毒 ORF2 主要抗原表位区 ELISA; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪圆环病毒2型ORF3基因的原核表达被引量：4: 3; 作者冉旭华李树东 +9 位作者闻晓波王密杨焕民倪宏波侯喜林朴范泽邵磊李晓娟李冬野周恩民《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第6期171-174,共4页; 用原核表达系统表达猪圆环病毒2型ORF3基因,分析ORF3蛋白的抗原性。根据GenBank上公布的猪圆环病毒2型(PCV-2)核苷酸序列进行分析,针对ORF3基因设计并合成1对特异性引物,PCR扩增该基因,并将此片段克隆入原核表达载体pET-32a(+)上,命名为... 展开更多; 关键词猪圆环病毒2型 ORF3基因原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端主要抗原表位区的原核表达被引量：2: 4; 作者冉旭华闻晓波 +2 位作者王密李冬野侯喜林《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第1期51-54,共4页; 用原核表达系统表达猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端的主要抗原表位区。通过对GenBank公布的猪戊型肝炎病毒DQ1株ORF2的氨基酸序列进行分析,确定了其N端抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了1对特异性引物,RT-PCR扩增该区段,并将此片段... 展开更多; 关键词猪戊型肝炎病毒 ORF2 主要抗原表位区表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端主要抗原表位区的原核表达被引量：1: 5; 作者冉旭华闻晓波 +2 位作者王密李冬野侯喜林《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第1期24-27,共4页; 利用分子生物学软件分析GenBank公布的猪戊型肝炎病毒DQ1株ORF2的氨基酸序列,确定了其C端抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了一对特异性引物,RT-PCR扩增该区域,并将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,命名为pET30a-ORF2C,然后... 展开更多; 关键词猪戊型肝炎病毒 ORF2 主要抗原表位区表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛副流感病毒3型N基因的克隆与系统进化分析被引量：1: 6; 作者薛娟曹思 +2 位作者张峣冉旭华闻晓波《动物医学进展》北大核心 2015年第3期32-34,共3页; 扩增大庆地区分离的牛副流感病毒3型的N基因,并进行同源性分析。设计特异性引物,通过聚合酶链反应扩增牛副流感3型N基因,将该基因分别连接到克隆载体的BamHⅠ、HindⅢ酶切位点中,测定插入片段的核苷酸序列,并利用分子生物学软件进行同... 展开更多; 关键词牛副流感病毒3型 N基因序列分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪圆环病毒2型ORF2-ORF1串联基因的原核表达及活性分析被引量：5: 1; 作者闻晓波李冬野李树东冉旭华李晓娟邵磊王密朴范泽杨焕民侯喜林倪宏波; 机构黑龙江八一农垦大学动物科技学院预防兽医学省重点实验室; 出处《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第2期41-44,共4页; 基金黑龙江省农垦总局课题项目(HNKXIV-08-07A) 黑龙江八一农垦大学博士科研启动项目(校启D-2007-1); 文摘为探讨原核表达的PCV-2ORF2-ORF1串联蛋白的抗原性及其作为基因工程亚单位疫苗的可能性,以构建好的PCV-2大庆分离株质粒pMD-18T/PCV-2为模板,PCR分别扩增去掉核定位信号的Cap蛋白基因(dNLS-ORF2)和Rep蛋白基因(ORF1),将其串联克隆到原核表达载体pET30a(+)上,经PCR、酶切和测序鉴定,成功构建了重组质粒pET30a-ORF2/ORF1。转化E.coli BL21(DE3)pLysS感受态细胞,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳与Western blot分析。纯化的重组蛋白与PCV-2阳性血清发生特异性反应,并能与免疫小鼠的抗血清发生特异性反应。重组蛋白具有较好的免疫学活性,为基因工程亚单位疫苗的研制奠定了基础。