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荷包猪SLA-3-HB 01基因四聚体前体链的构建及表达
1
作者
高花
翟晓鑫
+4 位作者
姜平
甘慧
张宗辉
许崇波
高凤山
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018年第10期2691-2699,共9页
为了构建荷包猪SLA-3-HB01基因四聚体前体链原核表达载体,并获得SLA-3-HB01表达蛋白,试验以SLA-3-HB01/pMD18-T为模板进行PCR扩增四聚体前体链SLA-3-HB01-BSP,并克隆至pMD19-T载体中,经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切筛选阳性克隆并测序,目的基因...
为了构建荷包猪SLA-3-HB01基因四聚体前体链原核表达载体,并获得SLA-3-HB01表达蛋白,试验以SLA-3-HB01/pMD18-T为模板进行PCR扩增四聚体前体链SLA-3-HB01-BSP,并克隆至pMD19-T载体中,经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切筛选阳性克隆并测序,目的基因连接至表达载体pET-21a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白大小及表达情况,提取包涵体并进行检测。结果显示,PCR成功扩增得到SLA-3-HB01-BSP,大小为896bp左右。酶切鉴定证实,目的基因成功克隆至pMD19-T载体中,插入片段大小为876bp,阳性克隆经测序后所获序列与原序列一致,并在3′端带有BSP标签序列。酶切鉴定进一步证实成功构建SLA-3-HB01-BSP/pET-21a(+)重组表达载体,经转化及诱导表达,SDS-PAGE检测显示目的蛋白分子质量在33.5ku左右。包涵体蛋白分子质量约33.5ku,与菌体中目的蛋白大小一致,经凝胶成像系统UVP扫描分析,包涵体蛋白纯度接近于90%,符合进行相关结构和功能研究的要求。本研究成功构建了荷包猪SLA-3-HB01基因四聚体前体链的pET-21a(+)重组表达系统,并获得了一定纯度的包涵体蛋白。
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关键词
猪白细胞抗原(SLA)
原核构建
密码子优化
表达
包涵体
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职称材料
猪丹毒丝菌强毒株与弱毒疫苗株SpaA基因生物信息学分析
被引量：
1
2
作者
袁晓晴
彭凌
+3 位作者
陈锦红
温权
刘博婷
蔡巩林
《江苏农业科学》
2020年第17期70-76,共7页
对猪丹毒丝菌SpaA蛋白进行生物信息学分析,并对比了猪丹毒丝菌弱毒菌株和野生强毒菌株间的差异。结果显示,由于猪丹毒丝菌GC42的SpaA蛋白缺少一段含有80个氨基酸的序列,使得该菌株的蛋白质相对分子质量、氨基酸组成、二级和三级结构与...
对猪丹毒丝菌SpaA蛋白进行生物信息学分析,并对比了猪丹毒丝菌弱毒菌株和野生强毒菌株间的差异。结果显示,由于猪丹毒丝菌GC42的SpaA蛋白缺少一段含有80个氨基酸的序列,使得该菌株的蛋白质相对分子质量、氨基酸组成、二级和三级结构与强毒株的SpaA蛋白质相比均有所差异,导致这2株菌株引发机体产生的免疫原性和抗原性强弱有所不同,推测这2株菌株中,SG7菌株的免疫原性相对GC42较强;GC42菌株的抗原性相对SG7菌株的抗原性来说较弱,而猪丹毒丝菌GC42菌株的毒力相对猪丹毒丝菌SG7菌株较弱,因此呈现弱毒菌株特性;推测2株菌株的氨基酸序列均在193~206、217~231、290~309、313~327、328~376、386~457区段具有较高的形成B细胞表位的可能性。
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关键词
猪丹毒丝菌
SpaA蛋白
弱毒菌株
生物信息学分析
B细胞抗原表位
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职称材料
荷包猪SLA-2-HB01真核表达载体的构建及在PK15细胞中的表达
3
作者
翟晓鑫
高花
+4 位作者
姜平
许崇波
张宗辉
李文哲
高凤山
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第12期132-139,共8页
为构建荷包猪SLA-2-HB01真核细胞表达载体,观察其在PK15细胞中的表达情况。首先参考SLA-2-HB01基因编码区序列设计了引物对,以SLA-2-HB01-pMD 18-T为模板PCR扩增获得SLA-2-HB01编码区基因片段,经TA克隆及菌落PCR筛选得到阳性克隆菌。测...
