wHo2014年版《耐药结核病规划管理指南伙伴手册》解读之五（耐药结核病实验室检测） 被引量：8

1

作者 王伟 刘京铭 李传友 《中国防痨杂志》 CAS 2015年第6期655-658,共4页

结核病实验室检测是确诊结核病，尤其是耐药结核病的重要依据，标准化操作是保证实验室质量的重要前提。耐药结核病的确诊需要检测到结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）并且进行药物敏感性试验（drug susceptibility test... 结核病实验室检测是确诊结核病，尤其是耐药结核病的重要依据，标准化操作是保证实验室质量的重要前提。耐药结核病的确诊需要检测到结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）并且进行药物敏感性试验（drug susceptibility testing，DsT），通过培养分离细菌菌株鉴定种属，采用液体或固体培养进行DST， 展开更多

关键词 耐药结核病 实验室检测 管理指南 TUBERCULOSIS 药物敏感性试验 解读 手册 结核分枝杆菌

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二甲双胍研究进展及其在结核病治疗中的应用前景 被引量：4

2

作者 刘浩然 李传友 +1 位作者 王伟 高孟秋 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第10期1130-1133,共4页

结核病的患病率和死亡率仍居高不下,亟需新的治疗方法和策略.二甲双胍（MET）作为2型糖尿病（D2M）的一线治疗药物,在其他多种疾病中也发挥着一定的作用.作者简述了MET的研究历史和进展,介绍了MET在抗结核药物治疗中的潜在作用和机制.ME... 结核病的患病率和死亡率仍居高不下,亟需新的治疗方法和策略.二甲双胍（MET）作为2型糖尿病（D2M）的一线治疗药物,在其他多种疾病中也发挥着一定的作用.作者简述了MET的研究历史和进展,介绍了MET在抗结核药物治疗中的潜在作用和机制.MET可以通过激活腺嘌呤核糖核苷酸（AMP）依赖的蛋白激酶（AMPK）通路、促进活性氧（ROS）的产生、抑制细菌氧化呼吸链复合体等多种途径加强宿主对抗结核分枝杆菌的能力.MET还具有一定的抗炎作用,在结核病的治疗过程中起到积极作用.MET还可以促进被感染细胞的自噬作用,以及加强常规抗结核药物的疗效. 展开更多

关键词 二甲双胍 结核 治疗应用 综述

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结核病亚单位疫苗的临床研究进展 被引量：5

3

作者 杜京津 逄宇 李凌 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第6期673-677,共5页

结核病是造成全世界成年人死亡的主要传染病,在过去25年里也一直是全球公共卫生的挑战。目前唯一批准的结核疫苗只有卡介苗,因此开发安全有效的新型结核疫苗任重而道远。重组亚单位疫苗成分明确、安全性高、可诱导高效的免疫应答、提供... 结核病是造成全世界成年人死亡的主要传染病,在过去25年里也一直是全球公共卫生的挑战。目前唯一批准的结核疫苗只有卡介苗,因此开发安全有效的新型结核疫苗任重而道远。重组亚单位疫苗成分明确、安全性高、可诱导高效的免疫应答、提供长期的免疫保护效果,因而具有较好的应用前景。本文针对结核病重组亚单位疫苗的组分、临床研究现状、应用等方面的进展进行综述。 展开更多

关键词 结核病 结核分枝杆菌 亚单位疫苗 抗原 佐剂

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909例结核病患者一线抗结核药物血药浓度监测结果分析 被引量：20

