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反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达
被引量：
1
1
作者
袁艳鹏
关云谦
+2 位作者
林庆玲
薛金花
蔡彦宁
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2011年第3期365-370,共6页
目的建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nestedreverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系。方法选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,p...
目的建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nestedreverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系。方法选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,per2,cry1和cry2,以及看家基因β-actin,分别设计和优化巢式引物对。以基因质粒为模板,检测巢式多重PCR体系的灵敏度。体外转录得到各个基因的RNA模板,并检测反转录巢式多重PCR体系的灵敏度。使用手动微操作器,显微镜下负压获取悬浮单个NIH/3T3细胞,使用反转录巢式多重PCR体系检测其中目的时钟基因。应用实时定量PCR检测整体水平时钟基因表达情况,与单细胞水平进行比较。结果巢式多重PCR检测体系可以检测出单拷贝质粒DNA。反转录巢式多重PCR能够检测出4拷贝RNA模板。利用上述体系发现,NIH/3T3单细胞中时钟基因环路表达存在很大差异,同时发现群体水平per1和per2表达的高峰和低谷间差异有统计学意义,而单细胞水平per1表达则差异无统计学意义。结论建立了高度灵敏的用于检测时钟基因表达的反转录巢式多重PCR体系,揭示了单细胞水平时钟基因表达的异质性,也验证了整体水平与单细胞水平时钟基因表达的差异。
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关键词
反转录巢式多重聚合酶链式反应
时钟基因
单细胞
NIH/3T3
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职称材料
人外周血单个核细胞体外重编程为少突胶质前体细胞研究
2
作者
唐玺和
李默
+4 位作者
王淑艳
李鹏燕
张愚
陈志国
陈惠
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2017年第4期553-558,共6页
目的利用非整合质粒载体在体外将成人外周血中单个核细胞重编程为少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)。方法经外周静脉采集志愿者血液5 m L,利用Ficoll-Paquem密度梯度离心法获得单个核细胞,体外扩增培养后,电转...
目的利用非整合质粒载体在体外将成人外周血中单个核细胞重编程为少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)。方法经外周静脉采集志愿者血液5 m L,利用Ficoll-Paquem密度梯度离心法获得单个核细胞,体外扩增培养后,电转染携带外源基因(OCT4,SOX2,KLF4,C-myc,LIN28,Nanog)的质粒,然后在加有化学小分子的特定培养基中分三步培养。结果转染后30 d左右,可以获得血小板衍生生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor-α,PDGFR-α)阳性的早期少突胶质前体细胞(Pre-OPC),该细胞能传20代以上,继续分化30 d左右可以获得表达O4的少突胶质前体细胞。结论利用非整合质粒载体携带外源基因可以将成人外周血单个核细胞在较短期时间内重编程为具有增生能力的早期少突胶质前体细胞,且能继续分化为少突胶质前体细胞。
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关键词
外周血单个核细胞
重编程
少突胶质前体细胞
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职称材料
汉族人群雌激素受体β基因多态性与子宫肌瘤的关系
被引量：
3
3
作者
王佳茵
张海珍
+1 位作者
关云谦
谢峰
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2010年第5期660-663,共4页
目的研究在中国人汉族人群中,子宫肌瘤的发生与雌激素受体β(estrogen receptor,ERβ)基因多态性之间的关系。方法自2007年1月至2008年6月,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)来扩增ERβ基因序列,用限制性内切酶对193名平...
