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黑龙江地区G6P[5]型牛轮状病毒分离鉴定及遗传进化分析
被引量：
4
1
作者
王笑冉
朱庆贺
+2 位作者
宋军
郭东华
孙东波
《黑龙江八一农垦大学学报》
2024年第2期29-36,共8页
牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)是引起犊牛急性病毒性胃肠炎的主要病原体之一。为调查黑龙江省牛群BRV的基因型及其遗传进化多样性,利用恒河猴胚肾细胞(MA-104)对BRV阳性粪便样本进行病毒分离,通过逆转录-聚合酶链反应(reverse trans...
牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)是引起犊牛急性病毒性胃肠炎的主要病原体之一。为调查黑龙江省牛群BRV的基因型及其遗传进化多样性,利用恒河猴胚肾细胞(MA-104)对BRV阳性粪便样本进行病毒分离,通过逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测、间接免疫荧光鉴定和电镜观察方法对分离毒株进行鉴定;进一步通过Illumina二代测序技术获得分离毒株全基因组,对其进行序列分析,并构建VP4、VP7进化树。结果显示,MA-104细胞盲传至第5代出现细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),传至第8代稳定出现CPE,分离毒株经RT-PCR检测、间接免疫荧光鉴定为BRV阳性,电镜观察结果显示在细胞培养物中观察到呈典型车轮状的无囊膜病毒粒子,符合BRV形态特征,表明成功分离得到一株BRV,将其命名为BRV HLJ-J7;全基因组测序分析显示基因型为G6-P[5]-I2-R2-C2-M2-A11-N2-T6-E2-H3型;遗传进化分析结果显示,VP4基因与中国分离毒株Y3亲缘关系最近,同源性为98.2%;VP7基因与中国分离毒株LN19-4亲缘关系最近,同源性为98.8%。研究成功分离到一株G6P[5]型BRV,为黑龙江省BRV遗传进化及分子流行病学的研究奠定基础。
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关键词
牛轮状病毒
分离鉴定
型
遗传进化
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职称材料
BLV-ΔmiRNAs和BLV感染奶牛乳腺上皮细胞的基因转录组学分析
2
作者
刘伟琦
李宵
+2 位作者
吕观新
连帅
王建发
《黑龙江八一农垦大学学报》
2024年第4期46-55,共10页
地方流行性牛白血病(enzootic bovine leukosis,EBL)是由牛白血病病毒(bovine leukemia virus,BLV)感染所引起的一种肿瘤增生性疾病,在我国奶牛群中广泛流行,制约着我国奶牛养殖行业的发展。BLV一般通过子宫内感染及摄入受感染的牛奶和...
地方流行性牛白血病(enzootic bovine leukosis,EBL)是由牛白血病病毒(bovine leukemia virus,BLV)感染所引起的一种肿瘤增生性疾病,在我国奶牛群中广泛流行,制约着我国奶牛养殖行业的发展。BLV一般通过子宫内感染及摄入受感染的牛奶和初乳发生感染,感染后的奶牛乳腺上皮细胞对金黄色葡萄球菌更易感。作为BLV高效复制所必需的功能元件,BLV-miRNAs在肿瘤形成的过程中起着关键的作用,但BLV-miRNAs对奶牛乳腺组织的影响缺乏报道。研究使用BLV和BLV-ΔmiRNAs 2种病毒分别感染奶牛乳腺上皮细胞,进行UMI绝对定量转录组测序。结果显示:BLV和BLV-ΔmiRNAs 2种病毒感染奶牛乳腺上皮细胞后,基因转录水平发生变化,差异基因主要富集在生物进程中,包括基因转录(HMGA1、C1QBP、PTMA等)、细胞衰老(HMGA1、SERP1等)、细胞增殖迁移(PTPRJ、EPPK1等)、病毒感染复制(HMGA1、C1QBP等)、蛋白质代谢(SERP1、USE1等)、免疫功能(PTMA、PTPRJ等),KEGG分析结果显示BLV-miRNAs可以激活代谢通路、miRNA与癌症、病毒感染、病毒致癌、IL-17信号通路、粘附连接等信号通路。因此,BLV-miRNAs在BLV感染奶牛乳腺组织时可能通过影响乳腺上皮细胞免疫功能,改变细胞状态,从而加快病毒感染进程,促进病原菌的侵染,加快奶牛乳腺疾病的发生发展。试验结果为进一步研究BLVmiRNAs的功能研究奠定了基础。
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关键词
牛白血病病毒
奶牛乳腺上皮细胞
转录组学
免疫
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职称材料
金黄色葡萄球菌噬菌体脂质体的制备及胞内抗菌活性
3
作者
杨书博
苑庆欣
+4 位作者
陈麒百
王培
高东阳
李鹤
宋军
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第9期4638-4645,共8页
本试验旨在探讨脂质体作为载体,包封递送噬菌体入胞及噬菌体脂质体对牛乳腺上皮细胞内金黄色葡萄球菌的抗菌作用。本试验采用薄膜水合法制备脂质体,用于包封噬菌体SDQ制备噬菌体脂质体,并测定其酸碱稳定性和热稳定性。使用激光粒度仪测...
