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Mce4C蛋白参与结核分枝杆菌摄取利用胆固醇的实验研究
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作者 胡一凡 杜博平 +7 位作者 吴亚东 朱传智 张蓝月 贾红彦 孙琦 潘丽萍 张宗德 李自慧 《中国防痨杂志》 北大核心 2025年第4期444-453,共10页
目的:探讨Mce4C蛋白是否参与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)摄取利用胆固醇。方法:利用定量PCR技术分析不同浓度胆固醇(无胆固醇组、0.01%胆固醇组和0.1%胆固醇组)对MTB mce4C基因表达的影响。通过紫外-可见分光光度计... 目的:探讨Mce4C蛋白是否参与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)摄取利用胆固醇。方法:利用定量PCR技术分析不同浓度胆固醇(无胆固醇组、0.01%胆固醇组和0.1%胆固醇组)对MTB mce4C基因表达的影响。通过紫外-可见分光光度计测定培养菌液A 600值绘制生长曲线和扫描电镜分析,了解MTB H37Rv野生株(WT)、mce4C基因敲除株(Δmce4C)和敲除回补株(Δmce4C+mce4C)的生长速率和形态差异。通过试剂盒定量测定或NBD-胆固醇荧光值测定菌体本身、培养基及感染细胞裂解液中胆固醇含量变化,明确Mce4C蛋白是否参与MTB摄取利用胆固醇。通过MTB不同组分分离结合免疫印迹实验明确Mce4C蛋白亚细胞定位。结果:mce4C基因表达量随苏通培养基中胆固醇浓度的升高(无胆固醇组、0.01%胆固醇组和0.1%胆固醇组)而升高,培养1周时mce4C相对表达量分别为1.000±0.588、1.390±0.162和3.622±1.031,差异有统计学意义(F=28.200,P=0.001)。随着胆固醇苏通培养基培养时间(20、40、60、70、80 d)的延长,Δmce4C A 600值相比WT和Δmce4C+mce4C降低逐渐明显,至第80天时,Δmce4C的A 600值(0.913±0.017)明显低于WT(1.245±0.011)和Δmce4C+mce4C(1.246±0.029),差异均有统计学意义(t=28.182,P<0.001;t=17.140,P<0.001)。用胆固醇苏通培养基培养3种菌株时,Δmce4C菌体胆固醇含量相比WT和Δmce4C+mce4C降低,而其培养上清中胆固醇含量升高,至21 d时,Δmce4C菌体总胆固醇含量[(1.058±0.012)μg/ml]明显低于WT[(1.347±0.087)μg/ml]和Δmce4C+mce4C[(1.505±0.021)μg/ml],而培养上清中Δmce4C胆固醇含量[(16.371±0.753)μg/ml]明显高于WT[(7.740±0.422)μg/ml]和Δmce4C+mce4C[(7.274±0.131)μg/ml],差异均有统计学意义(t=4.621,P=0.044;t=25.679,P=0.002;t=-14.135,P=0.005;t=-16.827,P=0.004)。在感染THP-1细胞不同时间点(4、24、48、72 h),Δmce4C感染细胞裂解液中胆固醇含量均明显高于WT和Δmce4C+mce4C,即使在感染4 h最低点时,Δmce4C感染细胞裂解液中胆固醇含量[(7.749±0.017)μg/ml]也高于WT[(7.180±0.173)μg/ml]和Δmce4C+mce4C[(6.725±0.288)μg/ml],差异均有统计学意义(t=-6.556,P=0.001;t=-7.106,P<0.001)。结论:mce4C基因的表达随培养基胆固醇浓度的升高而升高,mce4C基因敲除降低了MTB在含胆固醇苏通培养基中的生长速率及MTB菌体胆固醇含量,增加了培养基中及感染细胞裂解液中的胆固醇含量,表明Mce4C蛋白参与了MTB从外环境中摄取利用胆固醇,其编码基因缺失可使MTB在以胆固醇作为唯一碳源时的生长存在明显缺陷,这可能是MTB在人体内长期存活并可能致病的重要因素。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 胆固醇 营养需要 能量摄取 免疫蛋白质类
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结核分枝杆菌对氯法齐明耐药的体外诱导实验研究 被引量:5
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作者 左小淑 王彬 +2 位作者 徐建 付雷 陆宇 《中国防痨杂志》 CAS 2015年第6期632-636,共5页
目的利用浓度梯度倍增的氯法齐明(clofazimine,Cfz)体外诱导获得结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)耐药株,并进行耐药机制的初步研究。方法选取Mtb标准株H37Rv,从亚最低抑菌浓度(sub-minimal inhibitory concentra... 目的利用浓度梯度倍增的氯法齐明(clofazimine,Cfz)体外诱导获得结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)耐药株,并进行耐药机制的初步研究。方法选取Mtb标准株H37Rv,从亚最低抑菌浓度(sub-minimal inhibitory concentration,sub-MIC)[1/8MIC(按照Cfz的MIC值为0.12μg/ml配置)、1/4MIC、1/2MIC…]开始,在Cfz浓度倍增的7Hll固体培养基上进行传代培养,逐步诱导菌株对Cfz的耐药性,并通过药物敏感性试验和全基因组测序来进行验证;同时利用Alamarblue微板分析法(microplate Alamar blue assay,MABA)测定诱导耐药菌株对10种抗结核药物(INH、RFP、EMB、Mfx、Lzd、Cs、Cm、TMC207、TBI-166、Cfz)的MIC情况。结果Mtb标准株经诱导后对Cfz的MIC值是诱导前的32-64倍(诱导前Cfz的MIC值是0.12ttg/m1)。对10种抗结核药物敏感性试验显示,Cfz诱导耐药菌株对TMC207(Bendaquiline)及TBI-166产生交叉耐药。耐药株在7H9液体培养基中进行无药连续培养10代后,测定其MIC值无明显变化,MIC数值都稳定在32MIC64MIC之间,对此诱导耐药株进行全基因组测序共检测到195个单核苷酸多态性(single nueleotide polymorphisma,SNP)突变和19个插入缺失(InDel)突变。结论从亚MIC药物浓度开始,逐渐递增的长期药物刺激能够诱导结核分枝杆菌对氯法齐明的获得性耐药,获得的耐药株耐药性稳定。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 氯法齐明 抗药性 细菌 体外研究
