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糖尿病肾病早期诊断标志物的研究新进展 被引量：59
1
作者 宋丽妮 刘敬怡 +3 位作者 张怡尘 曹曦 袁明霞 杨金奎 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第2期145-150,共6页
糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)是2型糖尿病病人(type 2 diabetes mellitus,T2DM)最常见、最严重的慢性合并症,发病率逐年升高,已成为危害人类的重大疾病。早期经治疗后多可逆转,晚期则发展成终末期肾病。因此,及早诊断和预测... 糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)是2型糖尿病病人(type 2 diabetes mellitus,T2DM)最常见、最严重的慢性合并症,发病率逐年升高,已成为危害人类的重大疾病。早期经治疗后多可逆转,晚期则发展成终末期肾病。因此,及早诊断和预测DKD对临床治疗显得尤为重要。目前,临床上以微量白蛋白尿(microalbuminuria,MAU)作为诊断2型糖尿病肾损害的早期指标,然而,其预测价值受到质疑。近年来,人们发现蛋白质组学可能成为诊断糖尿病肾病的新工具,触珠蛋白(haptoglobin,HP)这种多功能的急性期时相蛋白可能与DKD的发生及发展密切相关。因此,本文就触珠蛋白与糖尿病肾病发病机制的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 微量白蛋白尿 触珠蛋白
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基于CRISPR/Cas9技术建立Lepr与eNos双基因敲除的糖尿病肾病小鼠模型 被引量：3
2
作者 赵苗妙 李明嘉 +3 位作者 李小亚 段蕊 张静宜 杨金奎 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期392-398,共7页
目的基于CRISPR/Cas9基因编辑技术建立瘦素受体基因(leptin receptor,Lepr)与血管内皮一氧化氮合酶基因(endothelial nitric oxide synthase,eNos)双基因敲除(double-knockout,DKO)小鼠模型,构建晚期糖尿病肾病小鼠模型。方法根据eNos... 目的基于CRISPR/Cas9基因编辑技术建立瘦素受体基因(leptin receptor,Lepr)与血管内皮一氧化氮合酶基因(endothelial nitric oxide synthase,eNos)双基因敲除(double-knockout,DKO)小鼠模型,构建晚期糖尿病肾病小鼠模型。方法根据eNos基因制备对应的gRNA,将CRISPR-Cas9体系显微注射于C57BL/Ks(BKS)背景小鼠的受精卵内。将受精卵转移至有假孕状态雌性小鼠的输卵管内部。幼鼠出生后经聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定及测序分析分选出为eNos^(+/-)基因型的F0代阳性小鼠,获得BKS背景下的Lepr基因杂合小鼠,即基因型为Lepr^(db/m)的Lepr-F0代杂合子小鼠。将eNos-F0与Lepr-F0代小鼠杂交,获得eNos^(+/-)/Lepr^(db/m)双杂合F1代小鼠,将双杂合F1代小鼠进一步交配,筛选得到Lepr与eNos双基因敲除小鼠。采用PCR法鉴定小鼠基因型,按基因鉴定结果分为野生型(wild-type,WT)组与DKO组小鼠。监测各组小鼠体质量、血糖与饮水进食量;采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠尿白蛋白与尿肌酐水平,并计算尿白蛋白排泄率;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)与过碘酸六胺银(periodic acid-silver metheramine,PASM)染色检查各组小鼠肾组织病理改变。结果PCR检测结果显示,成功构建lepr^(db/db)/eNos^(-/-)DKO小鼠。与同窝对照组相比,DKO小鼠的体质量、血糖水平与饮水进食量均显著高于同窝对照小鼠。DKO小鼠的尿白蛋白与尿白蛋白排泄率显著高于WT小鼠。病理学结果显示,DKO小鼠的肾小球体积明显增大,系膜基质增生明显。结论基于CRISPR/Cas9基因编辑技术可成功构建lepr^(db/db)/eNos^(-/-)DKO小鼠,DKO小鼠可反映糖尿病肾病的典型表现,为深入研究糖尿病肾病的作用机制提供动物模型。 展开更多
关键词 基因敲除 CRISPR/Cas9技术 糖尿病肾病 ENOS Lepr
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Kcnh6点突变单基因糖尿病家系的小鼠模型构建及表型分析
3
作者 熊枫然 卢晶 +4 位作者 张英超 谢荣荣 赵儒轩 李奇 杨金奎 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第4期575-581,共7页
目的通过CRISPR/Cas9技术构建Kcnh6基因P235L位点基因敲入定点突变小鼠模型,并验证该突变能否成功复制人类糖尿病家系表型,为接下来研究Kcnh6基因在糖尿病发病中的作用提供更精确的实验工具。方法设计针对已知糖尿病家系点突变位点的sgR... 目的通过CRISPR/Cas9技术构建Kcnh6基因P235L位点基因敲入定点突变小鼠模型,并验证该突变能否成功复制人类糖尿病家系表型,为接下来研究Kcnh6基因在糖尿病发病中的作用提供更精确的实验工具。方法设计针对已知糖尿病家系点突变位点的sgRNA(small guide RNA,sgRNA),同时制作一个携带靶位点同源臂、突变位点序列的供体DNA敲入载体。将sgRNA、cas9 mRNA和敲入载体通过显微注射移入小鼠的受精卵,选取其中存活的受精卵将其移植入假孕小鼠子宫,繁育得到子代小鼠。采用聚合酶链反应和基因测序等方法检测子代小鼠Kcnh6基因碱基突变情况。监测基因敲入小鼠的体质量和并对小鼠做糖耐量和胰岛素分泌实验。结果成功构建Kcnh6-P235L位点基因敲入纯合子小鼠。在高脂饲料喂养条件下,与同窝野生型(wild type,WT)小鼠相比,Kcnh6基因插入(knock in,KI)点突变小鼠的体质量增加,糖耐量及胰岛素分泌功能受损。结论成功构建了Kcnh6基因点突变敲入小鼠模型,且此模型具有糖尿病相关表型。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 定点突变 Kcnh6基因 糖耐量异常