4

作者 郭少晨 朱慧 +6 位作者 郭超 王彬 刘忠泉 徐建 付雷 陈效友 陆宇 《中国防痨杂志》 CAS 2018年第7期744-749,共6页

目的分析结核病患者一线抗结核药物血药浓度监测情况。方法选取2010年1月至2016年11月于首都医科大学附属北京胸科医院住院并进行一线抗结核药物血药浓度测定者作为研究对象，共909例；其中，服用INH者909例，服用EMB者783例，服用PZA者... 目的分析结核病患者一线抗结核药物血药浓度监测情况。方法选取2010年1月至2016年11月于首都医科大学附属北京胸科医院住院并进行一线抗结核药物血药浓度测定者作为研究对象，共909例；其中，服用INH者909例，服用EMB者783例，服用PZA者587例，服用RFP者503例。患者服药剂量：INH300mg／d、RFP450mg／d或600mg／d、PZA1500mg／d、EMB750mg／d。收集研究对象性别、年龄、并发糖尿病情况，以及血药浓度监测结果，并进行分析。结果服用INH、EMB、PZA和RFP（450mg／d和600mg／d）2h后，患者血药浓度低于目标浓度范围者分别占57．3％（521／909）、82．2％（644／783）、29．8％（175／587）、51．6％（190／368）和36．3％（49／135）。其中，男性患者中INH、EMB、PZA、RFP（450mg／d）出现低血药浓度者分别占67．2％（396／589）、85．9％（451／525）、39．9％（153／383）、60．0％（135／225），均高于女性患者[39．1％（125／320）、74．8％（193／258）、10．8％（22／204）、38．5％（55／143）]，差异均有统计学意义（X2值分别为67．26、14．59、54．10、16．24，P值均〈0．01）。体质量≥50kg的患者，INH、EMB、PZA、RFP（450mg／d）出现低血药浓度者分别占61．7％（428／694）、83．3％（513／616）、35．3％（159／451）、55．6％（154／277），均高于体质量〈50kg者[30．3％（40／132）、72．4％（76／105）、4．7％（4／86）、37．1％（23／62）]，差异均有统计学意义（X2值分别为44．44、7．12、32．00、6．95，P值均〈0．05）。结核病并发糖尿病患者，INH和PZA出现低血药浓度者分别占72．6％（143／197）和53．8％（71／132），高于未并发糖尿病者[53．1％（378／712）和22．9％（104／455）]，差异均有统计学意义（X2值分别为23．98和46．78，P值均〈0．01）。结论结核病患者服用一线抗结核药物后出现低血药浓度情况较为普遍，患者性别、体质量、并发症等因素均会影响其血药浓度水平；提示开展一线抗结核药物血药浓度监测工作，并根据患者个体情况调整治疗方案对结核病治疗是必要的。 展开更多

关键词 结核 药物监测 药代动力学 利福平 异烟肼 乙胺丁醇 吡嗪酰胺

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肺结核并发各种类型肺外结核患者的分布及其耐药情况分析 被引量：19

5

作者 陈素婷 付育红 +2 位作者 赵立平 薛毅 黄海荣 《中国防痨杂志》 CAS 2018年第9期964-968,共5页

目的探讨肺结核并发各种类型肺外结核患者的分布及其耐药情况。方法选取2013年1月至2015年12月在首都医科大学附属北京胸科医院住院治疗的347例肺结核并发肺外结核患者（男199例，女148例）为研究对象，回顾性分析患者的年龄、性别、肺... 目的探讨肺结核并发各种类型肺外结核患者的分布及其耐药情况。方法选取2013年1月至2015年12月在首都医科大学附属北京胸科医院住院治疗的347例肺结核并发肺外结核患者（男199例，女148例）为研究对象，回顾性分析患者的年龄、性别、肺外结核并发感染部位等临床特征，同时对痰菌培养阳性的结核分枝杆菌临床分离株进行药物敏感性试验。比较分析并发不同类型肺外结核患者的耐药情况。结果347例肺结核并发肺外结核患者中，中位年龄33（24-52）岁，其中高发年龄为20-39岁，占41．8％（145／347）。常见并发肺外结核的类型依次为：骨关节结核112例（32．3％，112／347），淋巴结结核96例（27．7％，96／347），结核性脑膜炎82例（23．6％，82／347），结核性腹膜炎23例（6．6％，23／347），结核性心包炎9例（2．6％，9／347），肠结核8例（2．3％，8／347），泌尿系结核和结核性多浆膜炎各5例（各占1．4％，5／347），肾结核2例（0．6％，2／347），脾结核、女性盆腔结核、肝结核、附睾结核和鼻结核各1例（各占0．3％，1／347）。并发骨关节结核、淋巴结结核、结核性脑膜炎、结核性腹膜炎和其他类型肺外结核患者的中位年龄分别为：47（26～60）岁、26（20～42）岁、34（25～50）岁、26（20～46）岁和47（31-66）岁；上述各组中位年龄之间比较，差异有统计学意义（X^2=36．25，P=0．000）。347例患者中有189例患者进行了痰培养，对其中70例细菌培养阳性的临床分离株进行的药敏试验结果显示，肺结核并发肺外结核的总体耐药率为44．3％（31／70），单耐药率、多耐药率和耐多药率分别为11．4％（8／70）、2．9％（2／70）和30．0％（21／70）。结论肺结核并发肺外结核的累及部位广泛，其中最为常见的累及部位为骨关节、淋巴结和脑膜。肺结核并发肺外结核的总体耐药率高。 展开更多

关键词 结核 肺 结核 骨关节 结核 淋巴结 结核 脑膜 结核 抗多种药物性 数据说明 统计

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结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验对淋巴结结核的辅助诊断价值研究 被引量：19