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抗耐药结核病新药吡法齐明通过醌氧化还原酶介导发挥作用的机制研究 被引量:3
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作者 张蕾 李媛媛 +5 位作者 陈曦 刘海婷 徐建 王宁 丁杨明 陆宇 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2021年第6期576-583,共8页
目的对吡法齐明(pyrifazimine,TBI-166)通过醌氧化还原酶(quinone oxidoreductase,QOR)介导累积活性氧(reactive oxygen species,ROS)发挥抗结核作用的机制进行探索。方法表达、纯化MtbQOR蛋白,设置空白对照组及加TBI-166(0.03、0.3、3... 目的对吡法齐明(pyrifazimine,TBI-166)通过醌氧化还原酶(quinone oxidoreductase,QOR)介导累积活性氧(reactive oxygen species,ROS)发挥抗结核作用的机制进行探索。方法表达、纯化MtbQOR蛋白,设置空白对照组及加TBI-166(0.03、0.3、3μg/ml)组,酶标仪监测波长340nm处吸光度(A_(340 nm))下NADPH的下降程度(ΔA);应用辅酶ⅡNADP(H)含量检测试剂盒检测不同浓度TBI-166作用H37Rv菌体后NADPH/NADP+的比值;应用细菌活性氧检测试剂盒检测结核分枝杆菌H37Rv标准株和临床分离株菌体内ROS荧光值。结果空白对照组ΔA(0.316±0.032)较0.03、0.3、3μg/ml TBI-166组(0.506±0.107、0.531±0.054、0.801±0.079)明显降低,差异有统计学意义(t=-3.799,P<0.05;t=-7.634,P<0.01;t=-12.683,P<0.01)。在48h内,加TBI-166组NADPH/NADP+比值(0.847±0.229)低于空白对照组比值(1.728±0.384)。H37Rv菌株中,TBI-166刺激组ROS荧光值(23072±2584)明显高于空白对照组(8282±448),差异有统计学意义(F=33.334,P<0.01)。在菌株号为12897菌株中,TBI-166刺激组ROS荧光值(18369±3118)明显高于空白对照组(12268±2735),差异有统计学意义(F=5.026,P<0.05);在菌株号为15171菌株中,3μg/ml TBI-166刺激组ROS荧光值(17572±249)明显高于空白对照组(11109±343),差异有统计学意义(F=122.601,P<0.01);在菌株号为11492及11195菌株中,TBI-166刺激组与空白对照组ROS荧光值差异无统计学意义(F=161.440,P>0.05;F=44.788,P>0.05)。结论TBI-166可以通过增加MtbQOR介导的氧化还原反应,降低NADPH/NADP+的比值,刺激菌体累积ROS发挥抗结核作用。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 药理作用分子机制 醌氧化还原酶 吡法齐明
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吡法齐明抗耐药结核分枝杆菌作用机制的初步研究 被引量:5
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作者 张叶 李媛媛 +4 位作者 徐建 陈曦 王彬 付雷 陆宇 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2019年第11期1160-1166,共7页
目的通过测定结核分枝杆菌活性氧含量及过氧化氢酶活性,初步探讨吡法齐明抗耐药结核分枝杆菌的作用机制。方法以1、2、4、8倍于最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)的氯法齐明和吡法齐明处理H37Rv标准株24h,应用荧光探... 目的通过测定结核分枝杆菌活性氧含量及过氧化氢酶活性,初步探讨吡法齐明抗耐药结核分枝杆菌的作用机制。方法以1、2、4、8倍于最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)的氯法齐明和吡法齐明处理H37Rv标准株24h,应用荧光探针2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)活性氧检测试剂盒测定不同浓度的氯法齐明和吡法齐明处理前后结核分枝杆菌菌体内的活性氧含量水平变化。以过氧化氢酶活性检测试剂盒测定5株对氯法齐明和吡法齐明均耐药、3株对氯法齐明耐药但对吡法齐明敏感、1株对氯法齐明和吡法齐明均敏感(编号13385)的结核分枝杆菌及H37Rv标准株的过氧化氢酶活性,比较氯法齐明和吡法齐明耐药菌株与敏感菌株的过氧化氢酶活性的差异。采用SPSS 19.0软件进行数据的统计学分析,并对吡法齐明药物处理浓度与所测得的荧光强度值进行Spearman相关性分析和线性回归分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果活性氧含量水平测定结果显示,结核分枝杆菌在经不同浓度氯法齐明和吡法齐明处理24h后,各浓度药物处理样本的荧光强度值均值排序分别为1MIC(6668.5)>8MIC(2751.5)>2MIC(2572.0)>4MIC(2015.0),8MIC(2637.5)>4MIC(2297.0)>2MIC(2085.5)>1MIC(1896.0),菌体内积累的活性氧含量均高于无药物刺激的阴性对照样品(H37Rv标准株+DCFH-DA,878.5)至少2倍;且在各浓度吡法齐明处理的菌株中,菌株测定的荧光强度值与药物浓度间呈现明显的正相关(Spearman相关性分析,r=0.976,P<0.001),经线性回归方程检验结果显示回归模型有统计学意义(F=92.576,P=0.011)。