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旋毛虫Ts87基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化被引量：5: 1; 作者杨静诸欣平 +3 位作者杨雅平詹斌冯建军 Hotez Peter 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期25-27,40,共4页; 目的　为进一步研究和应用旋毛虫Ts87基因 ,本文原核表达了PET - 2 8a(+) /Ts87重组质粒 ,并纯化鉴定了该蛋白。方法　将Ts87基因片段克隆入原核表达载体PET - 2 8a(+) ,形成重组质粒PET - 2 8a(+) /Ts87,转化后经IPTG诱导得到表达蛋白 ... 展开更多; 关键词旋毛虫 Ts87基因大肠杆菌表达表达产物纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

旋毛虫Ts87抗原基因克隆体外表达条件的研究被引量：6: 2; 作者杨静诸欣平杨雅平《首都医科大学学报》 CAS 2002年第4期307-309,共3页; 为提高融合蛋白PET 2 8a(+) /Ts87/BL2 1的表达水平 ,对诱导时间、诱导物浓度、诱导时细菌生长状态等条件与表达量的关系进行了研究。结果表明 ,在细菌生长的适宜状态 (OD6 0 0nm=0 .6)和诱导条件 (3 7℃ 4h)下 ,此融合蛋白的表达量最... 展开更多; 关键词旋毛虫 Ts87抗原基因克隆体外表达条件融合蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

旋毛虫Ts87抗原的免疫组化定位研究被引量：3: 3; 作者杨雅平诸欣平 +2 位作者杨静雷丽萍景鹏《首都医科大学学报》 CAS 2003年第2期108-110,共3页; 为了确定旋毛虫Ts87抗原在虫体上的分布及其是否属于旋毛虫排泄分泌(ES)抗原,借助激光扫描共聚焦显微镜,采用免疫组化和Western Bloting等方法进行研究。结果表明:旋毛虫幼虫皮质层富含Ts87蛋白,而且Ts87抗原是旋毛虫排泄分泌抗原中的... 展开更多; 关键词旋毛虫 Ts87抗原免疫组化定位研究激光扫描共聚焦显微镜; 在线阅读下载PDF 职称材料

旋毛虫抗原基因Ts88的克隆及鉴定被引量：2: 4; 作者诸欣平杨雅平 +2 位作者杨静雷丽萍 Pascal Boireau 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第1期19-21,共3页; 目的　获取旋毛虫具有抗原性的新基因。方法　应用旋毛虫免疫血清和人工感染血清对旋毛虫成虫cDNA文库约 3× 10 5重组噬菌斑进行筛选。基因克隆、DNA测序及 5′ -RACE获cDNA全长 ;采用ESEE、DNAstar软件及核苷酸序列数据库 (GenBa... 展开更多; 关键词旋毛虫抗原基因 Ts88克隆鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

旋毛虫成虫部分cDNA表达质粒文库的构建被引量：1: 5; 作者杨静杨雅平 +3 位作者魏骏飞王少华黄松诸欣平《首都医科大学学报》 CAS 2006年第2期155-157,共3页; 目的为寻找更多有效的旋毛虫病疫苗候选抗原分子，构建旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库。方法以旋毛虫成虫cDNA文库为模板，进行PCR扩增。扩增产物500-2000bp之间的DNA片段用BamHⅠ、HindⅢ酶切，将酶切产物克隆入真核表达载体pcDNA3．1... 展开更多; 关键词旋毛虫 cDNA表达质粒文库构建; 在线阅读下载PDF 职称材料

旋毛虫抗原基因Ts87在毕赤酵母系统中优化表达的研究: 6; 作者魏骏飞顾园 +3 位作者王少华杨静黄松诸欣平《首都医科大学学报》 CAS 2006年第2期158-161,共4页; 目的优化旋毛虫抗原基因Ts87在毕赤酵母系统中的表达,提高其表达量。方法选择去除自身信号肽序列的Ts87基因构建天然N末端的重组质粒,电击转化经锂盐处理过的酵母细胞X-33,摸索诱导起始细胞浓度、甲醇诱导浓度及其添加的时间间隔、pH值... 展开更多; 关键词旋毛虫毕赤酵母 Ts87 表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

