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小鼠心肌微血管内皮细胞的原代培养及生物学特性被引量：7: 1; 作者辛毅许秀芳 +3 位作者黄益民张颖李温斌李娜《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期565-570,共6页; 目的:探讨一种高效、稳定的从小鼠心肌组织中分离培养心肌微血管内皮细胞的方法并观察细胞的生物学特性。方法:以多聚赖氨酸对培养皿作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁分离法,结合内皮细胞专用培养基,分离培养微血管内皮细胞并进... 展开更多; 关键词心肌微血管内皮细胞原代细胞培养生物学特性小鼠; 在线阅读下载PDF 职称材料

成年小鼠心成纤维细胞的原代培养及生物学特性被引量：3: 2; 作者辛毅刘飒 +4 位作者许秀芳李温斌黄益民罗毅周玉杰《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1194-1199,共6页; 目的:建立适用于成年小鼠心成纤维细胞的体外分离培养及鉴定的技术方法。方法:应用胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶联合消化法及组织贴块法两种方法对小鼠心成纤维细胞进行体外培养。在倒置显微镜下观察心成纤维细胞生长情况;台盼蓝法测定细胞传... 展开更多; 关键词成年小鼠心成纤维细胞分离和原代培养生物学鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

绿色荧光蛋白转基因小鼠不同源性间充质干细胞原代培养及生物学特性比较被引量：1: 3; 作者辛毅李娜 +4 位作者张颖黄益民刘飒许秀芳张兆光《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1141-1147,共7页; 目的：探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠脐带和骨髓源性间充质干细胞（ MSCs ）的体外分离培养方法、生物学特性、表面标志及多向分化潜能。方法：应用Ⅱ型胶原酶消化培养法分离脐带MSCs及密度梯度离心法分离骨髓MSCs进行体外培养。在倒置显... 展开更多; 关键词脐带骨髓间充质干细胞生物学特性绿色荧光蛋白转基因小鼠; 在线阅读下载PDF 职称材料

环孢霉素A对大鼠心脏移植模型淋巴细胞分子表达与移植心脏病理学改变时相关系的影响: 4; 作者许秀芳辛毅 +5 位作者李娜张颖黄益民顾云周玉杰张兆光《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期161-169,共9页; 【目的】通过环孢素A(CsA)干预的异体异位心脏移植动物模型的研究,对移植术后淋巴细胞分子表达、心肌组织淋巴细胞浸润能力和移植心脏病理改变时相进行比较,探讨环孢素A对其影响。【方法】SD大鼠为移植心脏供体,Wistar大鼠为移植心脏受... 展开更多; 关键词大鼠心脏移植模型心脏外科心肌组织淋巴细胞浸润病理学外周血淋巴细胞基因表达时相免疫学; 在线阅读下载PDF 职称材料

大鼠心肌缺血/再灌注损伤基因表达谱特征的初步观察被引量：1: 5; 作者刘艳霞顾云 +3 位作者吴永涛辛毅罗毅黄益民《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期984-986,共3页; 目的:观察心肌缺血/再灌注损伤前后基因差异表达,探讨缺血/再灌注后心肌细胞损伤的分子生物学机制。方法:提取大鼠缺血/再灌注前后心肌组织mRNA并纯化,用Affymetrix RAT 230A基因表达谱芯片,对表达差异基因进行检测。结果:按差异显著阳... 展开更多; 关键词大鼠基因表达缺血/再灌注; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小鼠心肌微血管内皮细胞的原代培养及生物学特性被引量：7: 1; 作者辛毅许秀芳黄益民张颖李温斌李娜; 机构首都医科大学附属北京安贞医院; 出处《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期565-570,共6页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.81070077) 省部共建重点教育部心血管重塑相关疾病重点实验室基金资助项目(No.110267); 文摘目的:探讨一种高效、稳定的从小鼠心肌组织中分离培养心肌微血管内皮细胞的方法并观察细胞的生物学特性。