菌株过氧化氢酶活性测定结果显示,氯法齐明耐药菌株的过氧化氢酶平均活性(0.87U/10^4cell)是其敏感菌株(0.48U/10^4cell)的近2倍;而吡法齐明耐药菌株的过氧化氢酶活性均值(0.88U/10^4cell)略高于其敏感菌株(0.71U/10^4cell),但与氯法齐明耐药菌株均值相近。结论氯法齐明和吡法齐明作用于结核分枝杆菌后均会引起菌体内活性氧含量的积累,两药可能有着相似的作用机制;过氧化氢酶活性增高可能与结核分枝杆菌对氯法齐明和吡法齐明耐药有关。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 抗药性 药理作用分子作用机制 药物评价 临床前 氯法齐明 吡法齐明
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体外诱导获取对利奈唑胺耐药的结核分枝杆菌菌株及其稳定性研究 被引量:3
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作者 胡明豪 王彬 +2 位作者 付雷 徐建 陆宇 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第4期397-401,共5页
目的利用浓度2倍递增的方法体外诱导获得对利奈唑胺(linezolid,Lzd)耐药的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)菌株,考察其耐药稳定性及用于筛选新化合物的抗结核活性。方法将MTB标准株H37Rv(ATCC27294)在Lzd浓度2... 目的利用浓度2倍递增的方法体外诱导获得对利奈唑胺(linezolid,Lzd)耐药的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)菌株,考察其耐药稳定性及用于筛选新化合物的抗结核活性。方法将MTB标准株H37Rv(ATCC27294)在Lzd浓度2倍递增的含药固体培养基上进行传代培养,逐步诱导菌株对Lzd耐药,运用微孔板阿尔玛蓝(microplate alamar blueassay,MABA)法测定部分抗结核药物对体外诱导Lzd耐药株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),对体外诱导获得的Lzd耐药株测序鉴定rpfa基因的突变情况。将诱导Lzd耐药菌株在无药固体培养基上连续传代培养10代以观察耐药稳定性变化,包括MIC变化和rjbfG基因突变情况。结果MTB标准株诱导后得到7株单克隆MTB菌株,其对Lzd的MIC值范围是5.99~18.28μg/ml,为诱导前(0.25μg/m1)8倍以上,成功获得Lzd耐药株,且对Sutezolid(PNU-100480)同时发生交叉耐药,7株菌株均检测到rplC基因中T460C的突变。体外诱导Lzd耐药株在无药固体培养基上连续传代10代,MIC值有所下降(范围为4.71~7.47μg/ml),但均稳定在诱导前8倍以上。结论通过体外诱导实验可以获得对2种恶唑烷酮类(Oxazolidinones)药物均耐药的MTB耐药菌株;rplC基因突变与MTB对恶唑烷酮类药物的耐药相关;MTB对恶唑烷酮类药物的耐药稳定性较强,较难复敏。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 恶唑烷酮类 体外研究 抗药性 细菌 连续传代
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不同耐药类型结核分枝杆菌毒力变化的初步研究 被引量:3
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作者 周莹宇 付雷 +4 位作者 张炜焱 王彬 陈曦 陆宇 陈效友 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2021年第9期952-960,共9页
目的初步评价结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)临床耐药分离株和实验室诱导耐药株的毒力变化表征。方法选取MTB标准株H37Rv和减毒株H37Ra各1株、4株临床耐药分离株(15833、16030、17080和30744,各1株)和8株实验室诱导耐药... 目的初步评价结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)临床耐药分离株和实验室诱导耐药株的毒力变化表征。方法选取MTB标准株H37Rv和减毒株H37Ra各1株、4株临床耐药分离株(15833、16030、17080和30744,各1株)和8株实验室诱导耐药株[分别为单耐Pretomanid(PA-824)菌株(P1)、单耐利奈唑胺(Lzd)菌株(L1)、单耐PBTZ-169菌株(169-1、169-2、169-3,各1株),以及同时耐PA-824和Lzd的LPDR菌株(PL1、PL2、PL3,各1株)]。测定临床耐药分离株对一、二线抗结核药物和实验室诱导耐药株对Lzd、PA-824、PBTZ-169的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值。绘制各研究菌株的体外生长曲线及测量感染巨噬细胞2d后的胞内菌落形成单位(colony forming units,CFU),并测定感染2d后巨噬细胞释放乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量。动物实验选取BALB/c小鼠168只,6~7周龄,体质量16~18g/只,分为14组,每组12只。将各耐药菌株以尾静脉注射的方式感染BALB/c小鼠,记录小鼠半数生存期,进行生存分析。结果体外实验表明,MTB临床耐药分离株30744生长曲线相比于其他耐药株的生长平台期提前,菌株体外适应性较低,其余各耐药菌株生长曲线趋势基本一致。