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帕金森病基因PINK1和DJ-1的转录水平在神经毒损伤的MN9D细胞中的不同变化
被引量：
2
1
作者
杨俭
王勇
+3 位作者
汪璇
杨兆菲
宫晓丽
王晓民
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2015年第5期740-746,共7页
目的在细胞水平上探究神经毒素作用下,关键的帕金森(Parkinson's disease)致病基因PINK1和DJ-1的转录情况,并从表观遗传学角度对其机制进行初步探索。方法本研究使用MN9D细胞系作为研究对象。通过台盼蓝活细胞计数的方法筛选神经毒...
目的在细胞水平上探究神经毒素作用下,关键的帕金森(Parkinson's disease)致病基因PINK1和DJ-1的转录情况,并从表观遗传学角度对其机制进行初步探索。方法本研究使用MN9D细胞系作为研究对象。通过台盼蓝活细胞计数的方法筛选神经毒素6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)和1-甲基-4-苯基嘧啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)的半数致死剂量。通过半定量RT-PCR方法检测DJ-1基因和PINK1基因转录情况。通过RT-PCR以及免疫细胞荧光染色方法检测DNA去甲基化酶TET1的转录表达情况。结果 1)MN9D活细胞数在6-OHDA和MPP+作用下均发生了时间、剂量依赖性降低,6-OHDA和MPP+的半数致死剂量分别约为10μmol/L和100μmol/L。2)DJ-1的mRNA水平在6-OHDA或MPP+作用下未发生改变,而PINK1的mRNA水平则发生了明显的时间依赖下降。3)DNA去甲基化酶TET1的转录表达水平也发生显著下降。结论神经毒素作用下,帕金森病致病基因PINK1的转录发生下调,并可能是由DNA去甲基化酶TET1表达下调所介导的。
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关键词
帕金森病
神经毒性
PINK1
DJ-1
DNA去甲基化酶TET1
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职称材料
左旋多巴处理SH-SY5Y细胞可能通过DNA甲基化调节单胺氧化酶B基因的转录
2
作者
杨兆菲
王勇
+2 位作者
杨俭
汪璇
王晓民
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2015年第5期734-739,共6页
目的探究左旋多巴(L-3,4-dihydroxyphenylalanine,L-DOPA)对多巴胺代谢关键基因单胺氧化酶B(monoamine oxidase B,MAO-B)转录的影响及其表观遗传学调控机制。方法以人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞作为研究对象,应用基因组甲基化定量试剂盒检...
目的探究左旋多巴(L-3,4-dihydroxyphenylalanine,L-DOPA)对多巴胺代谢关键基因单胺氧化酶B(monoamine oxidase B,MAO-B)转录的影响及其表观遗传学调控机制。方法以人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞作为研究对象,应用基因组甲基化定量试剂盒检测L-DOPA对基因组甲基化的影响;采用半定量RT-PCR方法探究L-DOPA和DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-d C)对MAO-B转录的影响;应用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测L-DOPA对MAO-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度的影响。结果 1L-DOPA(2μmol/L和20μmol/L)和50μmol/L 5-aza-d C处理SH-SY5Y细胞24 h均会使其基因组甲基化降低。2L-DOPA(2μmol/L和20μmol/L)处理SH-SY5Y细胞24 h会使MAO-B mRNA下调,而多巴脱羧酶(DOPA-decarboxylase,DDC)和儿茶酚胺氧位甲基转移酶(catechol-O-methyltransferase,COMT)转录无明显变化。3不同浓度5-aza-d C(0、50、100和150μmol/L)处理细胞24 h,MAO-B mRNA表达明显上调,DDC和COMT转录无明显变化,提示MAO-B可能受到DNA甲基化调控。4L-DOPA处理可使MAO-B基因启动子区Cp G岛甲基化升高,而5-aza-d C可使该区域Cp G岛甲基化降低,说明该区域甲基化受L-DOPA影响而升高,并可能是MAO-B基因转录活性下调的原因。结论 LDOPA可能对MAO-B基因的转录活性有抑制作用,且可能是通过L-DOPA诱导的高Cp G甲基化所导致,从表观遗传学(主要是DNA甲基化)对临床上L-DOPA治疗可能产生的多巴胺代谢紊乱及其不良反应做出了新的解释。
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关键词
左旋多巴
单胺氧化酶B
DNA甲基化
基因转录
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职称材料
题名
帕金森病基因PINK1和DJ-1的转录水平在神经毒损伤的MN9D细胞中的不同变化
被引量：
2
1
作者
杨俭
王勇
汪璇
杨兆菲
宫晓丽
王晓民
机构
首都医科大学
基础
医学院
神经
生物学
系
教育部
神经
变
性病
重点
实验室
北京脑重大疾病研究院
首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系教育部神经变性病重点实验室
出处
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2015年第5期740-746,共7页