方法:以多聚赖氨酸对培养皿作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁分离法,结合内皮细胞专用培养基,分离培养微血管内皮细胞并进行扩增。利用倒置显微镜观察细胞生长情况;台盼蓝法、绘制生长曲线和MTT法分别测定心肌微血管内皮细胞传代成活率、不同代生长及增殖特征;以DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1荧光双标,结合CD31、vWF和CD34免疫荧光鉴定细胞表面特异性抗原;体外血管形成实验检测心肌微血管内皮细胞的功能。结果:酶消化、差速贴壁法分离培养2 d后,细胞呈散在的、小簇状聚集性生长,4～5 d迅速生长呈单层排列,细胞为梭形、三角形或多角形,7～8 d后呈铺路石样即可传代;传代细胞经台盼蓝法检测成活率均为95%以上;第1、3代细胞生长曲线近似"S"形,MTT法显示第1、3代细胞在第2～4 d吸光度变化较明显(P<0.05);随传代次数的增加,第5代细胞生长曲线近似平缓,吸光度无明显变化,细胞逐渐衰老;DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1荧光双标阳性率为(89.2±3.5)%,相关特异性抗原CD31、vWF和CD34免疫荧光鉴定阳性率为(56.7±3.7)%、(78.5±2.6)%和(67.8±4.2)%;体外血管形成实验显示,6～12 h后出现明显的管腔结构。结论:以多聚赖氨酸作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁法并结合内皮细胞专用培养基,可获得纯度较高的小鼠心肌微血管内皮细胞,为心脏疾病的研究提供种子细胞。; 关键词心肌微血管内皮细胞原代细胞培养生物学特性小鼠; Keywords Myocardial microvascular endothelial cells Primary cell culture Biological characteristics Mice; 分类号 R332 [医药卫生—人体生理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名成年小鼠心成纤维细胞的原代培养及生物学特性被引量：3: 2; 作者辛毅刘飒许秀芳李温斌黄益民罗毅周玉杰; 机构首都医科大学附属北京安贞医院、北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室首都医科大学附属北京安贞医院、北京市心肺血管疾病研究所实验中心首都医科大学附属北京安贞医院心外科; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1194-1199,共6页; 基金国家自然科学基金项目(81070077) 省部共建重点教育部心血管重塑相关疾病重点实验室(110267) +1 种基金北京市自然科学基金项目(7072012); 文摘目的:建立适用于成年小鼠心成纤维细胞的体外分离培养及鉴定的技术方法。方法:应用胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶联合消化法及组织贴块法两种方法对小鼠心成纤维细胞进行体外培养。在倒置显微镜下观察心成纤维细胞生长情况;台盼蓝法测定细胞传代成活率;通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测比较两种方法获得的心成纤维细胞的增殖情况;观察不同培养基对心成纤维细胞生长的影响;苏木素-伊红(HE)染色观察细胞形态,采用免疫荧光染色观察培养细胞波形蛋白、纤维连结蛋白及盘状结构域受体2(DDR2)的表达。结果:酶联合消化法分离培养的细胞1 d后,在倒置相差显微镜下可见细胞贴壁呈长椭圆形生长,3 d后生长迅速呈长梭形;贴块法培养的细胞4 d后,可见细胞从组织块边缘长出,7 d后细胞数量逐渐增多,细胞成活率均为97%。两种方法获得的第3代细胞生长曲线近似"S"形、MTT法显示3～5 d细胞增殖较明显;酶联合消化法培养的细胞G0-G1期和S+G2+M期所占比例分别为62.61%和30.87%,组织贴块法培养的细胞G0-G1期和S+G2+M期所占比例分别为69.24%和28.05%;含100 mL/L胎牛血清的HG/DMEM培养基培养的细胞出现明显对数期。两种方法培养的第3代细胞行苏木素-伊红染色可见细胞漩涡状排列,免疫荧光检测波形蛋白、纤维连接蛋白及盘状结构域受体2表达阳性。结论:两种方法均可高效获得心成纤维细胞在体外稳定培养。