6

作者 贾红彦 潘丽萍 +6 位作者 刘菲 杜博平 孙琦 邢爱英 杜凤娇 马玙 张宗德 《中国防痨杂志》 CAS 2014年第6期467-471,共5页

目的 探讨评价结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）对淋巴结结核的辅助诊断价值.方法 本研究募集北京胸科医院2011年7月至2013年12月收治住院的淋巴结肿大患者185例,最终分为确诊结核性淋巴结组（51例）、非结核性淋巴结疾病组... 目的 探讨评价结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）对淋巴结结核的辅助诊断价值.方法 本研究募集北京胸科医院2011年7月至2013年12月收治住院的淋巴结肿大患者185例,最终分为确诊结核性淋巴结组（51例）、非结核性淋巴结疾病组（105例）,其余诊断不明确或临床诊断淋巴结结核患者予以剔除.所有患者均行外周血T-SPOT.TB及免疫印迹法检测结核分枝杆菌抗体.采用SPSS 17.0进行统计学分析,非正态分布的计量资料数据用中位数（上下四分位数）[M（P25,P75）]表示,两组间斑点形成个数（SFCs）数据比较采用Mann WhitneyU检验,组间样本率的比较采用x2检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 T-SPOT.TB和免疫印迹法检测结核分枝杆菌抗体的敏感度分别为92.2％（47/51）和60.8％（31/51）,特异度分别为79.0％（83/105）和77.1％（81/105）,T-SPOT.TB敏感度显著高于免疫印迹法检测结核分枝杆菌抗体方法,差异有统计学意义（x2=13.95,P＜0.01）.结核分枝杆菌特异抗原刺激下结核性淋巴结组SFCs中位数为242个（57,621个）/106外周血单个核细胞（PBMCs）,非结核性淋巴结疾病组SFCs中位数为0个（0,20个）/106 PBMCs,结核性淋巴结组SFCs数量显著高于非结核性淋巴结疾病组,应用Mann Whitney U检验,两组间差异具有统计学意义（U=472.0,P＜0.01）.在T-SPOT.TB结果阳性的69例患者中,47例结核性淋巴结患者SFCs的M（P25,P75）为280个（98,684个）/106 PBMCs,显著高于对照组22例非结核性淋巴结疾病患者SFCs的M（P25,P75）52个（35,93个）/106 PBMCs（U=146.5,P＜0.01）.结论 T-SPOT.TB方法在淋巴结结核的诊断中有着较高的敏感度,有可能成为淋巴结结核辅助诊断的一项重要手段. 展开更多

关键词 结核 淋巴结/诊断 Γ干扰素释放试验 敏感性与特异性

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结核分枝杆菌耐药相关基因扩增多重PCR体系的建立与评估 被引量：9

7

作者 李自慧 潘丽萍 +5 位作者 孙琦 吕翎娜 杜博平 张洪静 孙照刚 张宗德 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第8期793-798,共6页

目的建立结核分枝杆菌耐药相关基因多重PCR反应体系，评估该体系以临床分离株DNA和痰菌DNA为模板扩增耐药相关基因的成功率。方法常规提取结核分枝杆菌临床分离株（47株）及涂阳肺结核患者（21例）痰菌DNA。根据目前研究已发现的结核分... 目的建立结核分枝杆菌耐药相关基因多重PCR反应体系，评估该体系以临床分离株DNA和痰菌DNA为模板扩增耐药相关基因的成功率。方法常规提取结核分枝杆菌临床分离株（47株）及涂阳肺结核患者（21例）痰菌DNA。根据目前研究已发现的结核分枝杆菌耐药相关基因合成引物，建立2个多重PCR体系以扩增目的基因。扩增片段经测序证实后，计算该体系用于两种样本的扩增成功率。结果针对临床常用8种抗结核药物，选取结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA、embB、gyrA、rpsL、rrs、eis共8个耐药相关基因设计合成引物。建立2个多重PCR体系扩增8个耐药基因，该体系扩增47株结核分枝杆菌临床分离株DNA和21例菌阳肺结核患者痰菌DNA的成功率分别为100．0％（47／47）和76．2％（16／21）。结论本研究建立了高效扩增8个结核分枝杆菌耐药基因的多重PCR体系，结果对进一步研发结核病耐药分子诊断产品具有重要意义。 展开更多

关键词 结核 抗多种药物性 聚合酶链反应 基因测定 核酸扩增技术 技术评估 生物医学

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结核性脑膜炎实验室诊断现状与展望 被引量：8

8

作者 李自慧 张宗德 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2020年第5期442-448,共7页

结核性脑膜炎是一种最严重和常见的中枢神经系统结核病,快速确诊和及时治疗是改善患者预后和提高患者生存率的关键。但是,由于缺乏有效的检测手段,确诊结核性脑膜炎目前仍非常困难。作者针对结核性脑膜炎实验室诊断的现状、最新研究进展... 结核性脑膜炎是一种最严重和常见的中枢神经系统结核病,快速确诊和及时治疗是改善患者预后和提高患者生存率的关键。但是,由于缺乏有效的检测手段,确诊结核性脑膜炎目前仍非常困难。作者针对结核性脑膜炎实验室诊断的现状、最新研究进展,以及所面临的问题和挑战进行论述和讨论,呼吁进一步通过合作加强结核性脑膜炎的实验室诊断研究。 展开更多

