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镜像神经元系统解剖结构研究进展 被引量:3
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作者 陈巍 袁逖飞 +2 位作者 丁峻 张均华 汪寅 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期325-329,共5页
关键词 神经元系统 镜像 解剖结构 MIRROR 灵长类动物 非人灵长类 神经科学 皮层
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慢病毒载体构建稳定的maspin表达敲减食管癌细胞株 被引量:4
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作者 陈静 周园 +2 位作者 郑磊 王前 蔡贞 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第2期138-142,共5页
目的前期研究表明maspin在食管癌组织中表达下调。文中利用慢病毒载体介导短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)感染食管癌细胞株,诱导maspin基因沉默,构建稳定的maspin表达敲减细胞株。方法合成maspin特异shRNA序列(shMas1和shMas2),构... 目的前期研究表明maspin在食管癌组织中表达下调。文中利用慢病毒载体介导短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)感染食管癌细胞株,诱导maspin基因沉默,构建稳定的maspin表达敲减细胞株。方法合成maspin特异shRNA序列(shMas1和shMas2),构建shMas1和shMas2慢病毒表达载体;利用293FT细胞包装病毒后,感染食管癌细胞株HKESC-2;经嘌呤霉素筛选获得稳定感染细胞株。定量PCR和免疫印迹法检测干扰效果。结果成功构建shMaspin的慢病毒表达载体;与野生型HKESC-2细胞比较,获得的稳定maspin表达敲减细胞株shMas1/HK2和shMas2/HK2生长特性无明显变化,其maspin mRNA及蛋白质表达水平均明显降低,maspin mRNA敲减效率分别为37.8%及58.2%,maspin蛋白质表达的相对抑制率分别为49%和53%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了稳定的maspin表达敲减的食管癌细胞株shMas1/HK2和shMas2/HK2。 展开更多
关键词 MASPIN 慢病毒载体 短发夹RNA 食管鳞状细胞癌
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利用亚细胞组分蛋白分离技术有效提取细胞骨架及其相关蛋白 被引量:2
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作者 蔡贞 熊石龙 +3 位作者 周园 籍会彩 向春艳 郑磊 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期698-702,共5页
目的建立一种可用于后续双向电泳研究的细胞骨架及相关蛋白的提取方法。方法采用亚细胞组分蛋白分步提取方法,根据提取过程中细胞形态变化,提取后组分蛋白电泳图谱等优化提取条件。用双向凝胶电泳、免疫印迹分析、蛋白质点质谱鉴定等方... 目的建立一种可用于后续双向电泳研究的细胞骨架及相关蛋白的提取方法。方法采用亚细胞组分蛋白分步提取方法,根据提取过程中细胞形态变化,提取后组分蛋白电泳图谱等优化提取条件。用双向凝胶电泳、免疫印迹分析、蛋白质点质谱鉴定等方法验证该提取方法的重复性和各组分蛋白提取纯度。结果各组分蛋白的双向电泳蛋白图谱差异明显,具备各自特征性的蛋白点分布,各组分标志蛋白FAK、Integrin-β1、Histone H1和cytokeratin 19分别只表达在细胞浆、细胞膜、细胞核和细胞骨架组分。细胞骨架蛋白组分中约90%以上的蛋白质点经质谱鉴定为细胞骨架及相关蛋白。结论亚细胞组分蛋白顺序提取方法具有较好的重复性,提取组分选择性较高,并且能够有效提高低丰度蛋白的检出效率,是一种比较理想的进行蛋白质组学研究的样本预处理方法。 展开更多
关键词 组分蛋白提取 细胞骨架蛋白 双向凝胶电泳
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葡萄糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响