与贴块法培养相比较,利用联合酶消化法能较有效的获得波形蛋白、纤维连结蛋白、DDR2高表达阳性的心成纤维细胞。; 关键词成年小鼠心成纤维细胞分离和原代培养生物学鉴定; Keywords adult mice cardiac fibroblasts isolation primary culture bio-assay; 分类号 R-332 [医药卫生]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名绿色荧光蛋白转基因小鼠不同源性间充质干细胞原代培养及生物学特性比较被引量：1: 3; 作者辛毅李娜张颖黄益民刘飒许秀芳张兆光; 机构首都医科大学附属北京安贞医院; 出处《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1141-1147,共7页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.81370228) 省部共建重点教育部心血管重塑相关疾病重点实验室项目(No.110267) +1 种基金北京市自然科学基金资助项目(No.7072012); 文摘目的：探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠脐带和骨髓源性间充质干细胞（ MSCs ）的体外分离培养方法、生物学特性、表面标志及多向分化潜能。方法：应用Ⅱ型胶原酶消化培养法分离脐带MSCs及密度梯度离心法分离骨髓MSCs进行体外培养。在倒置显微镜下观察2种细胞的生长特点，运用生长曲线和MTT法检测其原代细胞增殖能力，台盼蓝法测定细胞传代成活率，采用流式细胞术测定2种第3代（ P3）细胞DNA周期及表面标志物的表达，并比较其向成脂细胞和成骨细胞的分化潜能。结果：酶消化法分离培养的脐带MSCs 1 d后，细胞贴壁呈成纤维形，2 d后呈漩涡状生长且增殖明显，3 d后达80％融合即可传代；应用密度梯度离心法分离骨髓MSCs，体外培养4 d后，细胞贴壁呈圆形、梭形和多角形生长，5 d后呈克隆样生长且增殖明显，7 d后达80％融合即可传代。原代培养的脐带MSCs生长曲线近似“S”形，骨髓MSCs 生长曲线较平缓；MTT法显示脐带MSCs在3～5 d增殖较明显，骨髓MSCs 7 d后细胞增殖较明显。2种P3细胞传代成活率均为96％以上，G0／G1期细胞均为85％以上，无明显差异（P＞0．05）；2种P3细胞CD44、CD90和CD105阳性率均为（60．7±2．3）％以上高表达，CD45、CD19、CD14和CD79a均为（25．6±4．8）％低表达，两者无明显差异（ P＞0．05）；2种MSCs在体外均具有向成骨细胞和成脂细胞分化的潜能，脐带MSCs向成骨及成脂细胞分化率均为90％以上，与骨髓MSCs的分化潜能比较有显著差异（ P＜0.05）。结论：脐带MSCs较骨髓MSCs具有较强的增殖能力及分化潜能。绿色荧光蛋白转基因小鼠的脐带MSCs可作为较好干细胞示踪的细胞源。; 关键词脐带骨髓间充质干细胞生物学特性绿色荧光蛋白转基因小鼠; Keywords Umbilical cord Bone marrow Mesenchymal stem cells Biological characteristics Green fluorescent protein Transgenic mice; 分类号 R392-33 [医药卫生—免疫学] Q254 [生物学—细胞生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名环孢霉素A对大鼠心脏移植模型淋巴细胞分子表达与移植心脏病理学改变时相关系的影响: 4; 作者许秀芳辛毅李娜张颖黄益民顾云周玉杰张兆光; 机构首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室首都医科大学附属北京安贞医院外科; 出处《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期161-169,共9页; 基金首都医学发展科研基金(重点学科)(ZB199814); 文摘【目的】通过环孢素A(CsA)干预的异体异位心脏移植动物模型的研究,对移植术后淋巴细胞分子表达、心肌组织淋巴细胞浸润能力和移植心脏病理改变时相进行比较,探讨环孢素A对其影响。【方法】SD大鼠为移植心脏供体,Wistar大鼠为移植心脏受体。实验分为心脏移植对照组和环孢素A干预+心脏移植组实验组两组。在移植前及移植后24 h、3 d、7d、10 d和12 d时间点免疫荧光测定淋巴细胞在心肌组织中浸润能力、实时定量PCR检测淋巴细胞编码基因CD4、CD8和酪氨酸激酶P59 mRNA表达水平、心肌组织病理学检查判断排斥反应程度。