关键词 结核 脑膜 实验室技术和方法 早期诊断 基于问题的学习 研究进展

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ESRRB rs12437118多态性与中国华北汉族人群结核病易感性的关系 被引量：2

9

作者 段淑娟 赵玲娟 +2 位作者 李传友 李凌 王伟 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2023年第12期1152-1157,共6页

目的:调查ESRRB编码基因ESRRB内的rs12437118多态性与中国华北汉族人群结核病易感性的关系。方法:收集2018年3月至2019年10月于首都医科大学附属北京胸科医院就诊的籍贯信息为华北地区的607例汉族结核病患者作为病例组,以及660名籍贯信... 目的:调查ESRRB编码基因ESRRB内的rs12437118多态性与中国华北汉族人群结核病易感性的关系。方法:收集2018年3月至2019年10月于首都医科大学附属北京胸科医院就诊的籍贯信息为华北地区的607例汉族结核病患者作为病例组,以及660名籍贯信息为华北地区的结核病专科医院的汉族工作人员作为健康对照组。采用竞争性等位基因特异性PCR(kompetitive allele-specific PCR,KASP)测定ESRRB基因rs12437118位点的单核苷酸多态性(SNP)。ESRRB蛋白的血清水平通过酶联免疫吸附测定法检测。通过比对基因型和ESRRB蛋白的差异,分析ESRRB基因rs12437118位点多态性与结核病易感性的关系。使用不同的遗传模型(包括显性和隐性模型)评估ESRRB rs12437118多态性与结核病的关联。结果:GG、GA和AA rs12437118基因型频率在病例组中分别为50.2%(305/607)、38.1%(231/607)和11.7%(71/607),在健康对照组中分别为44.9%(296/660)、45.6%(301/660)和9.5%(63/660),两组比较差异有统计学意义(χ^(2)=7.619,P=0.022)。GA rs12437118 SNP基因型与华北地区汉族人群结核病低风险明显相关[OR(95%CI)=1.34(1.06~1.70),χ^(2)=6.079,P=0.014]。病例组血清ESRRB水平[243.1(174.3,367.3)pg/μl],明显低于健康对照组血清ESRRB水平[360.3(240.0,604.1)pg/μl],差异有统计学意义(Z=5.623,P<0.001)。病例组AA、GA、GG基因型的ESRRB水平分别为328.9(226.3,553.0)pg/μl、232.6(164.7,379.7)pg/μl、196.8(150.1,328.4)pg/μl,差异无统计学意义(F=1.790,P=0.171);对照组AA、GA、GG基因型的ESRRB水平分别为427.5(253.9,619.4)pg/μl、353.7(247.8,666.4)pg/μl、303.3(219.8,519.1)pg/μl,差异无统计学意义(F=1.751,P=0.177)。结论:中国华北地区的汉族人群中ESRRB rs12437118 GA基因型与结核病易感性之间存在明显关联性,ESRRB在结核病患者人群血清中的低表达与rs12437118基因多态性无关。 展开更多

关键词 受体 雌激素 多态性 单核苷酸 结核 疾病易感性

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核苷酸结合寡聚化结构域样受体对结核分枝杆菌免疫应答研究的新进展

10

作者 张雨晴 张旭霞 +1 位作者 刘毅 李传友 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第12期1343-1347,共5页

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）是引发结核病的主要病原菌。宿主对MTB的免疫应答在结核病发病过程中有重要地位，该过程主要通过模式识别受体（pattern recognition receptor，PPR）进行。核苷酸结合寡聚化结构域（nu... 结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）是引发结核病的主要病原菌。宿主对MTB的免疫应答在结核病发病过程中有重要地位，该过程主要通过模式识别受体（pattern recognition receptor，PPR）进行。核苷酸结合寡聚化结构域（nucleotide-binding oligomerization domain，NOD）样受体（NOD-like receptor，NLR）是其中的一种重要PPR，在MTB感染和发病中扮演重要角色，目前已发现有20多种。NLR主要针对胞内的细菌和病毒进行免疫应答，同时对它们释放或降解的产物也产生免疫反应。NLR在MTB感染早期固有免疫系统对病原菌的识别和清除，以及启动适应性免疫应答和分泌细胞因子、介导炎症和细胞自噬等过程中都有重要作用。近几年，NLR在这些功能研究上有新进展，笔者就NLR介导的对MTB感染的免疫应答过程，以及其与结核病发病关系研究的新动态进行综合分析，以期为MTB和宿主细胞的相互作用研究提供新提示。 展开更多

关键词 受体 模式识别 受体 蛋白酶激活 分枝杆菌 结核 感染 免疫

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长链非编码RNA MALAT1在肿瘤诊治中的研究进展 被引量：7