; 关键词猪圆环病毒2型 ORF2 ORF1 表达; Keywords Porcine circovirus 2 ORF2 ORF1 expression; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪戊型肝炎病毒ORF2主要抗原表位区间接ELISA方法的初步建立被引量：4: 2; 作者闻晓波王密冉旭华周恩民李晓娟侯喜林朴范泽; 机构黑龙江八一农垦大学动物科技学院预防兽医学省重点实验室; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第5期99-102,共4页; 基金黑龙江省教育厅科学技术研究面上项目(11521201); 文摘应用原核表达系统表达猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端和N端的主要抗原表位区,重组蛋白命名为ORF2-C和ORF2-N,初步建立间接ELISA诊断方法。用重组蛋白ORF2-C和ORF2-N作为诊断抗原,对反应条件进行优化,初步建立ELISA诊断方法。抗原最适包被浓度ORF2-C为8μg/mL、ORF2-N为12μg/mL;血清最适稀释度均为1∶50,ORF2-C作用时间为50min、ORF2-N作用时间为90min;酶标抗体最适稀释度为1∶5000;ORF2-C判定标准:D450nm值≥0.348为阳性,D450nm值<0.348为阴性;ORF2-N判定标准:D450nm值≥0.397为阳性,D450nm值<0.397为阴性。与戊型肝炎病毒诊断试剂盒检测结果相比,阳性符合率分别为93.3%、86.7%。利用重组蛋白建立的ELISA方法特异性、敏感性和重复性均较好,且ORF2-C的检测效率明显高于ORF2-N,该方法的初步建立为进一步完善猪戊型肝炎病毒诊断方法奠定基础。; 关键词猪戊型肝炎病毒 ORF2 主要抗原表位区 ELISA; Keywords swine Hepatitis E ORF2 major epitope domain ELISA; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪圆环病毒2型ORF3基因的原核表达被引量：4: 3; 作者冉旭华李树东闻晓波王密杨焕民倪宏波侯喜林朴范泽邵磊李晓娟李冬野周恩民; 机构黑龙江八一农垦大学动物科技学院预防兽医学省重点实验室; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第6期171-174,共4页; 基金黑龙江省农垦总局课题(HNKXIV-08-07A) 黑龙江八一农垦大学博士科研启动项目(校启D2007-1); 文摘用原核表达系统表达猪圆环病毒2型ORF3基因,分析ORF3蛋白的抗原性。根据GenBank上公布的猪圆环病毒2型(PCV-2)核苷酸序列进行分析,针对ORF3基因设计并合成1对特异性引物,PCR扩增该基因,并将此片段克隆入原核表达载体pET-32a(+)上,命名为pET32a-ORF3,转化大肠杆菌Rosetta-blue(DE3)pLacⅠ感受态细胞,1.0mmol/L IPTG37℃诱导表达。结果表明,PCR扩增得到315bp的片段,重组蛋白大小约为29ku,与预期大小相符。Western blotting分析结果表明,重组蛋白能与抗His-tag的单克隆抗体反应,不与PCV-2阳性血清发生反应。猪圆环病毒2型ORF3基因能在大肠杆菌中成功表达,但与阳性血清之间没有反应原性,为进一步研究PCV-2ORF3蛋白的功能及特性奠定基础。; 关键词猪圆环病毒2型 ORF3基因原核表达; Keywords porcine circovirus 2（PCV-2） ORF3 gene prokaryotic expression; 分类号 S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端主要抗原表位区的原核表达被引量：2: 4; 作者冉旭华闻晓波王密李冬野侯喜林; 机构黑龙江八一农垦大学动物科技学院预防兽医学省重点实验室; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第1期51-54,共4页; 基金黑龙江省教育厅科学技术研究面上项目(11521201); 文摘用原核表达系统表达猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端的主要抗原表位区。通过对GenBank公布的猪戊型肝炎病毒DQ1株ORF2的氨基酸序列进行分析,确定了其N端抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了1对特异性引物,RT-PCR扩增该区段,并将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,命名为pET30a-ORF2N,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,1.0 mmol/LIPTG37℃诱导表达。RT-PCR扩增得到424 bp的片段,重组蛋白大小约为21.8 ku,与预期大小相符。West-ern blotting分析结果表明,该蛋白能与阳性血清发生特异性反应,证明该蛋白具有生物学活性。猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端主要抗原表位区在大肠杆菌中成功表达,具有一定的反应原性,为进一步用其建立诊断方法奠定基础。