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miR-99a-5p在结核分枝杆菌感染宿主巨噬细胞中的免疫调控作用
被引量：
4
1
作者
史雨婷
董静
+8 位作者
贾红彦
朱传智
杨斌
李自慧
孙琦
杜博平
邢爱英
张宗德
潘丽萍
《中国防痨杂志》
CAS
CSCD
2023年第5期464-470,共7页
目的:初步探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染THP-1细胞内特异miRNA在宿主抗结核免疫中的作用。方法:提取MTB感染及未感染THP-1细胞RNA,基于Illumina NovaSeq6000二代测序平台检测THP-1细胞内miRNA表达谱。采集4名...
目的:初步探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染THP-1细胞内特异miRNA在宿主抗结核免疫中的作用。方法:提取MTB感染及未感染THP-1细胞RNA,基于Illumina NovaSeq6000二代测序平台检测THP-1细胞内miRNA表达谱。采集4名健康受试者6 ml外周血并分离人原代巨噬细胞。应用实时荧光PCR(qRT-PCR)技术验证MTB感染THP-1细胞内特异miRNA并检测人原代巨噬细胞中靶标miRNA的表达水平。构建miRNA过表达载体,经慢病毒转染THP-1巨噬细胞获得稳定的过表达细胞株,使用qRT-PCR检测H37Rv感染的miRNA过表达细胞及对照空载体细胞中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)及γ-干扰素(IFN-γ)表达水平。结果:从16个二代测序结果表达差异明显的miRNA分子中选取既往未作研究且差异最为明显的miR-99a-5p(P=0.021)作为研究靶基因。通过qRT-PCR在THP-1细胞及原代巨噬细胞中验证,发现miR-99a-5p在THP-1感染组和原代巨噬细胞内的表达量(分别为0.482±0.148和0.433±0.072)均明显低于未感染组(1.536±0.290和1.113±0.218),差异均有统计学意义(t=6.476,P<0.001;t=3.167,P=0.019)。MTB感染miR-99a-5p过表达细胞后24 h的菌落形成单位(CFU)[64.0×10^(4)(52.0×10^(4),87.0×10^(4))]明显高于MTB感染的对照空载体细胞内CFU[17.0×10^(4)(16.0×10^(4),24.0×10^(4))],差异有统计学意义(Z=-2.323,P=0.029)。与MTB感染的对照空载体细胞相比,MTB感染的miR-99a-5p过表达细胞内TNF-α及IFN-γ的mRNA相对表达水平分别由1.018±0.310和1.687±0.135下降至0.740±0.001和0.631±0.374,差异均有统计学意义(t=4.631,P=0.010;t=3.349,P=0.010)。结论:miR-99a-5p可抑制TNF-α及IFN-γ的释放,促进MTB在巨噬细胞内的生长。MTB感染后宿主miR-99a-5p的下调表达可能在宿主抗结核感染免疫中发挥重要作用。
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关键词
分枝杆菌
结核
芯片分析技术
微RNAS
巨噬细胞
免疫调节
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职称材料
题名
miR-99a-5p在结核分枝杆菌感染宿主巨噬细胞中的免疫调控作用
被引量：
4
1
作者
史雨婷
董静
贾红彦
朱传智
杨斌
李自慧
孙琦
杜博平
邢爱英
张宗德
潘丽萍
机构
首都医科大学
附属
北京
胸科医院
/北京市
结核病
胸部
肿瘤
研究所
耐药
结核病
研究
北京市
重点实验室
首都医科大学附属北京胸科医院/北京市结核病胸部肿瘤研究所肿瘤研究中心
出处
《中国防痨杂志》
CAS
CSCD
2023年第5期464-470,共7页
基金
国家自然科学基金(81902024,82172279,82070012)
北京市自然科学基金(7192038,7212012)
+1 种基金
通州区运河计划人才项目(YH201807,YH202001)
北京市医院管理中心青年职工创新工作室-创新梦工场(202136)。
文摘
目的:初步探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染THP-1细胞内特异miRNA在宿主抗结核免疫中的作用。方法:提取MTB感染及未感染THP-1细胞RNA,基于Illumina NovaSeq6000二代测序平台检测THP-1细胞内miRNA表达谱。采集4名健康受试者6 ml外周血并分离人原代巨噬细胞。应用实时荧光PCR(qRT-PCR)技术验证MTB感染THP-1细胞内特异miRNA并检测人原代巨噬细胞中靶标miRNA的表达水平。构建miRNA过表达载体,经慢病毒转染THP-1巨噬细胞获得稳定的过表达细胞株,使用qRT-PCR检测H37Rv感染的miRNA过表达细胞及对照空载体细胞中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)及γ-干扰素(IFN-γ)表达水平。结果:从16个二代测序结果表达差异明显的miRNA分子中选取既往未作研究且差异最为明显的miR-99a-5p(P=0.021)作为研究靶基因。通过qRT-PCR在THP-1细胞及原代巨噬细胞中验证,发现miR-99a-5p在THP-1感染组和原代巨噬细胞内的表达量(分别为0.482±0.148和0.433±0.072)均明显低于未感染组(1.536±0.290和1.113±0.218),差异均有统计学意义(t=6.476,P<0.001;t=3.167,P=0.019)。MTB感染miR-99a-5p过表达细胞后24 h的菌落形成单位(CFU)[64.0×10^(4)(52.0×10^(4),87.0×10^(4))]明显高于MTB感染的对照空载体细胞内CFU[17.0×10^(4)(16.0×10^(4),24.0×10^(4))],差异有统计学意义(Z=-2.323,P=0.029)。与MTB感染的对照空载体细胞相比,MTB感染的miR-99a-5p过表达细胞内TNF-α及IFN-γ的mRNA相对表达水平分别由1.018±0.310和1.687±0.135下降至0.740±0.001和0.631±0.374,差异均有统计学意义(t=4.631,P=0.010;t=3.349,P=0.010)。结论:miR-99a-5p可抑制TNF-α及IFN-γ的释放,促进MTB在巨噬细胞内的生长。MTB感染后宿主miR-99a-5p的下调表达可能在宿主抗结核感染免疫中发挥重要作用。
关键词
分枝杆菌
结核
芯片分析技术
微RNAS
巨噬细胞
免疫调节
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
Microarray technology
MicroRNAs
Macrophages
Immunomodulation
分类号
R529.3 [医药卫生—内科学]
R511 [医药卫生—内科学]
R446 [医药卫生—诊断学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
miR-99a-5p在结核分枝杆菌感染宿主巨噬细胞中的免疫调控作用
史雨婷
董静
贾红彦
朱传智
杨斌
李自慧
孙琦
杜博平
邢爱英
张宗德
潘丽萍
《中国防痨杂志》
CAS
CSCD
2023
4
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