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用于全基因组易位测序的Nalm6-Cas9细胞系的构建
1
作者
李倾城
黄俊彬
+5 位作者
薛红漫
杨默
朱澂明
李志光
董俊超
陈纯
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期1384-1390,共7页
目的:为进行基于CRISPR-Cas9的全基因组高通量易位测序,利用慢病毒转导构建表达Cas9蛋白的Nalm6-Cas9单克隆细胞系。方法:使用慢病毒载体lentiCas9-Blast、psPAX2和pMD2.G共转染HEK293T细胞包装病毒,病毒感染Nalm6细胞后使用杀稻瘟菌素(...
目的:为进行基于CRISPR-Cas9的全基因组高通量易位测序,利用慢病毒转导构建表达Cas9蛋白的Nalm6-Cas9单克隆细胞系。方法:使用慢病毒载体lentiCas9-Blast、psPAX2和pMD2.G共转染HEK293T细胞包装病毒,病毒感染Nalm6细胞后使用杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选,通过有限稀释法获得多个表达Cas9蛋白的单克隆细胞株。Western blot检测单克隆细胞株中Cas9蛋白的表达水平,细胞计数检测单克隆细胞株的细胞增殖活性。构建lentiCRISPRv2GFP-Δcas9、lentiCRISPRv2GFP-Δcas9-AF4、lentiCRISPRv2GFP-Δcas9-MLL质粒,并分别与pSPAX2、pMD2.G质粒共转染包装病毒,收集病毒感染Nalm6-Cas9单克隆细胞株,使用T载体克隆检测单克隆细胞株的Cas9蛋白的功能。结果:Western blot结果显示,Nalm6-Cas9_1-6单克隆细胞株高水平表达Cas9蛋白;细胞计数分析结果显示,Nalm6-Cas9_1-6单克隆细胞株细胞增殖活性与对照细胞比较无显著差异;T载体克隆检测显示,Nalm6-Cas9_1-6单克隆细胞株Cas9蛋白具有高水平切割活性,对AF4和MLL基因的编辑效率在90%以上。结论:本研究得到了稳定表达高活性Cas9蛋白的Nalm6-Cas9_1-6单克隆细胞株,为基于CRISPR/Cas9全基因组高通量易位测序技术探究治疗相关性白血病中MLL易位连接机制提供依据。
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关键词
Nalm6细胞系
Cas9蛋白
慢病毒
治疗相关性白血病
全基因组高通量易位测序
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职称材料
BLIMP-1在再生障碍性贫血患儿Treg细胞中的表达及意义
被引量：
3
2
作者
黄丽奋
黄俊彬
+4 位作者
唐楠楠
薛红漫
朱澂明
李志光
陈纯
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期1251-1256,共6页
目的:研究B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1(BLIMP-1)在再生障碍性贫血(AA)患儿Treg细胞中的表达并分析其与Treg细胞数量、血浆中抑制性细胞因子白介素(IL)-10和转化生长因子(TGF)-β水平的相关性。方法:收集10例初诊AA患儿和10例健康儿童的外...
目的:研究B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1(BLIMP-1)在再生障碍性贫血(AA)患儿Treg细胞中的表达并分析其与Treg细胞数量、血浆中抑制性细胞因子白介素(IL)-10和转化生长因子(TGF)-β水平的相关性。方法:收集10例初诊AA患儿和10例健康儿童的外周血标本。采用qPCR法检测FOXP3、PRDM1的mRNA表达水平。采用流式细胞术检测Treg细胞比例、Treg细胞中BLIMP-1表达以及血浆中IL-2、IL-17A、IL-6、γ干扰素、IL-10和TGF-β等细胞因子水平。采用Pearson相关模型分析Treg细胞中BLIMP-1表达与Treg细胞数量、血浆中IL-10和TGF-β水平的相关性。结果:与对照组相比,AA患儿外周血Treg细胞比例显著下降(P <0.001);AA患儿血浆中促炎细胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ水平显著升高(P=0.033,P=0.031,P=0.006),IL-17A水平亦升高但不显著(P=0.052),而抑炎细胞因子IL-10和TGF-β水平明显降低(P=0.048,P=0.002);AA患儿FOXP3和PRDM1 mRNA的相对表达量显著低于对照组(P=0.037,P=0.016);AA患儿Treg细胞的BLIMP-1蛋白表达显著低于对照组(P<0.001)。Treg细胞中BLIMP-1蛋白的表达水平与Treg细胞占淋巴细胞百分比呈正相关(r=0.671,P=0.001),与血浆中IL-10和TGF-β水平亦呈正相关(r=0.500,P=0.029;r=0.486,P=0.030)。结论:AA患儿Treg细胞中BLIMP-1表达受损,且BLIMP-1表达低下与Treg细胞数量减少和IL-10、TGF-β水平减少具有相关性。
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关键词
儿童再生障碍性贫血
B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1
调节性T细胞
白介素-10
转化生长因子-β
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职称材料
题名
用于全基因组易位测序的Nalm6-Cas9细胞系的构建
1
作者
李倾城
黄俊彬
薛红漫
杨默
朱澂明
李志光
董俊超
陈纯
机构
中山
大学
附属第七医院(深圳)
儿科
儿童
血液
肿瘤
专科
中山
大学
附属第七医院(深圳)科研中心
香港中文大学儿科血液学/肿瘤学/bmt系
中山
大学
中山医
学
院