; 关键词猪戊型肝炎病毒 ORF2 主要抗原表位区表达; Keywords swine hepatitis E ORF2 major epitope domain expression; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端主要抗原表位区的原核表达被引量：1: 5; 作者冉旭华闻晓波王密李冬野侯喜林; 机构黑龙江八一农垦大学动物科技学院预防兽医学省重点实验室; 出处《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第1期24-27,共4页; 基金黑龙江省教育厅科学技术研究面上项目(11521201); 文摘利用分子生物学软件分析GenBank公布的猪戊型肝炎病毒DQ1株ORF2的氨基酸序列,确定了其C端抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了一对特异性引物,RT-PCR扩增该区域,并将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,命名为pET30a-ORF2C,然后转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。结果表明,RT-PCR扩增得到301 bp的片段,重组蛋白大小约为18 ku,与预期大小相符。Western blot分析表明,该蛋白与阳性血清发生特异性反应,为进一步利用其建立诊断方法奠定了基础。; 关键词猪戊型肝炎病毒 ORF2 主要抗原表位区表达; Keywords Swine hepatitis E virus ORF2 major epitope domain expression; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学] S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛副流感病毒3型N基因的克隆与系统进化分析被引量：1: 6; 作者薛娟曹思张峣冉旭华闻晓波; 机构黑龙江八一农垦大学动物科技学院预防兽医学省重点实验室; 出处《动物医学进展》北大核心 2015年第3期32-34,共3页; 基金 "十二五"农村领域国家科技计划课题(2012BAD12B03-3) 黑龙江八一农垦大学"大学生创新创业训练计划" 国家自然科学基金项目(31201909); 文摘扩增大庆地区分离的牛副流感病毒3型的N基因,并进行同源性分析。设计特异性引物,通过聚合酶链反应扩增牛副流感3型N基因,将该基因分别连接到克隆载体的BamHⅠ、HindⅢ酶切位点中,测定插入片段的核苷酸序列,并利用分子生物学软件进行同源性分析。序列分析结果表明,扩增获得BPIV-3-N基因全长1 548bp,编码515个氨基酸,该N段基因核苷酸序列及所推导的氨基酸序列与GenBank中日本分离株910N基因序列同源性较高,核苷酸同源性为99.7%,氨基酸同源性为100%。; 关键词牛副流感病毒3型 N基因序列分析; Keywords Bovine parainfluenza virus type 3 N gene sequence analysis; 分类号 S852.659.5 [农业科学—基础兽医学] S858.23 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	猪圆环病毒2型ORF2-ORF1串联基因的原核表达及活性分析	闻晓波李冬野李树东冉旭华李晓娟邵磊王密朴范泽杨焕民侯喜林倪宏波	《动物医学进展》 CSCD 北大核心	2010	5	在线阅读下载PDF 职称材料
2	猪戊型肝炎病毒ORF2主要抗原表位区间接ELISA方法的初步建立	闻晓波王密冉旭华周恩民李晓娟侯喜林朴范泽	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2010	4	在线阅读下载PDF 职称材料
3	猪圆环病毒2型ORF3基因的原核表达	冉旭华李树东闻晓波王密杨焕民倪宏波侯喜林朴范泽邵磊李晓娟李冬野周恩民	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2010	4	在线阅读下载PDF 职称材料
4	猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白N端主要抗原表位区的原核表达	冉旭华闻晓波王密李冬野侯喜林	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2010	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端主要抗原表位区的原核表达	冉旭华闻晓波王密李冬野侯喜林	《动物医学进展》 CSCD 北大核心	2010	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	牛副流感病毒3型N基因的克隆与系统进化分析	薛娟曹思张峣冉旭华闻晓波	《动物医学进展》北大核心	2015	1	在线阅读下载PDF 职称材料