临床耐药分离株(15833、16030、30744、17080)和对Lzd和PA-824同时耐药的实验室诱导耐药株(PL1、PL2、PL3)感染巨噬细胞2d后的胞内CFU计数[分别为(5.180±0.074)、(5.571±0.029)、(5.550±0.073)、(5.446±0.099)、(5.763±0.197)、(5.907±0.053)、(5.661±0.083)log10CFU/ml]明显低于标准株H37Rv[(6.207±0.028)log10CFU/ml],差异均有统计学意义(t=17.932、12.758、12.034、10.241、4.796、7.042、9.113,P值均<0.05)。另外,菌株15833、16030、30744、1708、P1、L1、PL1、PL2、PL3、169-1、169-2、169-3感染巨噬细胞2d后LDH释放量的吸光度A490值比值(分别为0.252±0.039、0.412±0.078、0.247±0.022、0.358±0.054、0.329±0.015、0.483±0.017、0.328±0.046、0.455±0.075、0.283±0.041、0.258±0.044、0.374±0.080、0.311±0.097)均明显低于标准株H37Rv(0.958±0.025),差异均有统计学意义(t=27.269、16.788、38.244、24.238、44.005、32.698、27.713、15.171、31.798、31.472、16.515、15.570,P值均<0.01)。体内毒力实验显示:(1)所有菌株感染小鼠后,半数生存期(≥15d)均明显长于H37Rv标准株(12d)。(2)小鼠生存曲线显示:准广泛耐药菌株感染小鼠的存活时间长于耐多药菌株,即30744>17080>16030>15833;双重耐药菌株LPDR组小鼠存活时间>PBTZ-169耐药菌株组=单耐Lzd组>单耐PA-824耐药菌株组。结论 MTB耐药株的毒力均较野生型标准株下降,毒力的大小与该菌株耐药的数量可能呈负相关。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 毒力 生存率分析 评价研究
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抗结核药物贝达喹啉的耐药情况及其耐药机制研究进展 被引量:5
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作者 姚蓉 陆宇 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2022年第9期973-977,共5页
随着耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)和广泛耐药结核病(extensively drug-resistant tuberculosis,XDR-TB)菌株的增多,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的耐药性成为全球亟待解决的问题。贝达喹啉(... 随着耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)和广泛耐药结核病(extensively drug-resistant tuberculosis,XDR-TB)菌株的增多,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的耐药性成为全球亟待解决的问题。贝达喹啉(bedaquiline,Bdq)作为近50年来首个明确用于MDR-TB治疗的新药,其耐药问题受到逐步关注。笔者对Bdq的耐药特征和耐药基因突变等研究进展进行综述,旨在更好指导临床用药,提高患者的治疗成功率,减少耐药的发生。 展开更多
关键词 结核 抗药性 贝达喹啉 综述文献(主题)
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结核分枝杆菌临床株的乙胺丁醇耐药性特点及突变分析 被引量:4
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作者 程君 凌颖 +3 位作者 徐玉辉 李志玲 刘毅 孙照刚 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期65-70,共6页
目的探讨结核分枝杆菌对乙胺丁醇(EMB)的耐药性及其embB306位点的突变特点。方法以1049株结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,采用两浓度绝对浓度法(高度和低度),对其中65株EMB耐药菌的耐药谱和耐药程度进行检测,分析EMB耐药性产... 目的探讨结核分枝杆菌对乙胺丁醇(EMB)的耐药性及其embB306位点的突变特点。方法以1049株结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,采用两浓度绝对浓度法(高度和低度),对其中65株EMB耐药菌的耐药谱和耐药程度进行检测,分析EMB耐药性产生及其embB306位点的突变特点。结果在65株EMB耐药菌中,有61.54%的菌株同时耐受异烟肼(INH)和利福平(RFP),其中以同时耐受INH和RFP以及其他4种抗结核药物f阿米卡星(AMK)/氧氟沙星(OFX)/链霉素(SM)和对氨基水杨酸钠(PAS)]中的1~2种所占比例最高。65株EMB耐药菌中45株(69.23%)的菌株同时高度耐受RFP,19株(29.23%)的菌株同时高度耐受INH。16株EMB高度耐药菌均对INH高度耐药,其中13株(81.25%)同时对RFP高度耐药。embB306位点的突变在EMB耐药菌株中存在较普遍;在单一耐受EMB的菌株中发生embB306位点突变的频率最低(20%),而在EMB同时耐受INH和RFP的菌株中发生率较高,以同时耐受EMB、INH、RFP以及其它1~2种抗结核药物的菌株中的出现频率最高(60.87%)。相LLINH和RFP而言,EMB耐药性产生需要较长的时间。结论结核分枝杆菌临床株的EMB耐药性显示出与INH和RFP耐药性存在相关性,原因之一是可能与EMB相对不容易产生耐药性有关;embB306位点的突变在耐多药结核的判断方面具有一定的参考价值。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 乙胺丁醇 耐药
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结核分枝杆菌潜伏感染者外周血单个核细胞转录组学研究 被引量:2