本试验旨在探讨脂质体作为载体,包封递送噬菌体入胞及噬菌体脂质体对牛乳腺上皮细胞内金黄色葡萄球菌的抗菌作用。本试验采用薄膜水合法制备脂质体,用于包封噬菌体SDQ制备噬菌体脂质体,并测定其酸碱稳定性和热稳定性。使用激光粒度仪测定噬菌体脂质体粒径大小、多分散系数和Zeta电位,结合透射电镜观察噬菌体脂质体结构特征。采用CCK-8法测定噬菌体脂质体对MAC-T细胞活力的影响。通过平板计数法测定噬菌体脂质体入胞效率和胞内杀菌活性。最终,选择大豆卵磷脂、胆固醇、吐温80、十八胺以8∶2∶1∶0.5比例制备脂质体,包封噬菌体SDQ后制备噬菌体脂质体(Lip-p-7)。Lip-p-7包封率大于50%,在温度(4~60℃)和pH值(2~11)范围内活性稳定。Lip-p-7平均粒径为1262.5 nm,Zeta电位从中性转向带负电荷,表明脂质体成功包封噬菌体SDQ;多分散系数(polydispersity index,PDI)小于0.7,表明其均匀分散。制备后的Lip-p-7储存于4℃条件下,可在90 d内保持完整活性,具有良好的稳定性。脂质体可有效提升噬菌体SDQ入胞数量,降低MAC-T细胞内金黄色葡萄球菌数量。综上,本试验为脂质体作为载体递送噬菌体入胞,为治疗胞内细菌感染提供参考。
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关键词
脂质体
噬菌体
金黄色葡萄球菌
牛乳腺上皮细胞
胞内抗菌活性
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职称材料
题名
黑龙江地区G6P[5]型牛轮状病毒分离鉴定及遗传进化分析
被引量：
4
1
作者
王笑冉
朱庆贺
宋军
郭东华
孙东波
机构
黑龙江八一农垦大学动物科技学院/农业农村部东北寒区牛病防治重点实验室/黑龙江省牛病防制重点实验室
出处
《黑龙江八一农垦大学学报》
2024年第2期29-36,共8页
基金
中央支持地方高校改革发展资金高水平人才项目(2022010009)
黑龙江省重点研发计划指导类(GZ20220001)。
文摘
牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)是引起犊牛急性病毒性胃肠炎的主要病原体之一。为调查黑龙江省牛群BRV的基因型及其遗传进化多样性,利用恒河猴胚肾细胞(MA-104)对BRV阳性粪便样本进行病毒分离,通过逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测、间接免疫荧光鉴定和电镜观察方法对分离毒株进行鉴定;进一步通过Illumina二代测序技术获得分离毒株全基因组,对其进行序列分析,并构建VP4、VP7进化树。结果显示,MA-104细胞盲传至第5代出现细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),传至第8代稳定出现CPE,分离毒株经RT-PCR检测、间接免疫荧光鉴定为BRV阳性,电镜观察结果显示在细胞培养物中观察到呈典型车轮状的无囊膜病毒粒子,符合BRV形态特征,表明成功分离得到一株BRV,将其命名为BRV HLJ-J7;全基因组测序分析显示基因型为G6-P[5]-I2-R2-C2-M2-A11-N2-T6-E2-H3型;遗传进化分析结果显示,VP4基因与中国分离毒株Y3亲缘关系最近,同源性为98.2%;VP7基因与中国分离毒株LN19-4亲缘关系最近,同源性为98.8%。研究成功分离到一株G6P[5]型BRV,为黑龙江省BRV遗传进化及分子流行病学的研究奠定基础。
关键词
牛轮状病毒
分离鉴定
型
遗传进化
Keywords
bovine rotavirus
separation and identification
G6P[5]type
genetic evolution
分类号
Q858.28 [生物学]
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职称材料
题名
BLV-ΔmiRNAs和BLV感染奶牛乳腺上皮细胞的基因转录组学分析
2
作者
刘伟琦
李宵
吕观新
连帅
王建发
机构
黑龙江八一农垦大学动物科技学院/农业农村部东北寒区牛病防治重点实验室/黑龙江省牛病防制重点实验室
出处
《黑龙江八一农垦大学学报》
2024年第4期46-55,共10页
基金
国家自然科学基金(32002247,32272968)
中国博士后科学基金(2022M713403)
研究生创新科研项目(YJSCX2021-Y02)。
文摘