基金
国家重点基础研究发展计划("973"计划)(2011CB504100)
北京市自然科学基金(7082008)
北京市属高等学校创新团队建设与教师职业发展计划项目(IDHT20140514)~~
文摘
目的在细胞水平上探究神经毒素作用下,关键的帕金森(Parkinson's disease)致病基因PINK1和DJ-1的转录情况,并从表观遗传学角度对其机制进行初步探索。方法本研究使用MN9D细胞系作为研究对象。通过台盼蓝活细胞计数的方法筛选神经毒素6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)和1-甲基-4-苯基嘧啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)的半数致死剂量。通过半定量RT-PCR方法检测DJ-1基因和PINK1基因转录情况。通过RT-PCR以及免疫细胞荧光染色方法检测DNA去甲基化酶TET1的转录表达情况。结果 1)MN9D活细胞数在6-OHDA和MPP+作用下均发生了时间、剂量依赖性降低,6-OHDA和MPP+的半数致死剂量分别约为10μmol/L和100μmol/L。2)DJ-1的mRNA水平在6-OHDA或MPP+作用下未发生改变,而PINK1的mRNA水平则发生了明显的时间依赖下降。3)DNA去甲基化酶TET1的转录表达水平也发生显著下降。结论神经毒素作用下,帕金森病致病基因PINK1的转录发生下调,并可能是由DNA去甲基化酶TET1表达下调所介导的。
关键词
帕金森病
神经毒性
PINK1
DJ-1
DNA去甲基化酶TET1
Keywords
Parkinson＇s disease
neurotoxicity
PINK1
DJ-1
Ten-eleven translocation 1
分类号
R34 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
左旋多巴处理SH-SY5Y细胞可能通过DNA甲基化调节单胺氧化酶B基因的转录
2
作者
杨兆菲
王勇
杨俭
汪璇
王晓民
机构
首都医科大学
基础
医学院
神经
生物学
系
教育部
神经
变
性病
重点
实验室
北京脑重大疾病研究院
首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系教育部神经变性病重点实验室
出处
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2015年第5期734-739,共6页
基金
国家重点基础研究发展计划(2011CB504100)
北京市自然科学基金项目(7082008)
北京市属高等学校创新团队建设与教师职业发展计划项目(IDHT20140514)~~
文摘
目的探究左旋多巴(L-3,4-dihydroxyphenylalanine,L-DOPA)对多巴胺代谢关键基因单胺氧化酶B(monoamine oxidase B,MAO-B)转录的影响及其表观遗传学调控机制。方法以人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞作为研究对象,应用基因组甲基化定量试剂盒检测L-DOPA对基因组甲基化的影响;采用半定量RT-PCR方法探究L-DOPA和DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-d C)对MAO-B转录的影响;应用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测L-DOPA对MAO-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度的影响。结果 1L-DOPA(2μmol/L和20μmol/L)和50μmol/L 5-aza-d C处理SH-SY5Y细胞24 h均会使其基因组甲基化降低。2L-DOPA(2μmol/L和20μmol/L)处理SH-SY5Y细胞24 h会使MAO-B mRNA下调,而多巴脱羧酶(DOPA-decarboxylase,DDC)和儿茶酚胺氧位甲基转移酶(catechol-O-methyltransferase,COMT)转录无明显变化。3不同浓度5-aza-d C(0、50、100和150μmol/L)处理细胞24 h,MAO-B mRNA表达明显上调,DDC和COMT转录无明显变化,提示MAO-B可能受到DNA甲基化调控。4L-DOPA处理可使MAO-B基因启动子区Cp G岛甲基化升高,而5-aza-d C可使该区域Cp G岛甲基化降低,说明该区域甲基化受L-DOPA影响而升高,并可能是MAO-B基因转录活性下调的原因。结论 LDOPA可能对MAO-B基因的转录活性有抑制作用,且可能是通过L-DOPA诱导的高Cp G甲基化所导致,从表观遗传学(主要是DNA甲基化)对临床上L-DOPA治疗可能产生的多巴胺代谢紊乱及其不良反应做出了新的解释。
关键词
左旋多巴
单胺氧化酶B
DNA甲基化
基因转录
Keywords
L-3
4-dihydroxyphenylalanine
monoamine oxidase B
DNA methylation
gene transcription
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
帕金森病基因PINK1和DJ-1的转录水平在神经毒损伤的MN9D细胞中的不同变化
杨俭
王勇
汪璇
杨兆菲
宫晓丽
王晓民
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2015
2
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下载PDF
职称材料
2
左旋多巴处理SH-SY5Y细胞可能通过DNA甲基化调节单胺氧化酶B基因的转录
杨兆菲
王勇
杨俭
汪璇
王晓民
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2015
0
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