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作者 尚雪恬 董静 +10 位作者 黄麦玲 孙琦 贾红彦 张蓝月 刘秋月 姚明旭 王颖超 姬秀秀 杜博平 邢爱英 潘丽萍 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期449-460,共12页
目的:通过对比分析结核分枝杆菌潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)者和健康人的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)经结核特异性抗原刺激后的转录组,寻找LTBI人群中结核抗原特异的免疫应答重要基... 目的:通过对比分析结核分枝杆菌潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)者和健康人的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)经结核特异性抗原刺激后的转录组,寻找LTBI人群中结核抗原特异的免疫应答重要基因及可能发挥功能的信号通路,绘制LTBI基因表达谱。方法:应用微阵列芯片检测2009年12月在首都医科大学附属北京胸科医院招募的4例LTBI者(LTBI组)和4名健康人(健康对照组)经结核抗原刺激后的PBMC转录组,并对部分差异基因进行qPCR检测以验证芯片数据。应用加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)筛选与LTBI最相关模块,并对模块中的基因分别进行基因本体论(geneontology,GO)分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto encylopedia of genes and genomes,KEGG)通路分析。通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)从全转录组水平筛选信号通路。通过免疫浸润分析寻找与LTBI相关的免疫细胞。通过STRING数据库蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析绘制两模块中差异基因相互作用网络图。结果:LTBI组与健康对照组间共发现393个差异表达基因(差异倍数>2或<0.5,P<0.05),LTBI中112个表达下调,281个表达上调。针对10个差异基因的实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测证实基因表达趋势与芯片数据一致,即CAMK1G、IL2、SPINK1、SUCNR1、HCAR3、IL18BP、CHI3L1、TNF均上调;RASGRP2、TPM2均下调。通过WGCNA分析确定与LTBI最相关的正相关蓝色模块(cor=0.88,P=0.004)和负相关蓝绿色模块(cor=―0.93,P=0.001)。对上述模块内基因进行KEGG富集分析,并行基于全转录组的GSEA分析,发现趋化因子信号通路(P<0.001)和凋亡信号通路(P=0.003)在两种分析中均明显富集。对两模块中的差异基因通过STRING数据库构建PPI网络图,通过内置插件计算得到每个模块中的前10个关键基因,即蓝色模块中的PTPRC、CD40、IL10、IRF8、CCR1、CD80、TLR8、CLEC7A、CD83和CD274;蓝绿色模块中的TNF、ICAM1、TNFRSF4、HAVCR2、CD276、CCL4、CD33、IL1RN、NCF1和FGR。免疫浸润分析发现,M1型巨噬细胞(P=0.029)和M2型巨噬细胞(P=0.001)等固有免疫细胞的比例在LTBI组和健康对照组间存在明显差异。结论:经结核特异性抗原刺激后的PBMC转录组在LTBI人群和健康人群间存在明显差异,这些差异基因主要聚集于凋亡信号通路和趋化因子信号通路,其中巨噬细胞介导的免疫应答在其中发挥了重要作用,揭示了固有免疫应答在LTBI中的重要作用。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 分枝杆菌感染 转录因子 生物学标记 免疫
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圣露丸的抗结核作用初步实验研究
10
作者 王彬 付雷 +3 位作者 徐建 郭少晨 朱慧 陆宇 《中国防痨杂志》 CAS 2018年第1期80-83,共4页
目的 评价中药圣露丸的体外及小鼠结核病模型中的抗结核活性。方法 在7H9液体培养基、7H10固体培养基中分别测定圣露丸对结核分枝杆菌标准株H37Rv的最低抑菌浓度(MIC)。气溶胶感染方式采用结核分枝杆菌标准株H37Rv先后感染SPF级BALB/... 目的 评价中药圣露丸的体外及小鼠结核病模型中的抗结核活性。方法 在7H9液体培养基、7H10固体培养基中分别测定圣露丸对结核分枝杆菌标准株H37Rv的最低抑菌浓度(MIC)。气溶胶感染方式采用结核分枝杆菌标准株H37Rv先后感染SPF级BALB/C小鼠46只和36只,分别建立小鼠急性结核病模型。均为感染第10天开始给予药物治疗,随机分组,每组10只。其中圣露丸组每只小鼠每次剂量为3 g/kg;异烟肼(INH)组,每次剂量为25 mg/kg,同时设无药空白对照组。各组均口服灌胃给药,每周给药5次,分别给予3周和6周药物治疗。治疗结束后次日处死各组小鼠,称重,无菌操作下解剖,做肺组织活菌计数。结果 圣露丸在7H9液体培养基中对H37Rv的MIC为2.5 mg/ml,在7H10固体培养基中对H37Rv的MIC为〈5 mg/ml。小鼠感染及治疗过程中各组耐受性良好,无死亡。给予3周共计15次(每次给予“圣露丸”3 g/kg)剂量治疗后,圣露丸组小鼠全肺的CFU为 (6.81±0.71) lg CFU,较空白对照组降低0.39 lg CFU。应用圣露丸治疗6周后,圣露丸组的小鼠全肺的CFU为 (4.33±0.51) lg CFU,较空白对照组降低1.10 lg CFU。结论 在本研究条件建立的小鼠结核病模型中,中药圣露丸显示出抗结核活性,值得进一步研究。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 中草药 治疗结果 对比研究 圣露丸
