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采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库被引量：9: 1; 作者陈振瑞李长征 +5 位作者贺微周烨张哲欢刘叔文谭万龙周辰《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1059-1062,1065,共5页; 目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库。方法分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感... 展开更多; 关键词哺乳动物细胞表面展示肾癌抗体基因库全长人源抗体流式细胞仪; 在线阅读下载PDF 职称材料

紫外线照射所致的DNA损伤对连接转化的影响被引量：10: 2; 作者黄婉玲李长征 +5 位作者陈振瑞贺微周烨周志刚刘叔文周辰《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期111-113,117,共4页; 目的探讨DNA经不同波长紫外线照射与经紫外线照射不同时间所致损伤对基因库构建中DNA连接转化效率的影响。方法经改造的质粒DNA使用SfiI酶切过夜,1%琼脂糖凝胶电泳分离,在不同波长不同时间紫外线照射的条件下回收目的片断,并进行目的片... 展开更多; 关键词紫外线连接转化基因库; 在线阅读下载PDF 职称材料

哺乳动物细胞表面展示全长类风湿关节炎抗体库的构建被引量：4: 3; 作者周烨陈振瑞 +7 位作者贺微娄海波张哲欢刘叔文姜世勃吴曙光李长征周辰《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1369-1373,共5页; 目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源类风湿关节炎抗体库。方法分离类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长轻链基因和重链可变区基因,分别插入哺乳动物细胞表达载体pDGB-HC-TM,电击转化... 展开更多; 关键词哺乳动物细胞表面展示类风湿关节炎抗体基因库全长人源抗体流式细胞仪; 在线阅读下载PDF 职称材料

快速构建哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库被引量：5: 4; 作者贺微李长征 +6 位作者陈振瑞周烨谭万龙姜世勃周志刚刘叔文周辰《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期308-312,共5页; 目的快速构建哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库。方法分离外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体重链可变区(VH)和全长Kappa型轻链(LCκ)基因库,分别插入载体pDGB-HC-TM,化学转化感受态大肠杆菌DH5α,... 展开更多; 关键词快速构建哺乳动物细胞展示全长人源抗体库; 在线阅读下载PDF 职称材料

系统性红斑狼疮儿童特异性全长抗体基因库的构建与分析被引量：3: 5; 作者周志刚朱美华 +8 位作者梁中锟陈振瑞贺微李长征谭万龙姜世勃刘叔文周烨周辰《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1082-1087,共6页; 目的构建系统性红斑狼疮(SLE)儿童个体特异性哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库。方法采集SLE确诊患儿外周血,分离外周血淋巴细胞,提取外周血淋巴细胞总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因、构建抗体轻链... 展开更多; 关键词系统性红斑狼疮儿童哺乳动物细胞表面展示全长人源抗体库; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库被引量：9: 1; 作者陈振瑞李长征贺微周烨张哲欢刘叔文谭万龙周辰; 机构南方医科大学南方医院泌尿外科南方医科大学基因工程研究所南方医科大学药学院抗病毒中心香港dgen生物技术有限公司; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1059-1062,1065,共5页; 基金香港Dgen Biotech Ltd科研基金; 文摘目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库。方法分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO10,构建轻、重链抗体基因库,然后将轻、重链抗体基因库联合转染293T细胞,流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库,随机挑选的克隆经DNA序列分析显示轻、重链库的序列正确性达90%(9/10)和80%(8/10),流式细胞仪分析显示来自轻、重链库的上述克隆各有7个可检测到相应基因在293T细胞表面的表达,可表达抗体库库容量高达7.5×1010。结论 IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,抗体的多样性为下一步筛选特异性抗体奠定良好的基础。