11

作者 李悄 李国政 +1 位作者 张博 王伟 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第16期2164-2167,共4页

长链非编码RNA(long non⁃coding RNA,lncRNAs)是一种长度大于200 nt且不具备编码潜能的转录本,因其异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关而成为当前的研究热点。MALAT1作为最早发现的lncRNA之一,可通过不同途径参与调控肿瘤细胞的增殖、... 长链非编码RNA(long non⁃coding RNA,lncRNAs)是一种长度大于200 nt且不具备编码潜能的转录本,因其异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关而成为当前的研究热点。MALAT1作为最早发现的lncRNA之一,可通过不同途径参与调控肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭以及转移等,影响肿瘤的发展进程。本文即针对MALAT1在多种肿瘤中的研究现状做一综述,为今后肿瘤的诊断和治疗提供新思路。 展开更多

关键词 MALAT1 lncRNA 肿瘤 诊断 治疗靶点

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巨噬细胞在抗结核感染中的作用 被引量：10

12

作者 王雅 李传友 +1 位作者 王伟 唐神结 《中国防痨杂志》 CAS 2018年第2期218-221,共4页

巨噬细胞在结核病发病过程及机体抗结核免疫过程中扮演重要的角色。巨噬细胞是机体天然免疫的重要组成细胞，同时又是一类主要的抗原提呈细胞。在天然免疫和获得性免疫中都起着关键的作用。结核病是由结核分枝杆菌引起的严重危害人类健... 巨噬细胞在结核病发病过程及机体抗结核免疫过程中扮演重要的角色。巨噬细胞是机体天然免疫的重要组成细胞，同时又是一类主要的抗原提呈细胞。在天然免疫和获得性免疫中都起着关键的作用。结核病是由结核分枝杆菌引起的严重危害人类健康的主要传染病，结核分枝杆菌可以通过多种途径来干扰机体巨噬细胞的免疫应答。本篇综述的目的在于讨论宿主被结核分枝杆菌入侵后，巨噬细胞在各种抗结核感染的免疫应答中的作用机制。 展开更多

关键词 巨噬细胞 分枝杆菌 结核 感染 免疫 综述

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荧光探针熔解曲线法检测结核患者N-乙酰基转移酶2基因型分布的应用评价

13

作者 陈素婷 黄明翔 +4 位作者 胡严杰 尚媛媛 梁倩 付育红 黄海荣 《中国防痨杂志》 CAS 2018年第1期63-67,共5页

目的 评价荧光探针熔解曲线法检测结核病患者芳基胺N-乙酰基转移酶2（arylamine N-acetyltransferases 2,NAT2）基因多态性的性能。方法 选取于2015—2016年到福州肺科医院和北京胸科医院确诊的初治结核病患者作为研究对象,分别为371例... 目的 评价荧光探针熔解曲线法检测结核病患者芳基胺N-乙酰基转移酶2（arylamine N-acetyltransferases 2,NAT2）基因多态性的性能。方法 选取于2015—2016年到福州肺科医院和北京胸科医院确诊的初治结核病患者作为研究对象,分别为371例和355例。收集研究对象外周血标本。应用荧光探针熔解曲线法[分析NAT2基因rs1801280（341T→G）、rs1799929（481C→T）、rs1799930（590G→A）和rs1799931（857G→A）等4个单核苷酸多态性（SNP）]和DNA测序分析法[分析NAT2基因的rs1801279 （191G→A）、rs1041983 （282C→T）、rs1801280（341T→C）、rs1799929 （481C→T）、rs1799930 （590G→A）、rs1208 （803A→G）和1799931 （857G→A）的7个SNP位点]对研究对象进行NAT2基因型分析,并根据NAT2基因型进行NAT2代谢类型的推断分析。结果 荧光探针熔解曲线法分析4个SNP位点与DNA测序分析法分析7个SNP位点推断NAT2代谢类型的结果完全一致。荧光探针熔解曲线法从DNA制备、PCR扩增和熔解曲线分析的整个检测过程需要2.5 h。共检测到NAT2 ＊4/＊4、NAT2 ＊5/＊4、NAT2 ＊6/＊4、NAT2 ＊7/＊4、NAT2 ＊5/＊11、NAT2 ＊6/＊11、NAT2 ＊7/＊11、NAT2 ＊5/＊6、NAT2 ＊6/＊7、NAT2 ＊5/＊5、NAT2 ＊6/＊6、NAT2 ＊7/＊7、NAT2 ＊5/＊7等13种NAT2基因型。福州肺科医院的结核病患者NAT2基因快乙酰化、中间乙酰化和慢乙酰化类型分别占37.20%（138/371）、42.32%（157/371）和20.49%（76/371）;北京胸科医院的结核病患者中,快乙酰化、中间乙酰化和慢乙酰化类型分别占27.89%（99/355）、54.65%（194/355）、17.46%（62/355）;两组人群的乙酰化类型分布差异有统计学意义（χ2=11.37,P=0.003）。所有的快乙酰化代谢人群均携带NAT2 ＊4/＊4基因型[100.00%（237/237）],而慢乙酰化代谢人群主要携带NAT2 ＊6和NAT2 ＊7的单倍型[90.22% （249/276）]。结论 荧光探针熔解曲线法分析4个SNP位点检测NAT2基因型具有结果判读简便、准确、快速的优点,适用于中国地区人群的NAT2基因型的检测。 展开更多

