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猪流行性腹泻病毒RT-RAA-LFD检测方法的建立
1
作者 仇德洋 王海燕 +3 位作者 郑佳 杜建才 陈昭 李桂梅 《中国动物检疫》 2025年第7期90-95,共6页
为开发一种可靠、简易、便捷的现场猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测方法,基于反转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,建立了用于现场检测PEDV的RT-RAA-LFD方法。根据PEDV N基因保守序列进行引物和探针设计,通过试验优选... 为开发一种可靠、简易、便捷的现场猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测方法,基于反转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,建立了用于现场检测PEDV的RT-RAA-LFD方法。根据PEDV N基因保守序列进行引物和探针设计,通过试验优选出一套引物及一条探针,同时对RT-RAA反应时间和温度条件进行优化。优化后的方法在37℃恒温反应15 min,即可实现对PEDV目的基因片段的有效扩增;与其他常见腹泻病毒无交叉反应,最低检测限为1.23×10^(1) copies/μL;对134份临床样品进行检测,阳性检出率为5.97%,与国标检测方法结果一致。结果表明,本研究建立的PEDV RT-RAA-LFD检测方法操作简便,结果特异、灵敏,不需要专业的实验室设备和实验人员,适用于在资源有限地区对PEDV的检测,能够满足基层临床工作人员的需求。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 重组酶介导等温扩增 侧向层析试纸条
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猪圆环病毒2型和弓形虫双重TaqMan荧光定量PCR法的建立及应用
2
作者 王海燕 仇德洋 +5 位作者 蔺雅婷 杜建才 姚方方 吕延飞 刘洋 郑佳 《中国动物检疫》 2025年第6期92-98,共7页
猪圆环病毒2型(PCV2)感染和弓形虫病(toxoplasmosis)在临床症状上具有一定的相似性因而难以准确辨别。为建立可同时鉴别PCV2和弓形虫(Toxoplasma gondii,Tox)的检测方法,针对PCV2 ORF2和Tox基因组529重复序列(Rep G529)设计特异性引物和... 猪圆环病毒2型(PCV2)感染和弓形虫病(toxoplasmosis)在临床症状上具有一定的相似性因而难以准确辨别。为建立可同时鉴别PCV2和弓形虫(Toxoplasma gondii,Tox)的检测方法,针对PCV2 ORF2和Tox基因组529重复序列(Rep G529)设计特异性引物和Taq Man探针,经过优化引物、探针浓度和反应条件,建立了同时检测这两种病原的双重Taq Man荧光定量PCR方法。该方法仅特异性扩增PCV2和Tox,与其他病原无交叉反应,特异性强;对PCV2质粒标准品的最低检测限为1.21×10~1 copies/μL,对Tox质粒的最低检测限为1.17×10~1 copies/μL,具有较高的敏感性;组内和组间变异系数均小于5%,具有良好的重复性。应用本试验建立方法和国标荧光定量PCR方法同时检测187份血清、脾脏临床样品,结果PCV2和Tox的阳性符合率分别为93.33%和100%。该方法的建立为PCV2和Tox的批量、快速和特异性鉴别检测提供了技术支撑。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 弓形虫 双重荧光定量PCR
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猪细小病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立
3
作者 仇德洋 郑佳 +8 位作者 曹志 李铭凯 巩立媛 姚方方 杜建才 李国超 赵欣如 李占坤 吕延飞 《中国动物检疫》 2025年第10期109-114,共6页
为创建一种快速准确的猪细小病毒(PPV)检测方法,根据PPV NS1基因保守序列设计引物与探针,建立了特异、敏感且可绝对定量的TaqMan实时荧光定量PCR方法。该方法的检测Ct值与标准质粒浓度(1.08×10^(7)~1.08×10^(1)copies/μL)具... 为创建一种快速准确的猪细小病毒(PPV)检测方法,根据PPV NS1基因保守序列设计引物与探针,建立了特异、敏感且可绝对定量的TaqMan实时荧光定量PCR方法。该方法的检测Ct值与标准质粒浓度(1.08×10^(7)~1.08×10^(1)copies/μL)具有良好的线性关系,Y=-3.4475x+35.057,相关系数R^(2)=0.9975;灵敏度高,对PPV质粒最低检测限为1.08×10~1 copies/μL;重复性好,对1.08×10^(7)、1.08×10^(4)、1.08×10^(2)copies/μL标准质粒批内与批间重复性试验变异系数均低于1%;特异性强,不与猪瘟病毒(CFSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)发生交叉反应;与巢式PCR方法同步检测临床样品的总符合率为99%。结果表明,本试验建立的方法特异性强、敏感性高,为PPV感染的实验室诊断及流行病学调查提供了重要的技术支持。 展开更多
关键词 猪细小病毒 NS1蛋白 TaqMan实时定量荧光PCR
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功能观察组合试验(FOB)评价牛蒡子苷元对大鼠中枢神经系统的影响 被引量：7
4
作者 李欣 姚景春 +2 位作者 李涛 李会恩 高雷 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2015年第2期441-443,共3页
目的:采用功能观察组合试验(FOB)评价牛蒡子苷元注射液对大鼠中枢神经系统的影响。方法:健康SD大鼠50只,雌雄各半,设空白对照组、牛蒡子苷元0.5、2.5和12.5 mg·kg-1剂量组及氯丙嗪20 mg·kg-1阳性对照组,每组10只动物。空白对... 目的:采用功能观察组合试验(FOB)评价牛蒡子苷元注射液对大鼠中枢神经系统的影响。方法:健康SD大鼠50只,雌雄各半,设空白对照组、牛蒡子苷元0.5、2.5和12.5 mg·kg-1剂量组及氯丙嗪20 mg·kg-1阳性对照组,每组10只动物。空白对照组及牛蒡子苷元0.5、2.5、12.5 mg·kg-1剂量组单次皮下注射给药,阳性对照组灌胃给药。各组动物根据FOB试验方法,于给药前及给药后30 min、90 min、180 min、24 h对动物机体行为、感觉、反射等功能进行观察。结果:空白对照组及牛蒡子苷元0.5、2.5和12.5 mg·kg-1剂量组进食、手指接近、头部接触、唤醒、体温等40余项观察指标均未见异常,阳性对照组动物出现明显的中枢神经抑制和体温降低。结论:本试验条件下,大鼠单次皮下注射0.5、2.5和12.5 mg·kg-1的牛蒡子苷元未见动物神经行为发生明显改变。 展开更多
关键词 功能观察组合试验(FOB) 牛蒡子苷元 中枢神经系统
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