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外泌体及其在肿瘤诊疗中的意义 被引量:37
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作者 张敏 张晨光 丁卫 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期372-378,共7页
外泌体(exosome)是由多种活细胞分泌的囊泡小体,其中含有蛋白质和RNA等多种组分。这种机体内普遍存在的纳米级被膜结构能够参与细胞间的物质交换和信息交流,在多种生理和病理过程中发挥重要作用。外泌体在外周血、尿液、唾液、腹水、羊... 外泌体(exosome)是由多种活细胞分泌的囊泡小体,其中含有蛋白质和RNA等多种组分。这种机体内普遍存在的纳米级被膜结构能够参与细胞间的物质交换和信息交流,在多种生理和病理过程中发挥重要作用。外泌体在外周血、尿液、唾液、腹水、羊水等体液中具有很高的丰度,而不同组织来源的外泌体在组成和功能方面存在差异,同时这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。肿瘤来源或肿瘤相关的外泌体是调控肿瘤发生发展的重要机制,对肿瘤外泌体的分析和检测可以辅助肿瘤的早期诊断、疗效评价和预后分析。此外,外泌体及其修饰加工产物还可以作为基因或药物的有效载体,用于肿瘤治疗。关于外泌体的研究是肿瘤学的一个新兴领域,在转化医学的研究模式下,将极大推动肿瘤学研究进展,为肿瘤临床诊断和治疗带来新的契机。 展开更多
关键词 外泌体 肿瘤 生物标志物 小RNA 转化医学
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用于细胞核钙成像的新型钙指示剂的构建与鉴定(英文)
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作者 齐特 杨华乾 +4 位作者 范雪新 赵天 郭运波 丁卫 叶海虹 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期592-598,共7页
细胞核钙离子是基因转录等细胞核反应过程重要的调控因子.然而,细胞核内钙离子信号的调控机制尚不清楚.缺乏稳定的、敏感的细胞核钙指示剂,是导致其调控机制难以研究的重要原因之一.针对这一问题,设计了能够在细胞核内特异性表达的、具... 细胞核钙离子是基因转录等细胞核反应过程重要的调控因子.然而,细胞核内钙离子信号的调控机制尚不清楚.缺乏稳定的、敏感的细胞核钙指示剂,是导致其调控机制难以研究的重要原因之一.针对这一问题,设计了能够在细胞核内特异性表达的、具有核定位功能的钙指示剂.以基因编码钙指示剂(GECIs)家族成员GCa MP6为模板,首先融合了对钙离子不敏感的红色荧光蛋白td Tomato来对局部的钙信号进行量化,其次融合了核定位信号(NLS),使GCa MP6能够特异定位于细胞核中.结果表明,NLS-GCa MP6-td Tomato能够在细胞核中有效发挥作用,并且在钙敏感性与动力学上,也与GCa MP6相当.这一新型细胞核钙指示剂将为研究细胞核钙离子的功能及其调控机制提供新的方法与途径. 展开更多
关键词 细胞核钙离子 钙成像 基因编码钙指示剂
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新型核心蛋白聚糖靶向性重组腺相关病毒的制备与鉴定 被引量:2
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作者 周子玉 姚婷 +1 位作者 张晨光 丁卫 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期933-941,共9页
核心蛋白聚糖(decorin,DCN)是广泛存在于细胞基质中的一种富含亮氨酸的蛋白多糖,属于蛋白聚糖家族中的小分子类.DCN可作为多种细胞因子的配体,发挥多种生物学功能.DCN在一些肿瘤组织中高水平表达,调控恶性肿瘤的生长和迁移.腺相关病毒(A... 核心蛋白聚糖(decorin,DCN)是广泛存在于细胞基质中的一种富含亮氨酸的蛋白多糖,属于蛋白聚糖家族中的小分子类.DCN可作为多种细胞因子的配体,发挥多种生物学功能.DCN在一些肿瘤组织中高水平表达,调控恶性肿瘤的生长和迁移.腺相关病毒(AAV)是肿瘤基因治疗中常用的基因工程载体,利用重组技术可以实现对病毒衣壳蛋白的改造,使其感染具有靶向性.而针对DCN高表达细胞的转导可能成为肿瘤基因治疗应用中定向导入治疗基因的有效策略.本研究在对多种DCN结合蛋白序列保守区的分析基础上,筛选出具有较高活性的DCN结合功能域(DB1),并将其融合至AAV衣壳蛋白VP2编码序列的N端;继而利用AAV的嵌合包装技术,成功制备了衣壳展示DB1表位的重组AAV.在过表达DCN细胞的感染实验中,该病毒表现出针对DCN较强的靶向性.本研究所制备的DCN靶向性腺相关病毒不仅为肿瘤治疗的应用提供了一种新型载体,同时可作为一类特殊的基因导入工具为研究DCN在肿瘤发生发展中的作用提供帮助. 展开更多
关键词 核心蛋白聚糖 腺相关病毒(AAV) 靶向感染 基因治疗 肿瘤
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DISC1基因及其编码蛋白的结构、功能与精神分裂症的相关研究进展 被引量:3