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作者 李华 Amy Lam +2 位作者 吴浩佳 郝敏 Sookja Kim Chung 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2009年第7期760-765,共6页
目的:目前小鼠胚胎干细胞(mouse embry-onic stem cells,mESC)常规应用高浓度葡萄糖(25 mmol/L)培养基培养,但是在应用干细胞向糖尿病胰岛beta细胞分化的研究中发现,慢性高糖培养可促进干细胞的凋亡、降低细胞分化的效率及分化后胰岛bet... 目的:目前小鼠胚胎干细胞(mouse embry-onic stem cells,mESC)常规应用高浓度葡萄糖(25 mmol/L)培养基培养,但是在应用干细胞向糖尿病胰岛beta细胞分化的研究中发现,慢性高糖培养可促进干细胞的凋亡、降低细胞分化的效率及分化后胰岛beta细胞对葡萄糖的反应性,因此本研究拟选择合适的较低浓度的葡萄糖以优化胚胎干细胞的培养基、提高胚胎干细胞的生长、分化效率。方法:mESC传代4或12 h后,将传统的25 mmol/L葡萄糖培养基分别换为5、10、15、25 mmol/L葡萄糖培养基培养,均用碱性磷酸酶(AP)染色计数细胞集落形成情况、台盼兰染色测定细胞数目,MTT法测定细胞活力及用4’,6-联脒-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色检测细胞凋亡情况。结果:mESC传代4 h后即调换葡萄糖浓度:(1)各葡萄糖浓度组(5、10、15 mmol/L)与25 mmol/L组相比,集落形成明显减少。(2)各葡萄糖浓度组与25 mmol/L组相比,mESC增殖及细胞活力均受到不同程度明显影响。mESC传代12 h后调换葡萄糖浓度:(1)各葡萄糖浓度组(5、10、15 mmol/L)与25 mmol/L组相比,集落形成无明显变化,且AP染色呈强阳性。(2)15 mmol/L葡萄糖组对mESC增殖及细胞活力均无明显影响。(3)15 mmol/L葡萄糖组与25 mmol/L葡萄糖组细胞核形态正常,均未见明显凋亡。结论:ESC传代12 h后将培养基中传统的高糖(25 mmol/L)降低为15 mmol/L,不影响mESC细胞活力及多能分化潜能和未分化状态。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 葡萄糖 浓度
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RhoA在损伤脊髓内表达的时空分布(英文) 被引量:4
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作者 康晓宁 文锦坤 +6 位作者 王祥海 潘梦婕 张玮玮 占小多 刘忠英 吴武田 郭家松 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期463-468,共6页
目的研究脊髓损伤后不同时期RhoA在脊髓不同部位各种细胞中的表达。方法建立小鼠脊髓全横断性脊髓损伤模型,术后1,3,7,14,28,56,112 d后取材制备脊髓冰冻切片,利用RhoA/NF200、RhoA/GFAP、RhoA/CNPase和RhoA/IBA1双荧光标记免疫组织化... 目的研究脊髓损伤后不同时期RhoA在脊髓不同部位各种细胞中的表达。方法建立小鼠脊髓全横断性脊髓损伤模型,术后1,3,7,14,28,56,112 d后取材制备脊髓冰冻切片,利用RhoA/NF200、RhoA/GFAP、RhoA/CNPase和RhoA/IBA1双荧光标记免疫组织化学分别显示RhoA在神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞及小胶质细胞中的表达,并对各种细胞中RhoA阳性细胞百分率及RhoA阳性细胞的荧光强度进行定量分析。结果在正常小鼠脊髓内,只有极少数神经元或少突胶质细胞呈RhoA弱阳性表达。脊髓损伤后,神经元、星型胶质细胞及少突胶质细胞中的RhoA阳性率及荧光强度均显著增高并在损伤后第7天达到峰值,随后又逐渐降低,在损伤后112 d接近正常水平。小胶质细胞中RhoA的表达方式略有不同,RhoA阳性率及荧光强度均在第14天达到峰值,随后虽降低但在第112天仍保持较高的水平。结论创伤不仅导致脊髓神经元中RhoA阳性细胞数的明显增加和RhoA表达强度的提高,还可不同程度地增强各种胶质细胞中的RhoA表达。在不同时间段,不同部位及不同细胞内RhoA表达的方式均有不同。 展开更多
关键词 脊髓损伤 神经元 星形胶质细胞 少突胶质细胞 小胶质细胞 RHOA 时空分布
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