目的研究在中国人汉族人群中,子宫肌瘤的发生与雌激素受体β(estrogen receptor,ERβ)基因多态性之间的关系。方法自2007年1月至2008年6月,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)来扩增ERβ基因序列,用限制性内切酶对193名平均年龄为(39.64±7.14)岁的健康女性和92名平均年龄为(43.96±6.59)岁的子宫肌瘤患者的ERβ基因扩增产物酶切,测定其基因多态性。结果ERβ的基因多态性AluI在子宫肌瘤组与对照组之间的分布分别为78.3%、19.6%、2.2%以及69.4%、29%、1.6%(P=0.229);RsaI在子宫肌瘤组与对照组之间的分布分别为65.2%、25%、9.8%以及67.4%、28.5%、4.1%(P=0.162),2种基因多态性的分布在2组之间差异均无统计学意义。结论在汉族人群中,ERβ基因的RsaI和AluI多态性分布与子宫肌瘤的发生无相关性。
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关键词
子宫肌瘤
基因多态性
ERΒ
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职称材料
题名
反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达
被引量：
1
1
作者
袁艳鹏
关云谦
林庆玲
薛金花
蔡彦宁
机构
首都医科大学宣武医院
神经生物学研究室
首都医科大学宣武医院细胞治疗室
教育部神经变性病重点实验室
出处
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2011年第3期365-370,共6页
基金
国家自然科学基金(81071011
30400148)~~
文摘
目的建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nestedreverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系。方法选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,per2,cry1和cry2,以及看家基因β-actin,分别设计和优化巢式引物对。以基因质粒为模板,检测巢式多重PCR体系的灵敏度。体外转录得到各个基因的RNA模板,并检测反转录巢式多重PCR体系的灵敏度。使用手动微操作器,显微镜下负压获取悬浮单个NIH/3T3细胞,使用反转录巢式多重PCR体系检测其中目的时钟基因。应用实时定量PCR检测整体水平时钟基因表达情况,与单细胞水平进行比较。结果巢式多重PCR检测体系可以检测出单拷贝质粒DNA。反转录巢式多重PCR能够检测出4拷贝RNA模板。利用上述体系发现,NIH/3T3单细胞中时钟基因环路表达存在很大差异,同时发现群体水平per1和per2表达的高峰和低谷间差异有统计学意义,而单细胞水平per1表达则差异无统计学意义。结论建立了高度灵敏的用于检测时钟基因表达的反转录巢式多重PCR体系,揭示了单细胞水平时钟基因表达的异质性,也验证了整体水平与单细胞水平时钟基因表达的差异。
关键词
反转录巢式多重聚合酶链式反应
时钟基因
单细胞
NIH/3T3
Keywords
multiplex nested RT-PCR
clock gene
single cell
NIH/3T3
分类号
R74 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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职称材料
题名
人外周血单个核细胞体外重编程为少突胶质前体细胞研究
2
作者
唐玺和
李默
王淑艳
李鹏燕
张愚
陈志国
陈惠
机构
中国康复医学研究所
首都医科大学宣武医院细胞治疗室
北京脑重大疾病研究院神经损伤和修复所
北京神经损伤和康复重点实验室
出处
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2017年第4期553-558,共6页
基金
国家自然科学基金(81661130160)
北京市科委计划项目(Z151100001615055)~~
文摘
目的利用非整合质粒载体在体外将成人外周血中单个核细胞重编程为少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)。方法经外周静脉采集志愿者血液5 m L,利用Ficoll-Paquem密度梯度离心法获得单个核细胞,体外扩增培养后,电转染携带外源基因(OCT4,SOX2,KLF4,C-myc,LIN28,Nanog)的质粒,然后在加有化学小分子的特定培养基中分三步培养。结果转染后30 d左右,可以获得血小板衍生生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor-α,PDGFR-α)阳性的早期少突胶质前体细胞(Pre-OPC),该细胞能传20代以上,继续分化30 d左右可以获得表达O4的少突胶质前体细胞。结论利用非整合质粒载体携带外源基因可以将成人外周血单个核细胞在较短期时间内重编程为具有增生能力的早期少突胶质前体细胞,且能继续分化为少突胶质前体细胞。
关键词
外周血单个核细胞
重编程
少突胶质前体细胞
Keywords
peripheral blood mononuclear cells
cell reprogramming
oligodendrocyte progenitor cells
分类号
R329.2 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
汉族人群雌激素受体β基因多态性与子宫肌瘤的关系
被引量：
3
3
作者
王佳茵
张海珍
关云谦
谢峰
机构
首都医科大学宣武医院细胞治疗室
首都医科大学宣武医院
妇产科
出处
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2010年第5期660-663,共4页
文摘
目的研究在中国人汉族人群中,子宫肌瘤的发生与雌激素受体β(estrogen receptor,ERβ)基因多态性之间的关系。方法自2007年1月至2008年6月,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)来扩增ERβ基因序列,用限制性内切酶对193名平均年龄为(39.64±7.14)岁的健康女性和92名平均年龄为(43.96±6.59)岁的子宫肌瘤患者的ERβ基因扩增产物酶切,测定其基因多态性。结果ERβ的基因多态性AluI在子宫肌瘤组与对照组之间的分布分别为78.3%、19.6%、2.2%以及69.4%、29%、1.6%(P=0.229);RsaI在子宫肌瘤组与对照组之间的分布分别为65.2%、25%、9.8%以及67.4%、28.5%、4.1%(P=0.162),2种基因多态性的分布在2组之间差异均无统计学意义。结论在汉族人群中,ERβ基因的RsaI和AluI多态性分布与子宫肌瘤的发生无相关性。
关键词
子宫肌瘤
基因多态性
ERΒ
Keywords
leiomyoma of uterus
gene polymorphism
estrogen receptor β
分类号
R71 [医药卫生—妇产科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达
袁艳鹏
关云谦
林庆玲
薛金花
蔡彦宁
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2011
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人外周血单个核细胞体外重编程为少突胶质前体细胞研究
唐玺和
李默
王淑艳
李鹏燕
张愚
陈志国
陈惠
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2017
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
汉族人群雌激素受体β基因多态性与子宫肌瘤的关系
王佳茵
张海珍
关云谦
谢峰
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2010
3
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职称材料
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