不同培养条件对旋毛虫肌幼虫产生排泄分泌抗原的影响被引量：1: 7; 作者崔世娟杨静 +4 位作者顾园魏骏飞王少华杨雅平诸欣平《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第5期591-595,共5页; 目的对比在常规1640培养基中和在模拟宿主生理环境的培养液的刺激下旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原产量及成分的变化,同时观察在感染初期ES抗原的不同组分在小鼠体内诱导产生主要抗体的时间,以寻找获得更高产量的肌... 展开更多; 关键词旋毛虫排泄分泌抗原制备方法 WESTERN BLOTTING; 在线阅读下载PDF 职称材料

金丝桃素对小鼠巨噬细胞内刚地弓形虫速殖子的增殖抑制作用被引量：2: 8; 作者崔洁王旗 +9 位作者杨小迪孙希萌汪瑞姜辉王守祥张敏魏明夏惠陈兴智沈继龙《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期583-587,共5页; 目的观察金丝桃素(Hypericin,Hy)对小鼠巨噬细胞内弓形虫的增殖抑制作用,为抗弓形虫天然药物的筛选提供线索。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞(Macrophage,Mφ),建立体外Mφ感染稳定表达绿色荧光蛋白的弓形虫(RH-green fluorescent protein,RH... 展开更多; 关键词金丝桃素刚地弓形虫巨噬细胞抑制; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名旋毛虫Ts87基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化被引量：5: 1; 作者杨静诸欣平杨雅平詹斌冯建军 Hotez Peter; 机构首都医科大学基础医学院寄生虫学教研室美国乔治华盛顿大学微生物与热带医学系; 出处《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期25-27,40,共4页; 基金美国中华医学会 (CMB) (Parasitology 98-674) 国家留学基金回国科研资助 (1998-2 0 0 1) +1 种基金北京市跨世纪优秀人材工程 (2 0 0 1-2 0 0 3 )资助项目; 文摘目的　为进一步研究和应用旋毛虫Ts87基因 ,本文原核表达了PET - 2 8a(+) /Ts87重组质粒 ,并纯化鉴定了该蛋白。方法　将Ts87基因片段克隆入原核表达载体PET - 2 8a(+) ,形成重组质粒PET - 2 8a(+) /Ts87,转化后经IPTG诱导得到表达蛋白 (约 4 0kDa) ,利用固定化金属离子 (Ni2 + )配体亲和层析纯化目的蛋白 ,进行复性 ,并用兔人工感染旋毛虫血清鉴定表达产物。结果与结论　成功构建了PET - 2 8a(+) /Ts87,SDS -PAGE显示融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,经过亲和层析得到纯化的目的蛋白。; 关键词旋毛虫 Ts87基因大肠杆菌表达表达产物纯化; Keywords Trichinella spiralis Fusion protein Purification Expression Affinity chromatography; 分类号 R383.15 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名旋毛虫Ts87抗原基因克隆体外表达条件的研究被引量：6: 2; 作者杨静诸欣平杨雅平; 机构首都医科大学基础医学院寄生虫学教研室; 出处《首都医科大学学报》 CAS 2002年第4期307-309,共3页; 基金美国中华医学会 (CMB) 国家留学基金回国科研资助 +1 种基金北京市教委科技发展基金北京市跨世纪优秀人才工程资助项目; 文摘为提高融合蛋白PET 2 8a(+) /Ts87/BL2 1的表达水平 ,对诱导时间、诱导物浓度、诱导时细菌生长状态等条件与表达量的关系进行了研究。