关键词 结核 核酸探针 芳基胺N-乙酰转移酶 基因型 多态性 单核苷酸

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miR-99a-5p在结核分枝杆菌感染宿主巨噬细胞中的免疫调控作用 被引量：4

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作者 史雨婷 董静 +8 位作者 贾红彦 朱传智 杨斌 李自慧 孙琦 杜博平 邢爱英 张宗德 潘丽萍 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2023年第5期464-470,共7页

目的:初步探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染THP-1细胞内特异miRNA在宿主抗结核免疫中的作用。方法:提取MTB感染及未感染THP-1细胞RNA,基于Illumina NovaSeq6000二代测序平台检测THP-1细胞内miRNA表达谱。采集4名... 目的:初步探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染THP-1细胞内特异miRNA在宿主抗结核免疫中的作用。方法:提取MTB感染及未感染THP-1细胞RNA,基于Illumina NovaSeq6000二代测序平台检测THP-1细胞内miRNA表达谱。采集4名健康受试者6 ml外周血并分离人原代巨噬细胞。应用实时荧光PCR(qRT-PCR)技术验证MTB感染THP-1细胞内特异miRNA并检测人原代巨噬细胞中靶标miRNA的表达水平。构建miRNA过表达载体,经慢病毒转染THP-1巨噬细胞获得稳定的过表达细胞株,使用qRT-PCR检测H37Rv感染的miRNA过表达细胞及对照空载体细胞中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)及γ-干扰素(IFN-γ)表达水平。结果:从16个二代测序结果表达差异明显的miRNA分子中选取既往未作研究且差异最为明显的miR-99a-5p(P=0.021)作为研究靶基因。通过qRT-PCR在THP-1细胞及原代巨噬细胞中验证,发现miR-99a-5p在THP-1感染组和原代巨噬细胞内的表达量(分别为0.482±0.148和0.433±0.072)均明显低于未感染组(1.536±0.290和1.113±0.218),差异均有统计学意义(t=6.476,P<0.001;t=3.167,P=0.019)。MTB感染miR-99a-5p过表达细胞后24 h的菌落形成单位(CFU)[64.0×10^(4)(52.0×10^(4),87.0×10^(4))]明显高于MTB感染的对照空载体细胞内CFU[17.0×10^(4)(16.0×10^(4),24.0×10^(4))],差异有统计学意义(Z=-2.323,P=0.029)。与MTB感染的对照空载体细胞相比,MTB感染的miR-99a-5p过表达细胞内TNF-α及IFN-γ的mRNA相对表达水平分别由1.018±0.310和1.687±0.135下降至0.740±0.001和0.631±0.374,差异均有统计学意义(t=4.631,P=0.010;t=3.349,P=0.010)。结论:miR-99a-5p可抑制TNF-α及IFN-γ的释放,促进MTB在巨噬细胞内的生长。MTB感染后宿主miR-99a-5p的下调表达可能在宿主抗结核感染免疫中发挥重要作用。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 芯片分析技术 微RNAS 巨噬细胞 免疫调节

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三种细胞因子在肺结核与肺癌胸腔积液中的诊断价值 被引量：2

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作者 刘浩然 张亚莉 +4 位作者 任卫聪 赵玲娟 李传友 王伟 高孟秋 《中国防痨杂志》 CAS 2018年第10期1046-1050,共5页

