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使用CRISPR/Cas9技术构建DNMT3A R882H细胞系用于质控急性髓系白血病分子检测
被引量：
2
1
作者
王宁
魏亚丽
+2 位作者
安旭
曹沁梅
周睿
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第8期1118-1123,共6页
对于不同基因位点的突变,急性髓系白血病的发病机制和治疗策略各不相同,因此精准的分子检测在急性髓系白血病的诊断中发挥至关重要的作用。但是目前临床实验室进行分子检测时,缺乏高度模拟病人样本的室内质控品,同时也无完善的外部质量...
对于不同基因位点的突变,急性髓系白血病的发病机制和治疗策略各不相同,因此精准的分子检测在急性髓系白血病的诊断中发挥至关重要的作用。但是目前临床实验室进行分子检测时,缺乏高度模拟病人样本的室内质控品,同时也无完善的外部质量评估系统来评估临床实验室检测结果的正确性。为了提高临床实验室分子检测的正确性和可信度,我们使用CRISPR/Cas9技术构建DNMT3A(R882H,2645G>A)HEK293T细胞系,以用于急性髓系白血病分子检测的质量控制。同时将单链供体模板中cas9蛋白识别位点AGG更换为AGA,以阻止同源重组的细胞系再次被cas9蛋白切割,从而提高同源重组细胞系制作的成功几率。经验证构建成功的DNMT3A(R882H,2645G>A)细胞系能够稳定遗传,同时使用该细胞系DNA提取产物制作的室间质评样本中目的基因的突变频率,在2种Sanger测序仪器和3种高通量测序仪器上得到较好的验证。以上结果表明,制备的DNMT3A(R882H,2645G>A)HEK293T细胞系的DNA提取产物不仅可用作室内质量控制,同时也能作为监控不同厂家、多种平台的室间质评样本,从而提高临床实验室分子检测的准确性和可信度。
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关键词
急性髓系白血病
CRISPR/Cas9
高通量测序
Sanger法测序
质控品
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职称材料
题名
使用CRISPR/Cas9技术构建DNMT3A R882H细胞系用于质控急性髓系白血病分子检测
被引量：
2
1
作者
王宁
魏亚丽
安旭
曹沁梅
周睿
机构
首都医科大学第三临床医学院北京朝阳医院检验科
北京
通州妇幼保健
医院
检验
科
首都医科大学
临床
医学院
中日友好
医院
检验
科
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第8期1118-1123,共6页
基金
国家自然科学基金项目(No.81901350)资助。
文摘
对于不同基因位点的突变,急性髓系白血病的发病机制和治疗策略各不相同,因此精准的分子检测在急性髓系白血病的诊断中发挥至关重要的作用。但是目前临床实验室进行分子检测时,缺乏高度模拟病人样本的室内质控品,同时也无完善的外部质量评估系统来评估临床实验室检测结果的正确性。为了提高临床实验室分子检测的正确性和可信度,我们使用CRISPR/Cas9技术构建DNMT3A(R882H,2645G>A)HEK293T细胞系,以用于急性髓系白血病分子检测的质量控制。同时将单链供体模板中cas9蛋白识别位点AGG更换为AGA,以阻止同源重组的细胞系再次被cas9蛋白切割,从而提高同源重组细胞系制作的成功几率。经验证构建成功的DNMT3A(R882H,2645G>A)细胞系能够稳定遗传,同时使用该细胞系DNA提取产物制作的室间质评样本中目的基因的突变频率,在2种Sanger测序仪器和3种高通量测序仪器上得到较好的验证。以上结果表明,制备的DNMT3A(R882H,2645G>A)HEK293T细胞系的DNA提取产物不仅可用作室内质量控制,同时也能作为监控不同厂家、多种平台的室间质评样本,从而提高临床实验室分子检测的准确性和可信度。
关键词
急性髓系白血病
CRISPR/Cas9
高通量测序
Sanger法测序
质控品
Keywords
acute myeloid leukemia(AML)
CRISPR/Cas9
next-generation sequencing
sanger sequencing
quality control materials
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
使用CRISPR/Cas9技术构建DNMT3A R882H细胞系用于质控急性髓系白血病分子检测
王宁
魏亚丽
安旭
曹沁梅
周睿
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
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