; 关键词哺乳动物细胞表面展示肾癌抗体基因库全长人源抗体流式细胞仪; Keywords mammalian display renal cell carcinoma antibody library full-length fully human antibody flow cytometry; 分类号 R737.11 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名紫外线照射所致的DNA损伤对连接转化的影响被引量：10: 2; 作者黄婉玲李长征陈振瑞贺微周烨周志刚刘叔文周辰; 机构南方医科大学药学院南方医科大学基因工程研究所南方医科大学南方医院广州医学院第二附属医院香港dgen生物技术有限公司; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期111-113,117,共4页; 基金 Dgen Biotech Ltd.科研基金; 文摘目的探讨DNA经不同波长紫外线照射与经紫外线照射不同时间所致损伤对基因库构建中DNA连接转化效率的影响。方法经改造的质粒DNA使用SfiI酶切过夜,1%琼脂糖凝胶电泳分离,在不同波长不同时间紫外线照射的条件下回收目的片断,并进行目的片断的连接转化,计数菌落数,计算转化效率。结果经302nm波长紫外线照射后,其连接转化的菌落数极少(60个/ngDNA),365nm波长紫外线照射条件下回收的DNA仍可被有效连接转化。在365nm波长紫外线照射下,与未经照射进行比较,当照射时间在30min,其连接转化成功率低于50%,而照射5min、15min的连接转化成功率仍高于70%,可满足大部分分子生物学实验的需要。回收的DNA连接转化的最大效率可超过20000个菌落/1ngDNA。结论在构建大容量基因库回收目的片断时,应避免紫外线的照射;在需要时,应选择在365nm波长紫外线照射条件下进行,且照射时间应尽量缩短,以不超过15min为宜。; 关键词紫外线连接转化基因库; Keywords ultraviolet radiation ligation and transformation library; 分类号 Q345 [生物学—遗传学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名哺乳动物细胞表面展示全长类风湿关节炎抗体库的构建被引量：4: 3; 作者周烨陈振瑞贺微娄海波张哲欢刘叔文姜世勃吴曙光李长征周辰; 机构南方医科大学基因工程研究所南方医院药学院中医药学院复旦大学上海医学院分子病毒学教育部/卫生部重点实验室香港dgen生物技术有限公司; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1369-1373,共5页; 基金香港Dgen Biotech Ltd科研基金广东省医学科研基金(A2011363); 文摘目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源类风湿关节炎抗体库。方法分离类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长轻链基因和重链可变区基因,分别插入哺乳动物细胞表达载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO-10,分别构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,然后将抗体轻链、重链基因库联合转染293T细胞,用流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建了类风湿关节炎患者来源的IgG1-Kappa型抗体基因库,随机挑选单克隆经DNA序列分析显示轻链库、重链库的序列正确率分别为80%和60%,可表达的抗体库多样性为6.13×1010。结论类风湿关节炎抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,所展示的抗体库具有良好的多样性,能够为下一步筛选特异性抗体奠定基础。; 关键词哺乳动物细胞表面展示类风湿关节炎抗体基因库全长人源抗体流式细胞仪; Keywords mammalian display rheumatoid arthritis antibody library full-length fully human antibody flow cytometry; 分类号 R593.22 [医药卫生—内科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名快速构建哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库被引量：5: 4; 作者贺微李长征陈振瑞周烨谭万龙姜世勃周志刚刘叔文周辰; 机构南方医科大学药学院南方医科大学基因工程研究所南方医科大学南方医院纽约血液中心LFK研究所广州医学院第二附属医院香港dgen生物技术有限公司; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期308-312,共5页; 基金香港Dgen Biotech Ltd科研基金南方医科大学杰青培育基金~~; 文摘目的快速构建哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库。方法分离外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体重链可变区(VH)和全长Kappa型轻链(LCκ)基因库,分别插入载体pDGB-HC-TM,化学转化感受态大肠杆菌DH5α,构建抗体的轻、重链基因库,然后将其联合转染CHO细胞,流式细胞仪分析全长人源抗体在CHO细胞表面的表达。