目的分析肺结核患者（TB）和肺癌患者胸腔积液中巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）、孤核受体α（RORu）和孤核受体7（ROR7）水平的差异，探讨其在肺结核与肺癌鉴别诊断中的价值。方法通过简单随机抽样，将已确诊为肺结核和肺癌的冻存胸腔积... 目的分析肺结核患者（TB）和肺癌患者胸腔积液中巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）、孤核受体α（RORu）和孤核受体7（ROR7）水平的差异，探讨其在肺结核与肺癌鉴别诊断中的价值。方法通过简单随机抽样，将已确诊为肺结核和肺癌的冻存胸腔积液样本进行编号，抽取样本各80例，总结研究对象的基本信息，采用酶联免疫吸附法检测各样本中的MIF、RORα及ROR7水平。采用SPSS20．0软件进行统计学对比分析，本研究中两组计量资料不符合正态分布，采用“Mann-WhitneyU检验”，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果肺结核组和肺癌组胸腔积液中的MIF水平中位数（四分位数）[M（Q1，Q2]分别为5．83（2．41，16．43）、2．79（0．91，11．12）ng／L，差异有统计学意义（U=2314．50，P％0．01）；肺结核组和肺癌组胸腔积液中RORd水平[M（Q1，Q3]分别为0．63（O．37，1．66）、0．63（0．57，2．16）ng／L，差异无统计学意义（U-3525．00，P〉0．05）；肺结核组和肺癌组胸腔积液中ROR7水平[M（Q1，Q3）]分别为3．23（1．82，5．26）、3．44（1．94，7．11）ng／L，差异无统计学意义（U-3431．50，P〉0．05）。结论肺结核患者胸腔积液中MIF水平高于肺癌患者，检测胸腔积液中MIF水平对肺结核与肺癌的鉴别有一定诊断价值；而胸腔积液中R（）Ra及RORγ,水平检测的价值仍有待进一步验证。 展开更多

关键词 结核 肺 肺肿瘤 胸腔积液 巨噬细胞游走抑制因子 孤儿核受体类 酶联免疫吸附测定 诊断 鉴别

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乙酰丙酸-十二烷基硫酸钠对结核分枝杆菌的杀灭作用及其安全性毒理学评价 被引量：2

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作者 吕霞丽 李自慧 +3 位作者 潘丽萍 贾红彦 张宗德 刘洋 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第6期894-899,共6页

目的研究消毒剂乙酰丙酸-十二烷基硫酸钠(levulinic acid plus sodium dodecyl sulfate,LVA-SDS)对结核分枝杆菌标准株H37Rv、耐多药结核分枝杆菌临床分离株的杀灭作用;并对LVA-SDS进行安全性毒理学评价。方法按照2002年版卫生部《消毒... 目的研究消毒剂乙酰丙酸-十二烷基硫酸钠(levulinic acid plus sodium dodecyl sulfate,LVA-SDS)对结核分枝杆菌标准株H37Rv、耐多药结核分枝杆菌临床分离株的杀灭作用;并对LVA-SDS进行安全性毒理学评价。方法按照2002年版卫生部《消毒技术规范》要求,采用悬液定量杀菌试验和动物实验方法,分别评估LVA-SDS对结核分枝杆菌标准株H37Rv、耐多药结核分枝杆菌临床分离株菌悬液的杀灭作用以及LVA-SDS实际使用时的安全性。结果 20%(体积分数) LVA+2%(质量分数)SDS消毒剂与1 mg/m L的菌悬液作用30 min,对菌悬液内结核分枝杆菌标准株H37Rv或耐多药结核分枝杆菌临床分离株的平均杀灭对数值均> 5. 00。小鼠急性经口毒性试验结果为半数致死量(median lethal dose,LD50)> 5 000 mg/kg,蓄积系数K> 5,皮肤刺激反应无红斑和水肿形成,皮肤刺激指数<0. 5。结论 LVA-SDS对结核分枝杆菌标准株H37Rv、耐多药结核分枝杆菌临床分离株均有较好的杀灭作用; LVA-SDS属实际无毒级、轻度蓄积毒性作用且对皮肤无刺激性。因此,LVA-SDS是一种安全的、对结核分枝杆菌杀灭作用较好的消毒剂,具有较强的实际应用价值。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 乙酰丙酸(LVA) 平均杀灭对数值 安全性

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耻垢分枝杆菌新型毒素-抗毒素系统MSMEG_3435-3436基因功能的初步研究 被引量：1

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作者 张蓝月 耿艺漫 +5 位作者 贾红彦 肖婧 李自慧 潘丽萍 孙义成 张宗德 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2020年第2期133-142,共10页

