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结核病临床检验实验室生物安全管理指标体系构建
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作者 柳芳超 张迪 +6 位作者 弭凤玲 李自慧 黄海荣 潘丽萍 时广利 姜广路 潘军华 《中国防痨杂志》 北大核心 2025年第5期569-576,共8页
目的:构建结核病临床检验实验室生物安全管理指标体系。方法:在课题组前期实验室生物安全管理与检查督导工作经验基础上,通过文献研究集中收集国内实验室生物安全标准,包括《WS 233—2017病原微生物实验室生物安全通用准则》《CNAS—CL0... 目的:构建结核病临床检验实验室生物安全管理指标体系。方法:在课题组前期实验室生物安全管理与检查督导工作经验基础上,通过文献研究集中收集国内实验室生物安全标准,包括《WS 233—2017病原微生物实验室生物安全通用准则》《CNAS—CL05—2009实验室生物安全认可准则》《GB 19489—2008实验室生物安全通用要求》等,经课题组内部讨论初步筛选结核病临床检验实验室生物安全管理候选指标池并搭建体系框架,据此进行两轮外部专家咨询,根据专家对每一个指标的纳入排除情况以及重要性评分,确定指标体系内容,并运用层次分析法计算各个指标的权重系数,形成结核病临床检验实验室生物安全管理三级评价指标体系。结果:第一轮、第二轮分别收集专家咨询表15份和14份,咨询表回收率分别为100.0%、93.3%,第一轮主要针对指标体系结构进行删改,第二轮则进行指标重要性评分,第二轮咨询专家权威系数为0.76,咨询结果可靠。两轮调查各层级指标的协调系数均>0.1,经Kendall’s W一致性检验,除一级指标外,P值均<0.05,专家意见一致性较好。最终形成一套可操作的结核病临床检验实验室生物安全管理指标体系,包含5个一级指标、13个二级指标和44个三级指标。结论:依据科学理论构建了结核病临床检验实验室生物安全管理指标体系,可用于评价结核病临床检验实验室的生物安全管理水平,也可指导实验室通过定期自查提高管理效率,为医疗机构管理者制定管理制度与政策提供科学依据。 展开更多
关键词 结核 实验室感染 安全管理 模型 组织管理
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不同靶点环介导等温扩增技术对结核分枝杆菌检测的比较研究 被引量:4
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作者 刘洋 郭艳玲 +3 位作者 姜广路 孙琦 郑素华 张宗德 《中国防痨杂志》 CAS 2015年第8期843-847,共5页
目的探讨针对hspX、gyrB、IS6110靶基因设计引物,采用环介导等温扩增技术(LAMP)检测对结核病的诊断价值。方法肺结核组为我院收治的68例肺结核患者,对照组为我院收治的45例肺癌患者和20名健康体检者,收集痰标本后采用LAMP、定量PC... 目的探讨针对hspX、gyrB、IS6110靶基因设计引物,采用环介导等温扩增技术(LAMP)检测对结核病的诊断价值。方法肺结核组为我院收治的68例肺结核患者,对照组为我院收治的45例肺癌患者和20名健康体检者,收集痰标本后采用LAMP、定量PCR及涂片法进行分析,评价LAMP技术的临床应用价值。采用LAMP及定量PCR分别对结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA样品进行检测,评价LAMP技术的检测限;同时对鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、偶发分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、海分枝杆菌、龟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌等8种非结核分枝杆菌菌株及4株普通菌标准株包括大肠埃希菌(ATCC25922)、阴沟肠杆菌(ATCC700323)、铜绿假单胞菌(ATcc27853)和金黄色葡萄球菌标准菌株(ATcc29213)进行鉴定,评价LAMP的敏感度和特异度。结果本研究采用hspX、IS6110和gyrB靶基因进行LAMP检测,对H37Rv的DNA样品检测限分别为320amol/L,320amol/L和32amol/L。LAMP对8种非结核分枝杆菌和4种普通菌检测结果为阴性。对照组中健康志愿者定量PCR,涂片法及LAMP方法的结果均为阴性,对照组中肺癌患者中hspX,gyrB,IS6110LAMP方法和定量PCR阳性结果2例,3种靶基因位点的LAMP和定量PCR检测的特异度均为96.9%(63/65)。