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小鼠多亚型热休克蛋白/肽疫苗联合PD-L1免疫检查点抑制剂的抗肿瘤实验研究
被引量：
1
1
作者
李浩江
王振勇
+9 位作者
沈师
高超
张彬
王泽昊
眭翔
崔雪梅
袁玫
刘舒云
郭全义
王桂琴
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期278-283,共6页
目的:应用小鼠肉瘤组织制备混合多亚型热休克蛋白/肽疫苗(mHSP/P),联合程序性死亡配体(PD-L1)抑制剂治疗小鼠肉瘤。方法:免疫组织化学染色和Elisa蛋白定量鉴定肉瘤细胞MCA207中的热休克蛋白(HSP70、HSP90、Grp94)的表达。制备蛋白悬液,...
目的:应用小鼠肉瘤组织制备混合多亚型热休克蛋白/肽疫苗(mHSP/P),联合程序性死亡配体(PD-L1)抑制剂治疗小鼠肉瘤。方法:免疫组织化学染色和Elisa蛋白定量鉴定肉瘤细胞MCA207中的热休克蛋白(HSP70、HSP90、Grp94)的表达。制备蛋白悬液,通过蛋白层析技术获取mHSP/P和Grp94/肽肉瘤疫苗(Grp94/P),以Western blot(WB)鉴定。流式细胞术测定细胞毒性作用。Elisa实验测定mHSP/P和Grp94/P刺激产生的干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)。小鼠实验探究肉瘤疫苗对肉瘤生长以及小鼠生存状况的影响。免疫荧光染色MCA207肉瘤细胞表面PD-L1的表达,WB测定IFN-γ对PD-L1表达的影响。动物实验探究PD-L1抑制剂联合mHSP/P对肿瘤的影响。结果:肿瘤组织携带多种亚型的HSP(HSP70、HSP90、Grp94);成功制备肉瘤组织来源的mHSP/P和Grp94/P,Western blot对肿瘤疫苗鉴定并且流式细胞学测定未发现细胞毒性;制备的mHSP/P较Grp94/P刺激产生更多的IFN-γ和TNF-α细胞因子(P<0.05)。肉瘤细胞表面PD-L1的表达随着IFN-γ的介入而增高;动物实验显示PD-L1抑制剂联合mHSP/P提高了免疫反应的抗肿瘤作用(P<0.05)。结论:肿瘤来源的mHSP/P和Grp94/P可以作为肿瘤疫苗在动物实验中使用。mHSP/P比Grp94/P能诱发更强的抗肿瘤免疫反应。IFN-γ刺激肉瘤细胞PD-L1的表达而导致免疫逃逸。PD-L1抑制剂联合mHSP/P提高了抗肿瘤作用。
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关键词
mHSP/P
Grp94/P
层析
PD-L1免疫检查点抑制剂
IFN-γ
IFN-α
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职称材料
探索基于基因修饰猪血红细胞灌注液亚低温有氧机械灌注对食蟹猴缺血缺氧脑损伤的保护作用
2
作者
李申
董阳辉
+10 位作者
宋翔宇
李鹏凯
米召迪
朱奕宣
崔梦一
彭熙为
程龙
袁满
许文静
彭江
赵亚群
《器官移植》
北大核心
2025年第5期728-737,共10页
目的探讨基因修饰猪血红细胞作为亚低温有氧机械灌注液对创伤性失血引起的食蟹猴脑组织缺氧缺血脑损伤的保护作用。方法按随机数字表法将食蟹猴分为阳性对照组(左脑半球)、阴性对照组(右脑半球)(共3只)和亚低温灌注组(3只)。阳性对照组...