结果表明 ,在细菌生长的适宜状态 (OD6 0 0nm=0 .6)和诱导条件 (3 7℃ 4h)下 ,此融合蛋白的表达量最高 ,约占菌体总蛋白的 3 0; 关键词旋毛虫 Ts87抗原基因克隆体外表达条件融合蛋白; Keywords Trichinella spiralis Ts87 fusion protein expression; 分类号 R383.15 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名旋毛虫Ts87抗原的免疫组化定位研究被引量：3: 3; 作者杨雅平诸欣平杨静雷丽萍景鹏; 机构首都医科大学基础医学院寄生虫学教研室首都医科大学解剖学教研室; 出处《首都医科大学学报》 CAS 2003年第2期108-110,共3页; 基金美国中华医学会(CMB)(Parasitology98-674) 国家留学基金(1998-2001) +1 种基金北京市跨世纪优秀人才工程(2001-2003); 文摘为了确定旋毛虫Ts87抗原在虫体上的分布及其是否属于旋毛虫排泄分泌(ES)抗原,借助激光扫描共聚焦显微镜,采用免疫组化和Western Bloting等方法进行研究。结果表明:旋毛虫幼虫皮质层富含Ts87蛋白,而且Ts87抗原是旋毛虫排泄分泌抗原中的组分。; 关键词旋毛虫 Ts87抗原免疫组化定位研究激光扫描共聚焦显微镜; Keywords Trichinella spiralis immunocytolocalization laser scanning confocal microscopy; 分类号 R383.15 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名旋毛虫抗原基因Ts88的克隆及鉴定被引量：2: 4; 作者诸欣平杨雅平杨静雷丽萍 Pascal Boireau; 机构首都医科大学基础医学院寄生虫学教研室法国食品安全局UMR BIPAR INRA AFSSA ENVA UPVM; 出处《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第1期19-21,共3页; 基金美国中华医学会资助项目 (CMB) (Parasitology 98-674) 国家留学基金回国科研资助 (1998~ 2 0 0 1) +1 种基金北京市跨世纪优秀人才工程 (2 0 0 1~ 2 0 0 4)资助项目; 文摘目的　获取旋毛虫具有抗原性的新基因。方法　应用旋毛虫免疫血清和人工感染血清对旋毛虫成虫cDNA文库约 3× 10 5重组噬菌斑进行筛选。基因克隆、DNA测序及 5′ -RACE获cDNA全长 ;采用ESEE、DNAstar软件及核苷酸序列数据库 (GenBank)进行cDNA序列分析。结果与结论　免疫筛选成虫cDNA文库 ,获得 3个阳性克隆。其中的Ts88克隆cDNA全长为 196 6bp ,编码 4 84个氨基酸 ,含有一个PWWP功能结构域及多个抗原表位。Ts88cDNA是一个尚未见报道的旋毛虫抗原新基因。; 关键词旋毛虫抗原基因 Ts88克隆鉴定; Keywords Trichinella spiralis cDNA library gene cloning,screening 5′-RACE; 分类号 R383.15 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名旋毛虫成虫部分cDNA表达质粒文库的构建被引量：1: 5; 作者杨静杨雅平魏骏飞王少华黄松诸欣平; 机构首都医科大学基础医学院寄生虫学教研室; 出处《首都医科大学学报》 CAS 2006年第2期155-157,共3页; 基金美国中华医学基金(CMBParasitology98-674) 北京市教委科技发展计划(KM200410025001)资助项目; 文摘目的为寻找更多有效的旋毛虫病疫苗候选抗原分子，构建旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库。方法以旋毛虫成虫cDNA文库为模板，进行PCR扩增。扩增产物500-2000bp之间的DNA片段用BamHⅠ、HindⅢ酶切，将酶切产物克隆入真核表达载体pcDNA3．1，对部分转化子进行酶切鉴定。结果构建了插入片段在500-1500 bp之间的旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库，90％以上的转化子都含有插入的DNA片段。结论成功构建一个旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库。; 关键词旋毛虫 cDNA表达质粒文库构建; Keywords Trichinella spiralis cDNA expression plasmid library construction; 分类号 R383.15 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名旋毛虫抗原基因Ts87在毕赤酵母系统中优化表达的研究: 6; 作者魏骏飞顾园王少华杨静黄松诸欣平; 机构首都医科大学基础医学院寄生虫学教研室; 出处《首都医科大学学报》 CAS 2006年第2期158-161,共4页; 基金美国中华医学基金(CMBParasitology98-674)资助项目; 文摘目的优化旋毛虫抗原基因Ts87在毕赤酵母系统中的表达,提高其表达量。