【结果】①心脏移植后24 h内,外周血淋巴细胞基因的转录与表达为一过性降低;②心肌组织CD4+、CD8+淋巴细胞浸润和Ⅱ级排斥反应病理改变,主要出现于心脏移植后的d3～d7;③环孢素A不能有效抑制移植后3 d内心肌组织CD4+、CD8+淋巴细胞浸润程度的快速增加,但可明显降低移植后d3～d7的心肌组织CD4+淋巴细胞的浸润程度;④环孢素A不能完全阻断淋巴细胞P59基因的表达;⑤环孢素A不能有效抑制淋巴细胞CD4基因正调表达,但可抑制CD8基因的转录。【结论】环孢素A的移植排斥反应的抑制作用在大鼠移植后d3～d7。淋巴细胞基因表达、心肌组织淋巴细胞浸润与排斥反应病理改变有关。这将有助于同种移植病人环孢素A的临床应用。; 关键词大鼠心脏移植模型心脏外科心肌组织淋巴细胞浸润病理学外周血淋巴细胞基因表达时相免疫学; Keywords rat heart transplantation model cardiac surgery lymphocytes infiltrating ability in myocardial tissues pathology time phages of the peripheral blood leukocyte gene expression immunology; 分类号 R329.4 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大鼠心肌缺血/再灌注损伤基因表达谱特征的初步观察被引量：1: 5; 作者刘艳霞顾云吴永涛辛毅罗毅黄益民; 机构首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室首都医科大学附属北京安贞医院小儿心脏外科; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期984-986,共3页; 基金卫生部999中药注射液科研基金资助项目(200307); 文摘目的:观察心肌缺血/再灌注损伤前后基因差异表达,探讨缺血/再灌注后心肌细胞损伤的分子生物学机制。方法:提取大鼠缺血/再灌注前后心肌组织mRNA并纯化,用Affymetrix RAT 230A基因表达谱芯片,对表达差异基因进行检测。结果:按差异显著阳性标准,从14000个基因中筛选出缺血/再灌注后差异表达基因179条,其中123条表达上调,56条表达下调,包括原癌基因、细胞周期、信号转导、细胞外基质、细胞骨架蛋白、转录因子、DNA损伤修复基因、凋亡相关蛋白及核糖体蛋白等相关编码基因。结论:用cDNA表达谱芯片分析心肌缺血/再灌注后基因表达,能快速筛选出再灌注损伤相关基因,为临床上更有效地预防缺血/再灌注损伤提供根据。; 关键词大鼠基因表达缺血/再灌注; 分类号 R542.2 [医药卫生—心血管疾病]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	小鼠心肌微血管内皮细胞的原代培养及生物学特性	辛毅许秀芳黄益民张颖李温斌李娜	《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心	2013	7	在线阅读下载PDF 职称材料
2	成年小鼠心成纤维细胞的原代培养及生物学特性	辛毅刘飒许秀芳李温斌黄益民罗毅周玉杰	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2012	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	绿色荧光蛋白转基因小鼠不同源性间充质干细胞原代培养及生物学特性比较	辛毅李娜张颖黄益民刘飒许秀芳张兆光	《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心	2014	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	环孢霉素A对大鼠心脏移植模型淋巴细胞分子表达与移植心脏病理学改变时相关系的影响	许秀芳辛毅李娜张颖黄益民顾云周玉杰张兆光	《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2013	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	大鼠心肌缺血/再灌注损伤基因表达谱特征的初步观察	刘艳霞顾云吴永涛辛毅罗毅黄益民	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2007	1	在线阅读下载PDF 职称材料