目的探讨基因修饰猪血红细胞作为亚低温有氧机械灌注液对创伤性失血引起的食蟹猴脑组织缺氧缺血脑损伤的保护作用。方法按随机数字表法将食蟹猴分为阳性对照组(左脑半球)、阴性对照组(右脑半球)(共3只)和亚低温灌注组(3只)。阳性对照组为自循环停止1 h直接取材,阴性对照组为自循环停止1 h亚低温放置6 h,亚低温灌注组为自循环停止1 h后利用基于基因修饰猪血红细胞灌注液对食蟹猴脑缺氧缺血损伤模型双侧颈总动脉进行6 h亚低温有氧机械灌注。灌注前进行六基因修饰猪与食蟹猴交叉配血实验,灌注开始后检测0、1、2、3、4、5、6 h各时间点灌注液血常规指标水平变化,记录血氧饱和度,检测灌注液Na^(+)、K^(+)、Ca^(2+)、葡萄糖水平和血液酸碱度(pH值),以及灌注液IgG和IgM水平。灌注6 h后,检测食蟹猴脑组织含水量。取额叶皮质区和海马区进行尼氏染色,免疫荧光染色检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、离子钙结合适配器分子1(Iba1)和神经元核抗原(NEUN)的表达情况。结果六基因修饰猪与食蟹猴交叉配血结果呈阴性。在灌注3 h时灌注液红细胞数量下降较为明显,血红蛋白水平在1、3、5、6 h均呈下降趋势,白细胞和血小板数量在各时间点均呈下降趋势。亚低温灌注组血氧饱和度始终保持在95%~98%,血氧饱和度、Na^(+)、Ca^(2+)、葡萄糖水平以及pH值均保持稳定,K+水平先升高后降低。灌注前后IgG和IgM水平差异无统计学意义。亚低温灌注组灌注终末脑组织含水量显著高于阳性对照组(P<0.001)。尼氏染色结果显示,与阳性对照组比较,亚低温灌注组前额叶皮质区锥体神经元保持较好的形态结构完整性,肿大变型细胞无明显增多;海马CA1区肿大变型细胞稍增多,少数结构未被破坏细胞出现胞体缩小;海马齿状回区有较少颗粒神经元细胞结构完整性被破坏,细胞水肿增加。NEUN免疫荧光染色显示,与阳性对照组比较,亚低温灌注组前额叶皮质区和海马CA1区锥体神经元细胞形态结构状态较好,轴突清晰可见,海马齿状回区颗粒细胞保存完整,但细胞核保护欠佳。GFAP免疫荧光染色显示,与阳性对照组比较,亚低温灌注组突起片段较为稀疏,与神经元结合较为紧密。Iba1免疫荧光染色显示,与阳性对照组比较,亚低温灌注组突起片段较粗壮,数量较少。结论与阳性对照组相比,基因修饰猪血红细胞灌注液亚低温有氧机械灌注后食蟹猴脑组织水肿增加,神经元细胞和胶质细胞结构形态保存相对完整,保护作用可能与该技术持续供氧供能、平衡离子稳态和灌注液p H值、降低排斥反应及维持全脑低代谢相关。
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关键词
基因修饰猪
亚低温有氧机械灌注
缺血缺氧
脑损伤
创伤性失血
神经元细胞
离子稳态
血氧饱和度
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职称材料
题名
小鼠多亚型热休克蛋白/肽疫苗联合PD-L1免疫检查点抑制剂的抗肿瘤实验研究
被引量：
1
1
作者
李浩江
王振勇
沈师
高超
张彬
王泽昊
眭翔
崔雪梅
袁玫
刘舒云
郭全义
王桂琴
机构
山西医科大学微生物学与免疫学教研室山西医科大学微生物学与免疫学教研室
骨科再生医学北京市重点实验室全军骨科战创伤重点实验室
出处
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期278-283,共6页
基金
国家自然科学基金(编号:81772319)资助~~
文摘
目的:应用小鼠肉瘤组织制备混合多亚型热休克蛋白/肽疫苗(mHSP/P),联合程序性死亡配体(PD-L1)抑制剂治疗小鼠肉瘤。方法:免疫组织化学染色和Elisa蛋白定量鉴定肉瘤细胞MCA207中的热休克蛋白(HSP70、HSP90、Grp94)的表达。制备蛋白悬液,通过蛋白层析技术获取mHSP/P和Grp94/肽肉瘤疫苗(Grp94/P),以Western blot(WB)鉴定。流式细胞术测定细胞毒性作用。Elisa实验测定mHSP/P和Grp94/P刺激产生的干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)。小鼠实验探究肉瘤疫苗对肉瘤生长以及小鼠生存状况的影响。免疫荧光染色MCA207肉瘤细胞表面PD-L1的表达,WB测定IFN-γ对PD-L1表达的影响。动物实验探究PD-L1抑制剂联合mHSP/P对肿瘤的影响。结果:肿瘤组织携带多种亚型的HSP(HSP70、HSP90、Grp94);成功制备肉瘤组织来源的mHSP/P和Grp94/P,Western blot对肿瘤疫苗鉴定并且流式细胞学测定未发现细胞毒性;制备的mHSP/P较Grp94/P刺激产生更多的IFN-γ和TNF-α细胞因子(P<0.05)。肉瘤细胞表面PD-L1的表达随着IFN-γ的介入而增高;动物实验显示PD-L1抑制剂联合mHSP/P提高了免疫反应的抗肿瘤作用(P<0.05)。结论:肿瘤来源的mHSP/P和Grp94/P可以作为肿瘤疫苗在动物实验中使用。mHSP/P比Grp94/P能诱发更强的抗肿瘤免疫反应。IFN-γ刺激肉瘤细胞PD-L1的表达而导致免疫逃逸。PD-L1抑制剂联合mHSP/P提高了抗肿瘤作用。
关键词
mHSP/P
Grp94/P
层析
PD-L1免疫检查点抑制剂
IFN-γ
IFN-α
Keywords
multi-subtype heat shock protein/peptide(mHSP/P)