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硝基咪唑类抗结核新药研究进展
11
作者 胡明豪 陆宇 《中国防痨杂志》 CAS 2016年第11期990-994,共5页
结核病严重威胁着人类健康。随着耐药结核病患者的不断增多,研究活性强、安全性高的抗结核新药是解决结核病防控问题的重要手段。近年来抗结核新药研发取得重大进展,其中,硝基咪唑类抗结核新药具有强大的抗结核活性,临床试验耐受性... 结核病严重威胁着人类健康。随着耐药结核病患者的不断增多,研究活性强、安全性高的抗结核新药是解决结核病防控问题的重要手段。近年来抗结核新药研发取得重大进展,其中,硝基咪唑类抗结核新药具有强大的抗结核活性,临床试验耐受性良好,联合使用还有望缩短抗结核疗程。笔者主要从硝基咪唑类药物体内外抗结核活性、作用机制及耐药研究、药物代谢动力学、临床应用等方面进行综述。 展开更多
关键词 结核 药物 临床试用 硝基咪唑类
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抗结核药物体外药代动力学/药效学研究模型的建立及应用 被引量:3
12
作者 赵皎洁 付雷 +3 位作者 王彬 张蕾 胡明豪 陆宇 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2020年第4期372-379,共8页
目的 利用中空纤维系统建立体外药代动力学/药效学研究(pharmacokinetics/pharmacodynamics,PK/PD)的方法,并利用该方法获得异烟肼PK/PD参数及目标靶值,为后续新药的体外PK/PD研究提供方法学参考.方法 组装中空纤维系统,在中空纤维培养... 目的 利用中空纤维系统建立体外药代动力学/药效学研究(pharmacokinetics/pharmacodynamics,PK/PD)的方法,并利用该方法获得异烟肼PK/PD参数及目标靶值,为后续新药的体外PK/PD研究提供方法学参考.方法 组装中空纤维系统,在中空纤维培养筒外腔接种处于对数生长期浓度为1×106菌落形成单位(CFU)/ml的H37Rv菌株,共15 ml.在系统中模拟人体25、50、150、300、1200 mg/d给药剂量下的异烟肼浓度-时间分布,分别于给药后0.5、1、3.5、6.5、9.5、13、24、24.5、25、27.5、30.5、33.5、37、48 h进行取样,利用高效液相色谱(high-performance liquid chromatographic,HPLC)测定异烟肼浓度.给药7d内每天对培养筒外腔菌液进行取样,监测系统中总菌量、异烟肼耐药等随时间变化的情况,并用PKSolver插件计算相关PK/PD参数.结果 结核分枝杆菌中空纤维感染模型中,异烟肼在给药第1天就表现出明显的早期杀菌活性,而杀菌作用停止的时间出现在给药3~5d.在给药7d后,50~1200 mg/d剂量组结核分枝杆菌耐药菌群在所有菌群中占比≥39%.游离药物的血浆药物浓度-时间(0~24 h)曲线下面积(AUC0~24)与最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)的比值(AUC0~24/MIC)是异烟肼对H37Rv的PK/PD参数中拟合效果最好的.给药前2d药物的最大效应(Emax)为3.02CFU/ml,当AUC0~24/MIC=52.23时达到半最大效应浓度(EC50).结论 首次在国内建立的结核分枝杆菌中空纤维感染模型构建成功,AUC0~24/MIC是异烟肼对H37Rv的目标PK/PD参数. 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 药代动力学/药效学 异烟肼 体外研究
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抗结核药物药代动力学/药效学的研究及进展 被引量:6
13
作者 赵皎洁 陆宇 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2019年第6期700-704,共5页
结核病治疗需要联合使用多种药物且治疗时间较长,迫切需要研发抗结核新药。抗结核新药的研发成果十分有限,对现有药物体内外的药代动力学/药效学(pharmacokinetic/pharmacodynamic,PK/PD)进行研究,优化抗结核药物的使用,对提高疗效,减... 结核病治疗需要联合使用多种药物且治疗时间较长,迫切需要研发抗结核新药。抗结核新药的研发成果十分有限,对现有药物体内外的药代动力学/药效学(pharmacokinetic/pharmacodynamic,PK/PD)进行研究,优化抗结核药物的使用,对提高疗效,减少耐药结核病的发生至关重要。作者主要对PK/PD研究方法及抗结核药物PK/PD特点进行综述,为临床优化抗结核药物治疗方案提供参考。 展开更多
关键词 抗结核药 药代动力学 剂量效应关系 药物 综述文献(主题)
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抗结核药物早期杀菌活性研究及进展 被引量:2
14
作者 姚蓉 陆宇 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2021年第7期724-728,共5页
抗结核药物的早期杀菌活性反映药物进入血液和组织后杀灭代谢和增殖旺盛的结核分枝杆菌的能力,以实现早期控制疾病和降低传染性的目的。现有的比较成熟的药物早期杀菌活性的测定方法主要包括在固体培养基上进行痰液菌落计数及在液体培... 抗结核药物的早期杀菌活性反映药物进入血液和组织后杀灭代谢和增殖旺盛的结核分枝杆菌的能力,以实现早期控制疾病和降低传染性的目的。现有的比较成熟的药物早期杀菌活性的测定方法主要包括在固体培养基上进行痰液菌落计数及在液体培养基上测定确定阳性时间。通常情况下,两种方法的测定结果保持一致。早期杀菌活性研究目前是新型抗结核药物开发过程的重要组成部分,可以预测抗结核药物的杀菌活性,但其不能测定药物的灭菌活性,这只能根据常规临床试验治疗后的复发率或2个月的痰菌阴转率来估计。当前,结核病的流行情况严峻,治疗面临困难和挑战,迫切需要研发杀菌活性较高的新药来积极遏制结核分枝杆菌的生长以及结核病的传播。笔者拟从主要抗结核药品的早期杀菌活性及主要研究方法进行综述,旨在为更好的应用现有药物及新药研发提供参考。 展开更多
关键词 抗结核药 分枝杆菌 结核 早期杀菌活性 药物评价 综述文献(主题)