方法选择去除自身信号肽序列的Ts87基因构建天然N末端的重组质粒,电击转化经锂盐处理过的酵母细胞X-33,摸索诱导起始细胞浓度、甲醇诱导浓度及其添加的时间间隔、pH值及诱导时间等条件对重组菌株表达的影响,并对表达产物进行Western blotting鉴定。结果采用锂盐处理毕赤酵母细胞的感受态制备方法可以极大的提高电击转化效率,并确定pPICZαA-Ts87nature/X-33株最佳表达条件为:OD600 nm=1.0,1.0%/24 h体积比添加甲醇,pH值7.0或8.0,诱导表达72 h。将此条件下的培养物上清液30μL直接上样,表达产物可被感染旋毛虫的兔血清所识别。结论本研究优化了Ts87在毕赤酵母系统中的表达条件,为后续研究工作打下基础。; 关键词旋毛虫毕赤酵母 Ts87 表达; Keywords Trichinella spirialis Pichia pastoris Ts87 expression; 分类号 R383.1 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名不同培养条件对旋毛虫肌幼虫产生排泄分泌抗原的影响被引量：1: 7; 作者崔世娟杨静顾园魏骏飞王少华杨雅平诸欣平; 机构首都医科大学基础医学院寄生虫学教研室; 出处《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第5期591-595,共5页; 基金国家自然科学基金(30872201) 北京市自然科学基金(5092006) +2 种基金北京市教委学术创新团队资助项目~~; 文摘目的对比在常规1640培养基中和在模拟宿主生理环境的培养液的刺激下旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原产量及成分的变化,同时观察在感染初期ES抗原的不同组分在小鼠体内诱导产生主要抗体的时间,以寻找获得更高产量的肌幼虫ES抗原的制备方法。方法在虫数、培养液体积、培养时间、温度、ES抗原体积浓缩倍数等条件相同的情况下,按培养液中小鼠血清超滤液(简称血超)、还原型谷胱甘肽(简称谷胱甘肽)和胆汁粉的不同组合分组,分别培养肌幼虫并收集ES抗原,再以相同上样体积作SDS-PAGE电泳,Odyssey双色红外激光成像系统扫描凝胶并测定条带信号强度进行定量比较。用Western blotting对比观察不同组ES抗原的活性及成分变化。以旋毛虫人工感染小鼠不同时期收集的血清(感染后15、18、20、21、22、24、27、30、40、50 d)作为一抗进行Western blotting,观察ES抗原主要成分在小鼠体内产生抗体的先后顺序。结果S DS-PAGE电泳凝胶定量分析结果显示,血超+谷胱甘肽组、胆汁组和胆汁+血超组的抗原产量明显高于1640培养基组,其中胆汁+血超组的抗原产量最高。Western blotting结果显示,各组抗原均能被感染血清(感染后40 d)识别产生多个条带,其中血超+谷胱甘肽组的条带中相对分子质量约为87 000的条带荧光信号明显强于其他组;感染初期ES抗原不同组分在小鼠体内产生抗体的先后顺序为:45 000、53 000、41 000,其抗体可被检测到的最早时间分别为感染后15、21、24 d。结论培养液中添加胆汁粉可大大提高旋毛虫肌幼虫ES抗原产量,胆汁粉与血超共用后ES抗原的增产效果更佳;感染初期肌幼虫ES抗原的不同组分诱导小鼠产生抗体的时间不同。此研究将为改进ES抗原制备方法,寻找旋毛虫病早期诊断抗原提供实验依据。; 关键词旋毛虫排泄分泌抗原制备方法 WESTERN BLOTTING; Keywords Trichinella spiralis excretory-secretory antigens preparation W estern b lotting; 分类号 R383.15 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名金丝桃素对小鼠巨噬细胞内刚地弓形虫速殖子的增殖抑制作用被引量：2: 8; 作者崔洁王旗杨小迪孙希萌汪瑞姜辉王守祥张敏魏明夏惠陈兴智沈继龙; 机构安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室安徽省人兽共患病重点实验室(安徽医科大学) 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠医学院显微形态综合实验室安徽省血吸虫病防治研究所首都医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期583-587,共5页; 基金国家自然科学基金(No.81471983)资助蚌埠医学院自然科学基金面上项目(No.BYKY1653)资助 +1 种基金安徽省血吸虫病防治研究所科研基金项目(No.1603)资助~~; 文摘目的观察金丝桃素(Hypericin,Hy)对小鼠巨噬细胞内弓形虫的增殖抑制作用,为抗弓形虫天然药物的筛选提供线索。