Grp94/peptide(Grp94/P)
chromatography
PD-L1 immunological checkpoint inhibitor
IFN-γ
TNF-α
分类号
R730.5 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
探索基于基因修饰猪血红细胞灌注液亚低温有氧机械灌注对食蟹猴缺血缺氧脑损伤的保护作用
2
作者
李申
董阳辉
宋翔宇
李鹏凯
米召迪
朱奕宣
崔梦一
彭熙为
程龙
袁满
许文静
彭江
赵亚群
机构
河北北方学院研究生院
中国人民解放军总医院第一
医学
中心神经外科
医学
部
骨科
再生
医学
北京市
重点
实验室
和
全军
骨科
战
创伤
重点
实验室
中国人民解放军总医院第四
医学
中心
骨科
医学
部研究所
河北大学临床
医学
院
解放军
医学
院研究生院
长治
医学
院
骨科
医学
部研究所
出处
《器官移植》
北大核心
2025年第5期728-737,共10页
基金
国家重点研发计划(2019YFA0110704)。
文摘
目的探讨基因修饰猪血红细胞作为亚低温有氧机械灌注液对创伤性失血引起的食蟹猴脑组织缺氧缺血脑损伤的保护作用。方法按随机数字表法将食蟹猴分为阳性对照组(左脑半球)、阴性对照组(右脑半球)(共3只)和亚低温灌注组(3只)。阳性对照组为自循环停止1 h直接取材,阴性对照组为自循环停止1 h亚低温放置6 h,亚低温灌注组为自循环停止1 h后利用基于基因修饰猪血红细胞灌注液对食蟹猴脑缺氧缺血损伤模型双侧颈总动脉进行6 h亚低温有氧机械灌注。灌注前进行六基因修饰猪与食蟹猴交叉配血实验,灌注开始后检测0、1、2、3、4、5、6 h各时间点灌注液血常规指标水平变化,记录血氧饱和度,检测灌注液Na^(+)、K^(+)、Ca^(2+)、葡萄糖水平和血液酸碱度(pH值),以及灌注液IgG和IgM水平。灌注6 h后,检测食蟹猴脑组织含水量。取额叶皮质区和海马区进行尼氏染色,免疫荧光染色检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、离子钙结合适配器分子1(Iba1)和神经元核抗原(NEUN)的表达情况。结果六基因修饰猪与食蟹猴交叉配血结果呈阴性。在灌注3 h时灌注液红细胞数量下降较为明显,血红蛋白水平在1、3、5、6 h均呈下降趋势,白细胞和血小板数量在各时间点均呈下降趋势。亚低温灌注组血氧饱和度始终保持在95%~98%,血氧饱和度、Na^(+)、Ca^(2+)、葡萄糖水平以及pH值均保持稳定,K+水平先升高后降低。灌注前后IgG和IgM水平差异无统计学意义。亚低温灌注组灌注终末脑组织含水量显著高于阳性对照组(P<0.001)。尼氏染色结果显示,与阳性对照组比较,亚低温灌注组前额叶皮质区锥体神经元保持较好的形态结构完整性,肿大变型细胞无明显增多;海马CA1区肿大变型细胞稍增多,少数结构未被破坏细胞出现胞体缩小;海马齿状回区有较少颗粒神经元细胞结构完整性被破坏,细胞水肿增加。NEUN免疫荧光染色显示,与阳性对照组比较,亚低温灌注组前额叶皮质区和海马CA1区锥体神经元细胞形态结构状态较好,轴突清晰可见,海马齿状回区颗粒细胞保存完整,但细胞核保护欠佳。GFAP免疫荧光染色显示,与阳性对照组比较,亚低温灌注组突起片段较为稀疏,与神经元结合较为紧密。Iba1免疫荧光染色显示,与阳性对照组比较,亚低温灌注组突起片段较粗壮,数量较少。结论与阳性对照组相比,基因修饰猪血红细胞灌注液亚低温有氧机械灌注后食蟹猴脑组织水肿增加,神经元细胞和胶质细胞结构形态保存相对完整,保护作用可能与该技术持续供氧供能、平衡离子稳态和灌注液p H值、降低排斥反应及维持全脑低代谢相关。
关键词
基因修饰猪
亚低温有氧机械灌注
缺血缺氧
脑损伤
创伤性失血
神经元细胞
离子稳态
血氧饱和度
Keywords
Genetically modified pig
Subnormothermic normoxic mechanical perfusion
Ischemia and hypoxia
Brain injury
Traumatic hemorrhage
Neuronal cell
Ion homeostasis
Blood oxygen saturation
分类号
R617 [医药卫生—外科学]
R651 [医药卫生—外科学]
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题名
作者
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发文年
被引量
操作
1
小鼠多亚型热休克蛋白/肽疫苗联合PD-L1免疫检查点抑制剂的抗肿瘤实验研究
李浩江
王振勇
沈师
高超
张彬
王泽昊
眭翔
崔雪梅
袁玫
刘舒云
郭全义
王桂琴
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
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职称材料
2
探索基于基因修饰猪血红细胞灌注液亚低温有氧机械灌注对食蟹猴缺血缺氧脑损伤的保护作用
李申
董阳辉
宋翔宇
李鹏凯
米召迪
朱奕宣
崔梦一
彭熙为
程龙
袁满
许文静
彭江
赵亚群
《器官移植》
北大核心
2025
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