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抗结核新药药效学特点及相互作用研究 被引量:1
15
作者 祁雪婷 陆宇 陈效友 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2021年第9期965-969,共5页
结核病的治疗仍以化疗为主,现有的化疗方案存在疗程长、不良反应多、效果不佳等问题。临床迫切需要开发有效的药物组合方案以提高疗效和缩短疗程。作者对近些年上市和处于研究阶段的抗结核新药药效学特点及相互作用进行简要综述,为抗结... 结核病的治疗仍以化疗为主,现有的化疗方案存在疗程长、不良反应多、效果不佳等问题。临床迫切需要开发有效的药物组合方案以提高疗效和缩短疗程。作者对近些年上市和处于研究阶段的抗结核新药药效学特点及相互作用进行简要综述,为抗结核药物的研发及新的药物联合治疗方案提供借鉴。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 抗结核药 药物疗法 联合 综述文献(主题)
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链霉菌Streptomyces sp.CPCC 203679的次级代谢产物研究
16
作者 郭哲 刘梦 +7 位作者 赵建元 胡辛欣 徐建 柏菁璘 岑山 游雪甫 余利岩 张德武 《中国抗生素杂志》 北大核心 2025年第2期185-193,共9页
目的研究链霉菌Streptomyces sp.CPCC 203679的活性次级代谢产物,分析其次级代谢产物生物合成基因簇,并挖掘其产生次级代谢产物的潜力。方法通过正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备HPLC等方法进行分离纯化。利用质谱、... 目的研究链霉菌Streptomyces sp.CPCC 203679的活性次级代谢产物,分析其次级代谢产物生物合成基因簇,并挖掘其产生次级代谢产物的潜力。方法通过正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备HPLC等方法进行分离纯化。利用质谱、核磁共振波谱等技术进行化合物的结构鉴定。利用Illumina HiSeq测序技术对菌株CPCC 203679进行基因组测序,采用antiSMASH(v7.1.0)在线工具分析其次级代谢产物生物合成基因簇。对大环内酯类化合物进行抗病毒和抗菌活性测试。结果从链霉菌CPCC 203679发酵液中分离鉴定了4个化合物,分别为:勃利霉素A(1)、勃利霉素F(2)、5'-脱氧-5'-甲硫肌苷(3)、环(L-丙氨酸-L-异亮氨酸)二肽(4)。化合物1和2显示良好的抗甲型流感病毒活性,IC50值分别为2.4和4.7μmol/L,化合物1还显示一定的抗革兰阳性菌和抗结核分枝杆菌活性。全基因组测序显示,菌株CPCC 203679的基因组序列全长8,055,535 bp,平均(G+C)含量为72.58%,共编码7507个基因,预测到44个生物合成基因簇。结论从链霉菌Streptomyces sp.CPCC 203679中分离得到2个活性良好的大环内酯类化合物,并首次报道了勃利霉素类大环内酯的抗甲型流感病毒、抗艾滋病病毒和抗结核分枝杆菌的活性。该菌株具有丰富的次级代谢产物生物合成基因簇,具有进一步挖掘新的次级代谢产物的价值。 展开更多
关键词 链霉菌 次级代谢产物 抗病毒活性 抗菌活性 全基因组测序
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抗结核药物组合药效筛选研究进展
17
作者 刘海婷 陆宇 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2021年第4期404-408,共5页
结核病至今仍是一个深受全球关注的健康问题。由于抗结核治疗需要组合用药,临床迫切需要开发有效的药物组合方案以提高治疗效果及缩短疗程。最佳药物组合方案的确定首先要经体外筛选,再通过体内实验进行验证。笔者就近年来抗结核药物组... 结核病至今仍是一个深受全球关注的健康问题。由于抗结核治疗需要组合用药,临床迫切需要开发有效的药物组合方案以提高治疗效果及缩短疗程。最佳药物组合方案的确定首先要经体外筛选,再通过体内实验进行验证。笔者就近年来抗结核药物组合及体内外筛选方法进行综述,以期为结核病的临床治疗提供快速有效的药物组合方案。 展开更多
关键词 抗结核药 药物疗法 联合 体外研究 综述文献(主题)
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结核分枝杆菌感染的免疫学检测技术研究进展及临床应用现状 被引量:23
18
作者 贾红彦 董静 +1 位作者 张宗德 潘丽萍 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2022年第7期720-726,共7页
结核病仍然是全球和我国重点防控的传染病之一。尽管目前已将结核分枝杆菌核酸检测阳性纳入结核病确诊依据之一,但临床仍然存在大量病原学阴性的结核病患者,需要依靠免疫学检测技术进行辅助诊断。结核分枝杆菌入侵宿主后引发的免疫病理... 结核病仍然是全球和我国重点防控的传染病之一。尽管目前已将结核分枝杆菌核酸检测阳性纳入结核病确诊依据之一,但临床仍然存在大量病原学阴性的结核病患者,需要依靠免疫学检测技术进行辅助诊断。结核分枝杆菌入侵宿主后引发的免疫病理反应及抗结核免疫应答反应是开发免疫学检测技术的基础,参与免疫应答不同阶段的各类细胞、细胞因子、趋化因子、抗体等都是潜在的免疫学诊断靶标。近年来,基于这些靶标开发了多项免疫学检测新技术,包括γ-干扰素释放试验、新型结核菌素皮肤试验、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)检测、γ-干扰素/白细胞介素-2(IFN-γ/IL-2)双因子检测等,为结核分枝杆菌感染和结核病的诊断带来了新的希望。此外,尚有一些处在研发过程的新型蛋白标识物、多功能淋巴细胞等也表现出较好的潜在诊断价值。笔者将对已用于临床的免疫学诊断技术的应用现状及优缺点进行综述,并探讨未来可能进入临床应用的标识物和其他潜在靶标。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 感染 免疫 临床实验室技术