针对hspX、gyrB、IS6110靶基因进行LAMP检测,对68例肺结核患者痰标本检测的敏感度分别为75.0%(51/68),77.9%(53/68),73.5%(50/68);定量PCR检测的敏感度为79.4%(54/68)。3种不同基因位点LAMP技术与定量PCR检测的敏感度比较差异无统计学意义(x^2=0.82,P〉0.05),但均高于涂片法的38.2%(26/68),LAMP技术与涂片法之间差异均有统计学意义(x^2=18.71,x^2=22.02,x^2=17.18,P值均〈0.01)。结论hspX、gyrB、IS6110LAMP技术检测的敏感度和特异度均较高,尤其是针对gyrB靶基因位点进行LAMP检测的敏感度与定量PCR接近,并且高于涂片法;如果结合不同基因位点LAMP技术的检测结果进行评判可以提高该技术的敏感度。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 核酸扩增技术 结核 肺/诊断
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结核分枝杆菌Rpf-DNA疫苗对Mtb感染小鼠免疫保护作用的研究
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作者 邢爱英 刘忠泉 +8 位作者 刘洋 贾红彦 李自慧 郑晓静 曹廷明 杜凤娇 杜博平 古淑香 张宗德 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第8期532-537,共6页
目的评价Mtb复苏因子DNA疫苗(resuscitation-promoting factor DNA,Rpf-DNA)对Mtb感染宿主的免疫保护作用。方法构建复苏因子D(Rpf D-DNA)和复苏因子E(Rpf E-DNA)质粒疫苗,180只BALB/c小鼠(4周龄)分为6组,每组30只,分别用空质粒、Rpf D-... 目的评价Mtb复苏因子DNA疫苗(resuscitation-promoting factor DNA,Rpf-DNA)对Mtb感染宿主的免疫保护作用。方法构建复苏因子D(Rpf D-DNA)和复苏因子E(Rpf E-DNA)质粒疫苗,180只BALB/c小鼠(4周龄)分为6组,每组30只,分别用空质粒、Rpf D-DNA质粒、Rpf E-DNA质粒、BCG、生理盐水免疫,H37Rv标准株气溶胶感染。检测血清复苏因子(Rpf)抗体、IFN-γ;RpfD、E刺激淋巴细胞后进行淋巴细胞增殖、细胞杀伤实验;检测细胞上清IFN-γ、IL-12、IL-2;对肺组织进行病理学检测和细菌负荷(CFU)计数。结果 (1)疫苗免疫组血清Rpf D、Rpf E抗体水平:Rpf D组0.32±0.1,Rpf E组0.39±0.1,BCG组0.02±0.01,空质粒组0.01±0.0,生理盐水组0.09±0.04,空白对照组0.03±0.01,RpfD组与RpfE组抗体水平与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D:45.6,43.2,45.1,45.7;Rpf E:51.6,53.6,51.0,52.2;P值均<0.01。血清IFN-γ:Rpf D组(43.9±24.8)pg/ml,Rpf E组(45.9±21.0)pg/ml,BCG组(21.0±11.0)pg/ml,空质粒组(7.9±4.9)pg/ml,生理盐水组(4.7±2.1)pg/ml,空白对照组(5.8±4.7)pg/ml,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组比较差异有统计学意义(F值分别为Rpf D:10.2;Rpf E:12.4;P值均<0.05),与空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D:15.6,17.8,17.3;Rpf E:17.5,21.1,20.7;P值均<0.01。(2)淋巴细胞增殖实验CCK-8:Rpf D组176.0±4.2,Rpf E组183.0±4.3,BCG组101.0±1.1,空质粒组100.0±6.8,生理盐水组104.0±8.4,空白对照组116.0±2.2,RpfD、RpfE质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:9.5,10.1,10.0,9.0;Rpf E:11.2,12.9,11.7,10.3;P值均<0.05。细胞杀伤实验:Rpf D组32.0±3.2,Rpf E组30.0±4.2,BCG组16.0±5.9,空质粒组3.3±1.5,生理盐水组6.7±0.5,空白对照组7.3±3.5,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:8.8,14.5,13.7,11.9;Rpf E:8.1,12.5,11.6,11.1;P值均<0.05。