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期1384-1390,共7页
文摘
目的:为进行基于CRISPR-Cas9的全基因组高通量易位测序,利用慢病毒转导构建表达Cas9蛋白的Nalm6-Cas9单克隆细胞系。方法:使用慢病毒载体lentiCas9-Blast、psPAX2和pMD2.G共转染HEK293T细胞包装病毒,病毒感染Nalm6细胞后使用杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选,通过有限稀释法获得多个表达Cas9蛋白的单克隆细胞株。Western blot检测单克隆细胞株中Cas9蛋白的表达水平,细胞计数检测单克隆细胞株的细胞增殖活性。构建lentiCRISPRv2GFP-Δcas9、lentiCRISPRv2GFP-Δcas9-AF4、lentiCRISPRv2GFP-Δcas9-MLL质粒,并分别与pSPAX2、pMD2.G质粒共转染包装病毒,收集病毒感染Nalm6-Cas9单克隆细胞株,使用T载体克隆检测单克隆细胞株的Cas9蛋白的功能。结果:Western blot结果显示,Nalm6-Cas9_1-6单克隆细胞株高水平表达Cas9蛋白;细胞计数分析结果显示,Nalm6-Cas9_1-6单克隆细胞株细胞增殖活性与对照细胞比较无显著差异;T载体克隆检测显示,Nalm6-Cas9_1-6单克隆细胞株Cas9蛋白具有高水平切割活性,对AF4和MLL基因的编辑效率在90%以上。结论:本研究得到了稳定表达高活性Cas9蛋白的Nalm6-Cas9_1-6单克隆细胞株,为基于CRISPR/Cas9全基因组高通量易位测序技术探究治疗相关性白血病中MLL易位连接机制提供依据。
关键词
Nalm6细胞系
Cas9蛋白
慢病毒
治疗相关性白血病
全基因组高通量易位测序
Keywords
Nalm6cell lines
Cas9protein
lentivirus
therapy-related leukemia
high-throughput genome-wide translocation sequencing
分类号
R733 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
BLIMP-1在再生障碍性贫血患儿Treg细胞中的表达及意义
被引量：
3
2
作者
黄丽奋
黄俊彬
唐楠楠
薛红漫
朱澂明
李志光
陈纯
机构
中山
大学
附属第七医院
儿科
中山
大学
附属第七医院科研中心
香港中文大学儿科血液学/肿瘤学/bmt系
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期1251-1256,共6页
基金
国家自然科学基金(8157010694)
深圳三名工程项目(SZSM202011004)
+1 种基金
深圳市科学技术创新委员会自由探索项目(JCYJ20180307150419435)
中山大学附属第七医院临床科研项目(ZSQYLCKYJJ202024)。
文摘
目的:研究B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1(BLIMP-1)在再生障碍性贫血(AA)患儿Treg细胞中的表达并分析其与Treg细胞数量、血浆中抑制性细胞因子白介素(IL)-10和转化生长因子(TGF)-β水平的相关性。方法:收集10例初诊AA患儿和10例健康儿童的外周血标本。采用qPCR法检测FOXP3、PRDM1的mRNA表达水平。采用流式细胞术检测Treg细胞比例、Treg细胞中BLIMP-1表达以及血浆中IL-2、IL-17A、IL-6、γ干扰素、IL-10和TGF-β等细胞因子水平。采用Pearson相关模型分析Treg细胞中BLIMP-1表达与Treg细胞数量、血浆中IL-10和TGF-β水平的相关性。结果:与对照组相比,AA患儿外周血Treg细胞比例显著下降(P <0.001);AA患儿血浆中促炎细胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ水平显著升高(P=0.033,P=0.031,P=0.006),IL-17A水平亦升高但不显著(P=0.052),而抑炎细胞因子IL-10和TGF-β水平明显降低(P=0.048,P=0.002);AA患儿FOXP3和PRDM1 mRNA的相对表达量显著低于对照组(P=0.037,P=0.016);AA患儿Treg细胞的BLIMP-1蛋白表达显著低于对照组(P<0.001)。Treg细胞中BLIMP-1蛋白的表达水平与Treg细胞占淋巴细胞百分比呈正相关(r=0.671,P=0.001),与血浆中IL-10和TGF-β水平亦呈正相关(r=0.500,P=0.029;r=0.486,P=0.030)。结论:AA患儿Treg细胞中BLIMP-1表达受损,且BLIMP-1表达低下与Treg细胞数量减少和IL-10、TGF-β水平减少具有相关性。
关键词
儿童再生障碍性贫血
B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1
调节性T细胞
白介素-10
转化生长因子-β
Keywords
pediatric aplastic anemia
B lymphocyte-induced mature protein-1
regulatory T cells
interleukin-10
transforming growth factor-β
分类号
R556.5 [医药卫生—血液循环系统疾病]
R725.5 [医药卫生—儿科]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
用于全基因组易位测序的Nalm6-Cas9细胞系的构建
李倾城
黄俊彬
薛红漫
杨默
朱澂明
李志光
董俊超
陈纯
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
BLIMP-1在再生障碍性贫血患儿Treg细胞中的表达及意义
黄丽奋
黄俊彬
唐楠楠
薛红漫
朱澂明
李志光
陈纯
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
3
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