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人ether-α-go-go钾通道减少肝脏的内质网应激和凋亡
4
作者 卢晶 沈涵 +5 位作者 程呈 刘敬怡 朱晓蓉 谢荣荣 袁明霞 杨金奎 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第1期45-52,共8页
目的研究人ether-α-go-go(human ether-α-go-go related gene,h ERG)钾通道在肝细胞中与内质网应激和凋亡的关系。方法选取雄性20周龄h ERG基因敲除(knockout,KO)及同窝野生(wild type,WT)小鼠,测量体质量、摄食量;肝脏石蜡切片HE染色... 目的研究人ether-α-go-go(human ether-α-go-go related gene,h ERG)钾通道在肝细胞中与内质网应激和凋亡的关系。方法选取雄性20周龄h ERG基因敲除(knockout,KO)及同窝野生(wild type,WT)小鼠,测量体质量、摄食量;肝脏石蜡切片HE染色; Western blotting法检测糖异生关键酶葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6pase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)在肝脏的表达水平; Western blotting和荧光定量PCR方法检测肝脏凋亡相关基因活化的半胱天冬酶半胱天冬酶3(cleaved-cysteine aspartyl protease 3,cleaved-caspase 3),B细胞淋巴瘤因子2(B-cell lymphoma 2,Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(Bcl2 associated X protein,Bax)表达水平;同时检测内质网应激相关基因磷酸化真核细胞翻译起始因子2(phosphorylated-eukaryotic translation initiation factor 2α,p-eIF2α)、激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)以及C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)等基因的表达。经尾静脉给KO小鼠注射hERG慢病毒(lentivirus,LV)后,Western blotting法检测胰岛及肝脏内质网应激和凋亡相关指标。结果与WT小鼠相比,KO小鼠体质量及摄食量差异无统计学意义,肝细胞轻度肿胀,肝脏糖代谢G6Pase表达水平无明显变化,而PEPCK表达上调提示hERG敲除引起肝脏糖代谢异常。KO小鼠肝脏的内质网应激及凋亡相关指标均上调,提示KO小鼠体内存在内质网应激和凋亡。KO小鼠体内过表达h ERG后,改善了小鼠的肝脏内质网应激及凋亡。结论 hERG钾通道可以通过减少肝脏内质网应激和凋亡改善肝细胞内糖代谢。 展开更多
关键词 人ether-α-go-go相关基因 内质网应激 凋亡 肝脏
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β位淀粉样前体蛋白裂解酶2基因敲除斑马鱼动物模型的构建及其初步应用
5
作者 卢晶 吴谦 +3 位作者 谢荣荣 仇海燕 程呈 杨金奎 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第6期839-843,共5页
目的构建β位淀粉样前体蛋白裂解酶2(β-site APP-cleaving enzyme 2,BACE2)基因敲除斑马鱼动物模型并及其初步探索其应用。方法运用CRISPR/Cas9技术,在斑马鱼中设计针对靶点的gRNA,使之诱导靶点突变,经测序鉴定得到突变体。结果BACE2... 目的构建β位淀粉样前体蛋白裂解酶2(β-site APP-cleaving enzyme 2,BACE2)基因敲除斑马鱼动物模型并及其初步探索其应用。方法运用CRISPR/Cas9技术,在斑马鱼中设计针对靶点的gRNA,使之诱导靶点突变,经测序鉴定得到突变体。结果BACE2纯合突变体在早期部分无法存活,RT-PCR结果显示BACE2基因在斑马鱼的早期发育中持续表达。结论 BACE2基因敲除的斑马鱼动物模型将为进一步研究BACE2基因在斑马鱼胰腺发育中的作用和针对糖尿病的药物靶点筛选提供有效工具。 展开更多
关键词 基因敲除 CRISPR/Cas9 斑马鱼 β位淀粉样前体蛋白裂解酶2
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KCNH6基因肝脏特异性敲除小鼠的构建及其初步应用
6
作者 卢晶 李奇 +2 位作者 朱晓蓉 谢荣荣 杨金奎 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第1期8-13,共6页