结果构建的非特异性IgG1-Kappa抗体基因库,重链库容量达2.6×105,轻链库容量达2.0×105,理论库容量高达5.2×1010。随机从重链库和轻链库各挑选10个克隆送测序,重链10个克隆的DNA序列分析显示8个含有正确的阅读框架,轻链10个克隆的DNA序列分析显示全部含有正确的阅读框架。流式细胞仪分析显示来自轻链库的10个克隆、重链库的8个克隆均可检测到抗体在CHO细胞表面的表达。用所构建的轻重链抗体库共转染CHO细胞,流式细胞仪分析可检测到抗体在细胞表面的表达,阳性细胞比例达到31.5%,说明所构建的抗体库能够在CHO细胞表面成功展示全长抗体。结论采用本研究建立的哺乳动物细胞展示技术,可在2周内成功构建库容量大且多样性好的全人源抗体基因库,用于高亲和力特异性抗体的筛选。; 关键词快速构建哺乳动物细胞展示全长人源抗体库; Keywords library construction antibody library mammalian cell surface display full-length human antibody library; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名系统性红斑狼疮儿童特异性全长抗体基因库的构建与分析被引量：3: 5; 作者周志刚朱美华梁中锟陈振瑞贺微李长征谭万龙姜世勃刘叔文周烨周辰; 机构广州医学院第二附属医院儿科南方医科大学南方医院南方医科大学药学院南方医科大学中医药学院复旦大学上海医学院分子病毒学教育部//卫生部重点实验室南方医科大学基因工程研究所香港dgen生物技术有限公司; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1082-1087,共6页; 基金国家自然科学基金(31100661) 香港Dgen Biotech Ltd科研基金(DGB12012008) +2 种基金广东省自然科学基金(S2011040002748)~~; 文摘目的构建系统性红斑狼疮(SLE)儿童个体特异性哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库。方法采集SLE确诊患儿外周血,分离外周血淋巴细胞,提取外周血淋巴细胞总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因、构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,将抗体基因库转染293T细胞,流式细胞仪分析抗体在293T细胞表面的表达。结果以0.8μg总RNA为模板,用6套引物成功扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,构建获得的重链基因库容量为9.4×104,轻链基因库容量为8.4×104。随机挑选的10个重链克隆有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,10个轻链克隆7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列。流式细胞仪分析挑选的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在293T细胞表面的表达,理论上抗体库中可表达的抗体多样性可以达到109。结论以0.8μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建SLE儿童特异性全长人抗体基因库,并在293T细胞表面成功展示SLE儿童个体抗体库中的全长抗体,为进一步研究SLE儿童自身抗体的特点及自身抗体在SLE发病机制中的作用及临床应用打下良好基础。; 关键词系统性红斑狼疮儿童哺乳动物细胞表面展示全长人源抗体库; Keywords systemic lupus erythematosus children mammalian display full-length fully human antibody library; 分类号 R725.9 [医药卫生—儿科]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库	陈振瑞李长征贺微周烨张哲欢刘叔文谭万龙周辰	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2010	9	在线阅读下载PDF 职称材料
2	紫外线照射所致的DNA损伤对连接转化的影响	黄婉玲李长征陈振瑞贺微周烨周志刚刘叔文周辰	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2010	10	在线阅读下载PDF 职称材料
3	哺乳动物细胞表面展示全长类风湿关节炎抗体库的构建	周烨陈振瑞贺微娄海波张哲欢刘叔文姜世勃吴曙光李长征周辰	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	4	在线阅读下载PDF 职称材料
4	快速构建哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库	贺微李长征陈振瑞周烨谭万龙姜世勃周志刚刘叔文周辰	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	5	在线阅读下载PDF 职称材料
5	系统性红斑狼疮儿童特异性全长抗体基因库的构建与分析	周志刚朱美华梁中锟陈振瑞贺微李长征谭万龙姜世勃刘叔文周烨周辰	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2012	3	在线阅读下载PDF 职称材料