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改良单叠氮丙啶-荧光定量PCR法的建立及其检测抗结核药物活性的价值 被引量:2
19
作者 张静 陈曦 +3 位作者 王彬 付雷 陆宇 陈效友 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2020年第5期472-480,共9页
目的建立改良单叠氮丙啶(propidium monoazide xx,PMAxx)-荧光定量PCR(qPCR)鉴定MTB活菌和热灭活菌的方法,并探讨PMAxx-qPCR进行抗结核药物体外活性检测的价值。方法通过活菌和热灭活菌优化PMAxx针对MTB菌株H37Rv的预处理条件,包括曝光... 目的建立改良单叠氮丙啶(propidium monoazide xx,PMAxx)-荧光定量PCR(qPCR)鉴定MTB活菌和热灭活菌的方法,并探讨PMAxx-qPCR进行抗结核药物体外活性检测的价值。方法通过活菌和热灭活菌优化PMAxx针对MTB菌株H37Rv的预处理条件,包括曝光时间、暗孵育时间、PMAxx浓度,以及靶标DNA片段长度等。通过绘制量效曲线和建立循环阈值(Cq)与菌负荷的标准曲线,应用PMAxx-qPCR法计算测定异烟肼(INH)、利福平(RFP)的体外抗菌活性,评价检测敏感度,并分别与微孔板Alamar Blue(MABA)法和菌落形成单位(CFU)计数法进行比较,菌落计数采用独立样本t检验进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果当细菌负荷设定为107 CFU/ml时,在PMAxx浓度为10μmol/L、暗孵育10 min后曝光15 min可有效鉴别活菌、死菌(△Cq死-活=6.772±0.453),且使用>200 bp靶标片段可更有效地反映活菌、死菌的差异。PMAxx-qPCR方法在药物作用后3d可获得与MABA法一致性良好的最低抑菌浓度(MIC)检测结果(INH:0.049~0.076μg/ml与0.032~0.064μg/ml,t=0.782,P=0.491;RFP:0.102~0.145μg/ml与0.051~0.079μg/ml,t=2.828,P=0.066)。定量标准曲线Cq与菌计数(lgCFU/ml)呈良好的线性关系(R2=0.9863),最低检测限为102 CFU/ml,且PMAxx-qPCR方法和CFU计数方法测算16×MIC、8×MIC、4×MIC、2×MIC和1×MIC浓度的INH的抗菌计数分别为(4.376±0.344)和(4.325±0.318)、(4.232±0.106)和(3.936±0.194)、(4.122±0.277)和(3.874±0.105)、(3.950±0.113)和(3.675±0.250)、(3.770±0.228)和(3.618±0.257)CFU/ml,两种方法计数比较差异均无统计学意义(t值分别为0.165、1.894、1.186、1.419和0.626,P值分别为0.880、0.199、0.357、0.292和0.595),而16×MIC、8×MIC、4×MIC、2×MIC和1×MIC浓度的RFP的抗菌计数分别为(4.577±0.216)和(4.675±0.250)、(4.445±0.054)和(4.374±0.675)、(3.627±0.173)和(3.154±0.076)、(1.946±0.359)和(2.159±0.083)、(1.552±0.423)和(0.960±0.202)CFU/ml,两种方法计数比较差异均无统计学意义(t值分别为0.469、0.199、3.535、0.784、1.777,P值分别为0.671、0.855、0.071、0.490、0.174)。结论建立的PMAxx-qPCR方法稳定,可应用于一线抗结核药物INH和RFP的活性检测,敏感度高且快速准确。 展开更多
关键词 单叠氮丙啶 抗结核药 聚合酶链反应 微生物敏感性试验 对比研究
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结核分枝杆菌膜蛋白MmpS5-MmpL5的表达及功能研究 被引量:6
20
作者 李东硕 王彬 +1 位作者 陆宇 徐建 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2022年第3期227-233,共7页
目的:表达结核分枝杆菌膜蛋白MmpL5及MmpS5-MmpL5外排泵系统,探讨其在贝达喹啉耐药中的作用。方法:构建结核分枝杆菌外排泵蛋白MmpL5及MmpS5-MmpL5的乙酰胺诱导型表达载体,在耻垢分枝杆菌中诱导表达MmpL5蛋白及MmpS5-MmpL5蛋白,测定表... 目的:表达结核分枝杆菌膜蛋白MmpL5及MmpS5-MmpL5外排泵系统,探讨其在贝达喹啉耐药中的作用。方法:构建结核分枝杆菌外排泵蛋白MmpL5及MmpS5-MmpL5的乙酰胺诱导型表达载体,在耻垢分枝杆菌中诱导表达MmpL5蛋白及MmpS5-MmpL5蛋白,测定表达菌株的生长特性及其外排能力,同时探讨贝达喹啉对表达菌株最小抑菌浓度的变化与对菌体三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量的影响。结果:成功在耻垢分枝杆菌中表达结核分枝杆菌膜蛋白MmpL5及MmpS5-MmpL5,表达菌株的生长不受影响,共表达MmpS5-MmpL5蛋白的菌株外排能力增加,导致其对溴化乙锭的积累量(△荧光强度为395)较表达MmpL5蛋白组(△荧光强度为655)和携带pMV261s空质粒组(△荧光强度为642)减少约40%。贝达喹啉对MmpS5-MmpL5重组耻垢分枝杆菌的最低抑菌浓度由0.25μg/ml提高到2μg/ml,增加了8倍。贝达喹啉将MmpS5-MmpL5重组耻垢分枝杆菌菌体内ATP含量[(0.197±0.018)μmol/L]降低36.49%[(0.125±0.010)μmol/L]。MmpL5单表达不能形成外排泵,也对贝达喹啉无影响。结论:结核分枝杆菌的膜蛋白MmpL5和MmpS5需要共表达才能在耻垢分枝杆菌中发挥作用,降低贝达喹啉的药物敏感性。MmpS5-MmpL5蛋白表达体系的建立为进行贝达喹啉的具体转运机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 抗药性 MmpS5-MmpL5 贝达喹啉
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