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反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达
被引量：
1
1
作者
袁艳鹏
关云谦
+2 位作者
林庆玲
薛金花
蔡彦宁
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2011年第3期365-370,共6页
目的建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nestedreverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系。方法选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,p...
目的建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nestedreverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系。方法选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,per2,cry1和cry2,以及看家基因β-actin,分别设计和优化巢式引物对。以基因质粒为模板,检测巢式多重PCR体系的灵敏度。体外转录得到各个基因的RNA模板,并检测反转录巢式多重PCR体系的灵敏度。使用手动微操作器,显微镜下负压获取悬浮单个NIH/3T3细胞,使用反转录巢式多重PCR体系检测其中目的时钟基因。应用实时定量PCR检测整体水平时钟基因表达情况,与单细胞水平进行比较。结果巢式多重PCR检测体系可以检测出单拷贝质粒DNA。反转录巢式多重PCR能够检测出4拷贝RNA模板。利用上述体系发现,NIH/3T3单细胞中时钟基因环路表达存在很大差异,同时发现群体水平per1和per2表达的高峰和低谷间差异有统计学意义,而单细胞水平per1表达则差异无统计学意义。结论建立了高度灵敏的用于检测时钟基因表达的反转录巢式多重PCR体系,揭示了单细胞水平时钟基因表达的异质性,也验证了整体水平与单细胞水平时钟基因表达的差异。
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关键词
反转录巢式多重聚合酶链式反应
时钟基因
单细胞
NIH/3T3
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职称材料
题名
反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达
被引量：
1
1
作者
袁艳鹏
关云谦
林庆玲
薛金花
蔡彦宁
机构
首都医科大学宣武医院
神经
生物学研究室
首都医科大学宣武医院细胞治疗室教育部神经变性病重点实验室
出处
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2011年第3期365-370,共6页
基金
国家自然科学基金(81071011
30400148)~~
文摘
目的建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nestedreverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系。方法选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,per2,cry1和cry2,以及看家基因β-actin,分别设计和优化巢式引物对。以基因质粒为模板,检测巢式多重PCR体系的灵敏度。体外转录得到各个基因的RNA模板,并检测反转录巢式多重PCR体系的灵敏度。使用手动微操作器,显微镜下负压获取悬浮单个NIH/3T3细胞,使用反转录巢式多重PCR体系检测其中目的时钟基因。应用实时定量PCR检测整体水平时钟基因表达情况,与单细胞水平进行比较。结果巢式多重PCR检测体系可以检测出单拷贝质粒DNA。反转录巢式多重PCR能够检测出4拷贝RNA模板。利用上述体系发现,NIH/3T3单细胞中时钟基因环路表达存在很大差异,同时发现群体水平per1和per2表达的高峰和低谷间差异有统计学意义,而单细胞水平per1表达则差异无统计学意义。结论建立了高度灵敏的用于检测时钟基因表达的反转录巢式多重PCR体系,揭示了单细胞水平时钟基因表达的异质性,也验证了整体水平与单细胞水平时钟基因表达的差异。
关键词
反转录巢式多重聚合酶链式反应
时钟基因
单细胞
NIH/3T3
Keywords
multiplex nested RT-PCR
clock gene
single cell
NIH/3T3
分类号
R74 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达
袁艳鹏
关云谦
林庆玲
薛金花
蔡彦宁
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2011
1
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