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作者 任君 赵天 +1 位作者 韩玉英 叶海虹 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期442-447,共6页
人染色体t(1;11)(q42.1;q14.3)的平衡易位可能导致Disrupted-in-Schizophrenia 1(DISC1)基因断裂,这一突变被认为与精神分裂症高度相关。DISC1属于细胞骨架蛋白,可能与超过200种蛋白相互作用,参与神经元分化、迁移、突触形成及可塑性等... 人染色体t(1;11)(q42.1;q14.3)的平衡易位可能导致Disrupted-in-Schizophrenia 1(DISC1)基因断裂,这一突变被认为与精神分裂症高度相关。DISC1属于细胞骨架蛋白,可能与超过200种蛋白相互作用,参与神经元分化、迁移、突触形成及可塑性等,对早期神经系统发育和成年期神经元功能产生重要影响。本文将就近期DISC1的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 DISC1 精神分裂症 神经发生
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聚二甲基硅氧烷定制微培养装置及其在肿瘤细胞迁移浸润动态分析中的应用 被引量:1
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作者 邢天禹 牛静 丁卫 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第2期270-275,共6页
目的利用新型有机硅材料聚二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane,PDMS)构建细胞组织微培养装置,建立肿瘤迁移浸润的动态分析方法,对迁移的细胞进行形态学和生物学检测。方法设计并用PDMS定制具有独立分割功能的细胞微培养装置。在人脑胶质... 目的利用新型有机硅材料聚二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane,PDMS)构建细胞组织微培养装置,建立肿瘤迁移浸润的动态分析方法,对迁移的细胞进行形态学和生物学检测。方法设计并用PDMS定制具有独立分割功能的细胞微培养装置。在人脑胶质瘤U87MG细胞中检测时间依赖的迁移行为和细胞迁移信号转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)驱动的荧光素酶活性。检测肿瘤细胞在缺氧环境下迁移行为的改变,并与经典的Trans Well细胞迁移检测结果进行了对比。结果应用定制PDMS培养装置能够动态观测细胞迁移浸润,通过对迁移细胞群的分离回收的细胞和相关信号通路的快速定量分析能够更加全面准确地反映细胞迁移的动态表型改变和参与机制。结论应用PDMS定制细胞微培养装置进行细胞动态描述和分析,对研究肿瘤细胞迁移过程及其机制是一个可行且极具潜力的新方法。本微培养装置的特色在于在肿瘤细胞迁移过程中同时完成对形态学和分子生物学的分析并进行相关性研究。 展开更多
关键词 聚二甲基硅氧烷 胶质瘤 迁移浸润 缺氧 转化生长因子Β
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HaloTag技术在α-突触核蛋白质的细胞影像与定量分析中的应用
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作者 冯雪婷 张晨光 +4 位作者 张敏 岳志霞 邢天禹 李慎涛 丁卫 《首都医科大学学报》 CAS 2014年第3期324-330,共7页
目的探讨HaloTag技术用于α-突触核蛋白质(α-synuclein,SNCA)在细胞内荧光成像及半定量分析的方法及其应用。方法采用重组克隆技术构建pHalo-SNCA质粒,将其转染至HEK293人胚肾细胞中,经Western blotting鉴定Halo-SNCA融合蛋白质的表达... 目的探讨HaloTag技术用于α-突触核蛋白质(α-synuclein,SNCA)在细胞内荧光成像及半定量分析的方法及其应用。方法采用重组克隆技术构建pHalo-SNCA质粒,将其转染至HEK293人胚肾细胞中,经Western blotting鉴定Halo-SNCA融合蛋白质的表达;通过激光共聚焦显微镜观察Halo-SNCA在细胞内的定位与分布;通过蛋白酶催化的解偶联反应的荧光强度测定细胞内Halo-SNCA的荧光强度进行目的蛋白质的间接定量分析。结果本研究成功构建了Halo-SNCA真核表达质粒,能够在转染的真核细胞中高效表达目的融合蛋白质,该融合蛋白质结合特定的荧光配基后,可通过激光共聚焦显微成像分析Halo-SNCA在细胞中的动态水平与分布状况。此外,经水解释放的荧光配基可用于表达融合蛋白质在细胞中较为精确的相对定量分析。结论HaloTag技术能够用于SNCA在细胞内成像和定量分析,同时可以作为细胞生物学和生物化学分析的可关联检测指标。对于SNCA的生理功能以及在神经系统病变中的作用等相关研究,HaloTag具有令人瞩目的潜在应用前景。 展开更多
关键词 HALOTAG α-突触核蛋白质 荧光成像 定量分析
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