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题名重组大鼠α突触核蛋白的制备与鉴定
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作者
李昕
于顺
李尧华
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机构
首都医科大学宣武医院北京老年医学研究所神经生物室
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出处
《首都医科大学学报》
CAS
2007年第3期333-336,共4页
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基金
国家自然科学基金重点项目(30430280)
国家自然科学基金(30271437
30270482)资助项目~~
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文摘
目的克隆编码大鼠α-突触核蛋白的cDNA,探讨α-突触核蛋白基因在原核细胞中的表达过程并制备基因重组型α-突触核蛋白。方法设计合成含适当酶切位点的DNA片段作为引物,采用RT-PCR法从Wistar大鼠脑总RNA中扩增编码α-突触核蛋白的cDNA并亚克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),使其表达以谷胱甘肽S转移酶(glutathione-S-transferase,GST)为标签的融合蛋白质。用凝血酶定点分解融合蛋白,再用谷胱甘肽-琼脂糖4B和Superdex S200纯化基因重组型α-突触核蛋白。结果核酸序列测定表明克隆的cDNA含420 bp编码140个氨基酸,重组质粒pGEX-raSYN在原核细胞中表达为可溶性组分并受IPTG诱导,纯化的目的蛋白质在SDS-PAGE上表现为单一条带,推测其相对分子质量约为18 000。每升细菌培养液可纯化目的蛋白质3 mg。Western blot分析结果表明纯化的目的蛋白质可以被抗α-突触核蛋白识别。结论大鼠α-突触核蛋白基因在原核细胞高效表达,可制备高纯度基因重组型大鼠α-突触核蛋白。
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关键词
Α-突触核蛋白
纯化
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Keywords
Parkinson disease
α-Synuclein
purification
rat
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分类号
R338
[医药卫生—人体生理学]
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