地方流行性牛白血病(enzootic bovine leukosis,EBL)是由牛白血病病毒(bovine leukemia virus,BLV)感染所引起的一种肿瘤增生性疾病,在我国奶牛群中广泛流行,制约着我国奶牛养殖行业的发展。BLV一般通过子宫内感染及摄入受感染的牛奶和初乳发生感染,感染后的奶牛乳腺上皮细胞对金黄色葡萄球菌更易感。作为BLV高效复制所必需的功能元件,BLV-miRNAs在肿瘤形成的过程中起着关键的作用,但BLV-miRNAs对奶牛乳腺组织的影响缺乏报道。研究使用BLV和BLV-ΔmiRNAs 2种病毒分别感染奶牛乳腺上皮细胞,进行UMI绝对定量转录组测序。结果显示:BLV和BLV-ΔmiRNAs 2种病毒感染奶牛乳腺上皮细胞后,基因转录水平发生变化,差异基因主要富集在生物进程中,包括基因转录(HMGA1、C1QBP、PTMA等)、细胞衰老(HMGA1、SERP1等)、细胞增殖迁移(PTPRJ、EPPK1等)、病毒感染复制(HMGA1、C1QBP等)、蛋白质代谢(SERP1、USE1等)、免疫功能(PTMA、PTPRJ等),KEGG分析结果显示BLV-miRNAs可以激活代谢通路、miRNA与癌症、病毒感染、病毒致癌、IL-17信号通路、粘附连接等信号通路。因此,BLV-miRNAs在BLV感染奶牛乳腺组织时可能通过影响乳腺上皮细胞免疫功能,改变细胞状态,从而加快病毒感染进程,促进病原菌的侵染,加快奶牛乳腺疾病的发生发展。试验结果为进一步研究BLVmiRNAs的功能研究奠定了基础。
关键词
牛白血病病毒
奶牛乳腺上皮细胞
转录组学
免疫
Keywords
bovine leukemia virus
bovine mammary epithelial cell
transcriptomics
immune
分类号
S857.4 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
金黄色葡萄球菌噬菌体脂质体的制备及胞内抗菌活性
3
作者
杨书博
苑庆欣
陈麒百
王培
高东阳
李鹤
宋军
机构
黑龙江八一农垦大学动物科技学院/农业农村部东北寒区牛病防治重点实验室/黑龙江省牛病防制重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第9期4638-4645,共8页
基金
国家自然科学基金青年科学基金项目(31802226)
黑龙江省自然科学基金资助项目(LH2022C072)
+1 种基金
大庆市指导性科技项目(zd-2024-28)
黑龙江省牛病防制重点实验室开放课题(PCBD201710)。
文摘
本试验旨在探讨脂质体作为载体,包封递送噬菌体入胞及噬菌体脂质体对牛乳腺上皮细胞内金黄色葡萄球菌的抗菌作用。本试验采用薄膜水合法制备脂质体,用于包封噬菌体SDQ制备噬菌体脂质体,并测定其酸碱稳定性和热稳定性。使用激光粒度仪测定噬菌体脂质体粒径大小、多分散系数和Zeta电位,结合透射电镜观察噬菌体脂质体结构特征。采用CCK-8法测定噬菌体脂质体对MAC-T细胞活力的影响。通过平板计数法测定噬菌体脂质体入胞效率和胞内杀菌活性。最终,选择大豆卵磷脂、胆固醇、吐温80、十八胺以8∶2∶1∶0.5比例制备脂质体,包封噬菌体SDQ后制备噬菌体脂质体(Lip-p-7)。Lip-p-7包封率大于50%,在温度(4~60℃)和pH值(2~11)范围内活性稳定。Lip-p-7平均粒径为1262.5 nm,Zeta电位从中性转向带负电荷,表明脂质体成功包封噬菌体SDQ;多分散系数(polydispersity index,PDI)小于0.7,表明其均匀分散。制备后的Lip-p-7储存于4℃条件下,可在90 d内保持完整活性,具有良好的稳定性。脂质体可有效提升噬菌体SDQ入胞数量,降低MAC-T细胞内金黄色葡萄球菌数量。综上,本试验为脂质体作为载体递送噬菌体入胞,为治疗胞内细菌感染提供参考。
关键词
脂质体
噬菌体
金黄色葡萄球菌
牛乳腺上皮细胞
胞内抗菌活性
Keywords
liposomes
bacteriophage
Staphylococcus aureus
MAC-T cells
intracellular antibacterial activity
分类号
Q939.48 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
黑龙江地区G6P[5]型牛轮状病毒分离鉴定及遗传进化分析
王笑冉
朱庆贺
宋军
郭东华
孙东波
《黑龙江八一农垦大学学报》
2024
4
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职称材料
2
BLV-ΔmiRNAs和BLV感染奶牛乳腺上皮细胞的基因转录组学分析
刘伟琦
李宵
吕观新
连帅
王建发
《黑龙江八一农垦大学学报》
2024
0
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职称材料
3
金黄色葡萄球菌噬菌体脂质体的制备及胞内抗菌活性
杨书博
苑庆欣
陈麒百
王培
高东阳
李鹤
宋军
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025
0
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