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞(Macrophage,Mφ),建立体外Mφ感染稳定表达绿色荧光蛋白的弓形虫(RH-green fluorescent protein,RH-GFP)速殖子模型,观察不同剂量Hy的最佳作用效果。实验分4组:(1)A组(对照组),不加Hy;(2)B组(Mφ感染RH-GFP+100μg/mL Hy);(3)C组(Mφ感染RH-GFP+200μg/mL Hy);(4)D组(Mφ感染RH-GFP+400μg/mL Hy),分别在培养1、2和3h后利用荧光显微镜和流式细胞术观察计数感染的Mφ和游离速殖子在各药物浓度及各时间点的变化;透射电镜观察虫体超微结构的变化。结果与对照组相比,随着Hy浓度的增加和用药时间的延长,Mφ内速殖子数量明显减少,游离速殖子数量也显著减少,荧光强度逐渐降低;经药物组不同浓度Hy作用后,游离/Mφ内弓形虫的比值逐渐升高,至400μg/mL剂量作用3h后开始下降,游离与胞内速殖子比例的差异在同一时间段内均有统计学意义(P<0.05),但药物作用1h或2h各实验组之间无统计学差异(P>0.05),作用3h各浓度组之间差异有统计学意义(P<0.05),各实验组同一药物浓度下在孵育1、2和3h后效果增强(P<0.05)。透射电镜观察显示,随Hy作用时间延长,虫体逐渐出现肿胀,胞膜与基质之间空隙明显,空泡形成且增多、变大,胞膜断裂,内部结构溶解溢出。结论体外实验初步显示Hy呈剂量和时间依赖性地增强对Mφ内弓形虫速殖子增殖的抑制作用,可降低宿主细胞感染率,且对胞外速殖子有一定杀伤作用。; 关键词金丝桃素刚地弓形虫巨噬细胞抑制; Keywords hypericin Toxoplasma gondii macrophage inhibition; 分类号 R382.5 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	旋毛虫Ts87基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化	杨静诸欣平杨雅平詹斌冯建军 Hotez Peter	《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心	2003	5	在线阅读下载PDF 职称材料
2	旋毛虫Ts87抗原基因克隆体外表达条件的研究	杨静诸欣平杨雅平	《首都医科大学学报》 CAS	2002	6	在线阅读下载PDF 职称材料
3	旋毛虫Ts87抗原的免疫组化定位研究	杨雅平诸欣平杨静雷丽萍景鹏	《首都医科大学学报》 CAS	2003	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	旋毛虫抗原基因Ts88的克隆及鉴定	诸欣平杨雅平杨静雷丽萍 Pascal Boireau	《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心	2004	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	旋毛虫成虫部分cDNA表达质粒文库的构建	杨静杨雅平魏骏飞王少华黄松诸欣平	《首都医科大学学报》 CAS	2006	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	旋毛虫抗原基因Ts87在毕赤酵母系统中优化表达的研究	魏骏飞顾园王少华杨静黄松诸欣平	《首都医科大学学报》 CAS	2006	0	在线阅读下载PDF 职称材料
7	不同培养条件对旋毛虫肌幼虫产生排泄分泌抗原的影响	崔世娟杨静顾园魏骏飞王少华杨雅平诸欣平	《首都医科大学学报》 CAS 北大核心	2010	1	在线阅读下载PDF 职称材料
8	金丝桃素对小鼠巨噬细胞内刚地弓形虫速殖子的增殖抑制作用	崔洁王旗杨小迪孙希萌汪瑞姜辉王守祥张敏魏明夏惠陈兴智沈继龙	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2018	2	在线阅读下载PDF 职称材料