目的构建KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠,并监测其肝脏血脂变化。方法运用Cas9技术构建KCNH6 flox/flox转基因小鼠,将其与肝脏细胞特异性表达Cre重组酶工具鼠(Alb-cre)进行杂交,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方... 目的构建KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠,并监测其肝脏血脂变化。方法运用Cas9技术构建KCNH6 flox/flox转基因小鼠,将其与肝脏细胞特异性表达Cre重组酶工具鼠(Alb-cre)进行杂交,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法鉴定基因型。监测基因敲除小鼠和同窝对照小鼠的体质量和进食量。分别检测8周和20周雌雄各两组小鼠的三酰甘油、胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇。结果成功构建KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠,其基因型为KCNH6 flox/flox/Cre T。与同窝对照组相比,基因敲除小鼠的体质量和进食量均无明显变化。8周雄性和雌性小鼠的血脂无明显变化。20周时雄性小鼠的胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇均有明显升高。结论成功构建了KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠动物模型,成年雄性小鼠存在肝脏血脂代谢异常。动物模型的构建为探讨KCNH6基因在肝脏脂代谢中的作用提供重要研究平台。 展开更多
关键词 KCNH6 条件性敲除 肝脏特异性 Alb-cre 脂代谢
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Unc13基因胰岛β细胞条件性敲除小鼠模型的构建和鉴定 被引量：2
7
作者 李奇 卢晶 +2 位作者 朱晓蓉 熊枫然 杨金奎 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第1期14-20,共7页
目的构建Cre重组酶系统调控的Unc13基因胰岛β细胞条件性敲除小鼠,为Unc13基因在胰岛素分泌中扮演的角色和作用机制的体内实验研究提供更特异的动物模型。方法运用CRISPR/Cas9技术构建Unc13 flox/flox转基因小鼠,将其与胰岛β细胞特异... 目的构建Cre重组酶系统调控的Unc13基因胰岛β细胞条件性敲除小鼠,为Unc13基因在胰岛素分泌中扮演的角色和作用机制的体内实验研究提供更特异的动物模型。方法运用CRISPR/Cas9技术构建Unc13 flox/flox转基因小鼠,将其与胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶(Ins2-cre)工具鼠进行杂交,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和测序等方法对其子代小鼠的基因型进行鉴定,并对该基因敲除(knock out,KO)小鼠及其同窝野生(wild type,WT)小鼠的体质量、糖耐量、胰岛素分泌水平进行测定。结果成功构建胰岛β细胞特异性Unc13基因条件性敲除小鼠(以下简称为Unc13 KO鼠)。进一步研究显示Unc13 KO鼠与WT鼠相比,体质量无明显变化,但糖耐量受损,胰岛素第一时相分泌下降。结论成功构建了Unc13基因胰岛β细胞条件敲除小鼠动物模型,为探讨Unc13基因在糖尿病发生、发展中的作用提供研究平台。 展开更多
关键词 基因敲除 Cre-LoxP重组酶系统 胰岛素分泌 Unc13基因
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G蛋白偶联受体MAS对肝脏糖脂代谢的影响 被引量：1
8
作者 张怡尘 曹曦 杨金奎 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第3期409-416,共8页
目的探究G蛋白偶联受体MAS(MAS receptor,MASR)对肝脏糖脂代谢的影响。方法采用MAS腺病毒感染人肝癌细胞株HepG2细胞,再加入毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)诱导内质网应激,检测HepG2细胞内三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total chol... 目的探究G蛋白偶联受体MAS(MAS receptor,MASR)对肝脏糖脂代谢的影响。方法采用MAS腺病毒感染人肝癌细胞株HepG2细胞,再加入毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)诱导内质网应激,检测HepG2细胞内三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)及糖原(glycogen)含量;Real-time PCR检测HepG2细胞内内质网应激、细胞凋亡以及糖脂代谢相关基因mRNA水平;Western blotting法检测、葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6pase)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、乙酰辅酶A羧化酶α(acetyl CoA carboxylaseα,ACCα)、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶α(phosphorylated-acetyl CoA carboxylaseα,p-ACCα)、蛋白水平。结果内质网应激诱导MAS基因的表达;MAS过表达明显降低内质网应激相关基因C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、活化转录因子6(activating transcription factor6,ATF6)、X盒结合蛋白1(X box-binding protein1,Xbp1)和肌醇需求酶1(inositol requiring protein-1,IRE1)的表达,同时,细胞凋亡相关基因Bax和Caspase-12表达明显降低。MAS过表达降低Tg诱导的HepG2细胞内三酰甘油,此外HepG2细胞内糖原浓度升高。同时,在分子水平,糖异生关键酶G6pase、PEPCK在mRNA及蛋白水平表达下调,脂质合成相关的FAS和ACCα表达也下调,差异均有统计学意义。结论MAS改善HepG2细胞糖脂代谢,可能与MAS对肝脏内质网应激和凋亡的保护作用有关。 展开更多
关键词 MAS受体 内质网应激 细胞凋亡 肝脏糖脂代谢
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