目的初步探讨耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,TA)系统基因的功能及其在细菌药物耐受中的作用。方法利用无水四环素(ATc)诱导穿梭质粒构建毒素基因(MSMEG_3436和MSMEG_6760)表达系统,检测毒素基因表... 目的初步探讨耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,TA)系统基因的功能及其在细菌药物耐受中的作用。方法利用无水四环素(ATc)诱导穿梭质粒构建毒素基因(MSMEG_3436和MSMEG_6760)表达系统,检测毒素基因表达的抑菌作用。应用CRISPR-Cas12a基因编辑技术构建ΔMSMEG_3435-3436和ΔMSMEG_6762-6760敲除菌株,探究毒素-抗毒素系统对菌株生长的影响。通过计算菌株存活率检测MSMEG_3435-3436基因对异烟肼(96μg/ml)和利福平(40μg/ml)的耐受相关性。在耻垢分枝杆菌中用LacZ报告基因分别替换毒素-抗毒素基因(MSMEG_1277-1278、MSMEG_1283-1284、MSMEG_3435-3436、MSMEG_4447-4448和MSMEG_5635-5634),构建5个启动子活性检测突变菌株(SY3328、SY3309、SY6407、SY3310和SY3311),并将pMV261空载体和pMV261-抗毒素系列质粒分别电转至5个突变菌株中,通过测定吸光度值(A600、A550和A420)计算β-半乳糖苷酶活性[酶活性单位为“Miller单位(MU)”],以检测毒素抗毒素系统的启动子活性。结果在耻垢分枝杆菌中,ATc诱导表达毒素基因MSMEG_3436可抑制细菌生长,而同时表达对应的抗毒素基因MSMEG_3435可消除抑制作用;ATc诱导表达毒素基因MSMEG_6760未发现明显的抑菌作用。与野生株相比,ΔMSMEG_3435-3436和ΔMSMEG_6762-6760敲除菌株在7H9液体培养基中生长表型无明显差异。野生株和ΔMSMEG_3435-3436敲除菌株经异烟肼和利福平处理后的存活率[分别为(4.38±1.48)%和(3.49±0.66)%,(0.15±0.04)%和(0.03±0.02)%]显示毒素-抗毒素基因MSMEG_3435-3436与药物耐受性无关(t=0.548,P=0.613;t=2.663,P=0.056)。启动子(SY3328、SY3309、SY6407、SY3310和SY3311)在携带pMV261-空载体和pMV261抗毒素表达质粒的报告菌株中的β-半乳糖苷酶活性分别为(376.50±17.13)和(315.50±20.71)、(189.00±12.24)和(160.70±9.89)、(225.20±9.95)和(211.70±2.57)、(221.40±12.07)和(186.60±13.17)、(179.10±5.87)和(127.70±19.21)MU,差异均无统计学意义(t=2.272,P=0.086;t=1.795,P=0.147;t=1.319,P=0.258;t=1.949,P=0.123;t=2.562,P=0.063)。结论成功构建了MSMEG_3435-3436和MSMEG_6762-6760在耻垢分枝杆菌中的诱导表达体系及敲除菌株,并发现MSMEG_3435-3436是一个新的有功能的毒素-抗毒素系统,以及这两个毒素-抗毒素系统与菌株生长表型及异烟肼和利福平耐受性无关,最后发现耻垢分枝杆菌中5对毒素-抗毒素系统的抗毒素基因可能在自身启动子调控中不发挥关键作用,可为进一步研究结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统的功能提供线索。 展开更多

关键词 分枝杆菌 耻垢 类毒素类 抗毒素类 基因表达调控 细菌 药物耐受性

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应用于结核性胸膜炎分子生物学检测的胸腔积液核酸提取方法初步比较分析

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作者 杜博平 李自慧 +6 位作者 潘丽萍 孙琦 吕翎娜 朱传智 邢爱英 贾红彦 张宗德 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期678-684,共7页

目的筛选鉴定有助于结核性胸膜炎分子生物学检测的胸腔积液核酸提取方法。方法收集18例结核性胸膜炎患者胸腔积液样本,分别采用6种方法提取核酸,应用微滴数字PCR技术分析样本中结核分枝杆菌特异性核酸IS6110和IS1081数量,以此评估不同... 目的筛选鉴定有助于结核性胸膜炎分子生物学检测的胸腔积液核酸提取方法。方法收集18例结核性胸膜炎患者胸腔积液样本,分别采用6种方法提取核酸,应用微滴数字PCR技术分析样本中结核分枝杆菌特异性核酸IS6110和IS1081数量,以此评估不同胸腔积液核酸提取方法的优劣。结果对于胸腔积液原液或胸腔积液离心上清,采用柱法和磁珠法提取的核酸样本中靶标数量无明显差别。对于胸腔积液离心沉渣,采用物理破碎法提取的核酸样本中IS6110和IS1081数量显著高于化学破碎法(IS6110,Z=-3.408,P=0.001;IS1081,Z=-3.297,P=0.001)。相比于小体积(0.7 mL)胸腔积液原液直接提取,大体积(4 mL)胸腔积液离心的上清和沉渣(物理破碎)中提取的核酸样本含有更多的靶标数量(分别IS6110,Z=-3.237,P=0.001,IS1081,Z=-2.667,P=0.008;IS6110,Z=-3.157,P=0.002,IS1081,Z=-2.250,P=0.024)。结论大体积胸腔积液离心上清游离核酸提取法和离心沉渣物理破碎核酸提取法能够富集更多的结核分枝杆菌核酸,是较好的用于结核性胸膜炎分子生物学检测的核酸制备方法。 展开更多

关键词 结核性胸膜炎 结核病 结核分枝杆菌 胸腔积液 核酸 聚合酶链式反应 检测

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