(3)Rpf D、Rpf E蛋白各自刺激淋巴细胞后上清细胞因子检测:IL-2:Rpf D组9.5±2.4,RpfE组9.2±1.2,BCG组2.4±2.1,空质粒组1.2±0.3,生理盐水组1.8±1.0,空白对照组1.5±0.7,Rpf D、Rpf E质粒组与其他各组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:12.5,14.6,13.5,13.9;Rpf E:12.0,13.6,13.1,13.2;P值均<0.05。IFN-γ:Rpf D组22.2±5.7,Rpf E组28.7±14.4,BCG组16.1±10.1,空质粒组9.8±1.6,生理盐水组13.2±2.1,空白对照组15.7±2.9,RpfD、RpfE质粒组与其他各组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:7.8,12.6,8.7,8.3;Rpf E:11.3,16.4,14.7,14.2;P值均<0.05。结论实验表明复苏因子疫苗能诱导Mtb感染小鼠产生体液免疫和细胞免疫,有希望成为结核病候选疫苗之一。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 细菌蛋白质类 细胞因子类 疫苗 DNA
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血浆miR-34b-3p和miR-302a-5p在非小细胞肺癌诊断中的临床应用 被引量:16
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作者 宋治鹏 张宗德 刘洋 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期216-222,共7页
背景与目的微小核糖核酸(microRNA, miRNA)是一类长约22个核苷酸的单链非编码RNA,其表达异常与疾病密切相关。本研究旨在探讨miR-34b-3p和miR-302a-5p在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者血浆中的表达水平及其在NSCL... 背景与目的微小核糖核酸(microRNA, miRNA)是一类长约22个核苷酸的单链非编码RNA,其表达异常与疾病密切相关。本研究旨在探讨miR-34b-3p和miR-302a-5p在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者血浆中的表达水平及其在NSCLC诊断的临床应用价值研究。方法采用荧光定量PCR(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)对86例NSCLC患者、64例肺结核(pulmonary tuberculosis, PTB)患者、39例健康体检者血浆中的miR-34b-3p和miR-302a-5p含量进行测定,同时对比并结合癌胚抗原(carcino-embryonic antigen, CEA)、神经元烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)和血清骨胶素(cytokeratin 19 fragments 21-1, CYFRA21-1),分析其诊断NSCLC的价值。结果 NSCLC组血浆中miR-34b-3p及miR-302a-5p表达水平明显高于PTB组和健康对照组(P<0.05)。血浆miR-34b-3p的表达水平与肿瘤直径相关(P<0.01)。单项检测NSCLC时,miR-302a-5p的灵敏度最高(82.6%),CEA的特异度最高(81.6%)。双项检测NSCLC时,miR-34b-3p+miR-302a-5p的灵敏度最高(80.2%),miR-34b-3p+CEA的特异度最高(89.3%)。多项检测NSCLC时,miR-302a-5p+NSE+CYFRA21-1的灵敏度最高(81.4%),miR-34b-3p+CEA+NSE的特异度最高(90.3%)。当联合miR-34b-3p、miR-302a-5p和CEA进行检测时,其ROC曲线下面积AUC(area under the curve, AUC)最大,为0.832。Logistic回归模型表明:在NSCLC与对照组(PTB组+健康对照组)中,miR-34b-3p可能是NSCLC发生的独立危险因素。结论血浆miR-34b-3p、miR-302a-5p有可能成为NSCLC辅助诊断的血浆学标志物。 展开更多
关键词 肺肿瘤 诊断 微小核糖核酸 肿瘤标志物
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