为构建荷包猪SLA-2-HB01真核细胞表达载体,观察其在PK15细胞中的表达情况。首先参考SLA-2-HB01基因编码区序列设计了引物对,以SLA-2-HB01-pMD 18-T为模板PCR扩增获得SLA-2-HB01编码区基因片段,经TA克隆及菌落PCR筛选得到阳性克隆菌。测序正确后大量双酶切回收目的基因片段并与真核表达载体pEGFP N3相连接获得重组质粒SLA-2-HB01/pEGFP N3,重组质粒转化至大肠杆菌经大量克隆后,抽提阳性重组质粒并通过脂质体介导转染至PK15细胞,通过荧光显微镜观察转染后PK15细胞的荧光强度,进一步通过Western Blotting检测PK15细胞中SLA-2-HB01蛋白的表达情况。结果显示PCR成功扩增得到SLA-2-HB01,大小为1 104 bp,并成功构建重组质粒SLA-2-HB01/pEGFP N3,酶切鉴定证实插入片段大小为1 092 bp。SLA-2-HB01/pEGFP N3重组质粒转染PK15细胞后具有绿色荧光,Western Blotting显示SLA-2-HB01-EGFP融合蛋白分子量大小为70 kD,与理论值相符。成功构建了SLA-2-HB01/pEGFP N3重组质粒,并初步确认SLA-2-HB01-EGFP融合蛋白成功在PK15细胞中表达,为下一步进行SLA-2-HB01递呈多肽表位的研究奠定基础。
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关键词
荷包猪
PK15细胞
SLA-2
真核表达载体
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职称材料
题名
荷包猪SLA-3-HB 01基因四聚体前体链的构建及表达
1
作者
高花
翟晓鑫
姜平
甘慧
张宗辉
许崇波
高凤山
机构
大连大学
生命科学
与技术
学院
韶关
学院
英东
生命科学
学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018年第10期2691-2699,共9页
基金
国家自然科学CRISPR/Cas9技术构建sT2细胞系筛选猪源病毒SLA-Ⅰ限制性CTL表位的研究(31672525)
辽宁省教育厅重点实验室项目(LZ2015003)
辽宁省大学生创新创业训练计划项目(201611258008)
文摘
为了构建荷包猪SLA-3-HB01基因四聚体前体链原核表达载体,并获得SLA-3-HB01表达蛋白,试验以SLA-3-HB01/pMD18-T为模板进行PCR扩增四聚体前体链SLA-3-HB01-BSP,并克隆至pMD19-T载体中,经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切筛选阳性克隆并测序,目的基因连接至表达载体pET-21a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白大小及表达情况,提取包涵体并进行检测。结果显示,PCR成功扩增得到SLA-3-HB01-BSP,大小为896bp左右。酶切鉴定证实,目的基因成功克隆至pMD19-T载体中,插入片段大小为876bp,阳性克隆经测序后所获序列与原序列一致,并在3′端带有BSP标签序列。酶切鉴定进一步证实成功构建SLA-3-HB01-BSP/pET-21a(+)重组表达载体,经转化及诱导表达,SDS-PAGE检测显示目的蛋白分子质量在33.5ku左右。包涵体蛋白分子质量约33.5ku,与菌体中目的蛋白大小一致,经凝胶成像系统UVP扫描分析,包涵体蛋白纯度接近于90%,符合进行相关结构和功能研究的要求。本研究成功构建了荷包猪SLA-3-HB01基因四聚体前体链的pET-21a(+)重组表达系统,并获得了一定纯度的包涵体蛋白。
关键词
猪白细胞抗原(SLA)
原核构建
密码子优化
表达
包涵体
Keywords
SLA
prokaryotic construction
codon optimization
expression
inclusion body
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
猪丹毒丝菌强毒株与弱毒疫苗株SpaA基因生物信息学分析
被引量：
1
2
作者
袁晓晴
彭凌
陈锦红
温权
刘博婷
蔡巩林
机构
韶关
学院
英东
生命科学
学院
/
粤北
生猪
生产及
疫病
防控
协同
创新
发展中心
出处
《江苏农业科学》
2020年第17期70-76,共7页
基金
广东省自然科学基金(编号:2017A030307041)
广东省科技创新战略专项资金——“攀登计划”专项资金(编号:pdjh2020b0537)。
文摘
对猪丹毒丝菌SpaA蛋白进行生物信息学分析,并对比了猪丹毒丝菌弱毒菌株和野生强毒菌株间的差异。结果显示,由于猪丹毒丝菌GC42的SpaA蛋白缺少一段含有80个氨基酸的序列,使得该菌株的蛋白质相对分子质量、氨基酸组成、二级和三级结构与强毒株的SpaA蛋白质相比均有所差异,导致这2株菌株引发机体产生的免疫原性和抗原性强弱有所不同,推测这2株菌株中,SG7菌株的免疫原性相对GC42较强;GC42菌株的抗原性相对SG7菌株的抗原性来说较弱,而猪丹毒丝菌GC42菌株的毒力相对猪丹毒丝菌SG7菌株较弱,因此呈现弱毒菌株特性;推测2株菌株的氨基酸序列均在193~206、217~231、290~309、313~327、328~376、386~457区段具有较高的形成B细胞表位的可能性。
关键词
猪丹毒丝菌
SpaA蛋白
弱毒菌株
生物信息学分析
B细胞抗原表位
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
荷包猪SLA-2-HB01真核表达载体的构建及在PK15细胞中的表达
3
作者
翟晓鑫
高花
姜平
许崇波
张宗辉
李文哲
高凤山
机构
大连大学
生命科学
与技术
学院
韶关学院英东生命科学学院粤北生猪生产及疫病防控协同创新发展中心
大连医科大学基础医
学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第12期132-139,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31672525)
辽宁省教育厅重点实验室项目(LZ2015003)
文摘
为构建荷包猪SLA-2-HB01真核细胞表达载体,观察其在PK15细胞中的表达情况。首先参考SLA-2-HB01基因编码区序列设计了引物对,以SLA-2-HB01-pMD 18-T为模板PCR扩增获得SLA-2-HB01编码区基因片段,经TA克隆及菌落PCR筛选得到阳性克隆菌。测序正确后大量双酶切回收目的基因片段并与真核表达载体pEGFP N3相连接获得重组质粒SLA-2-HB01/pEGFP N3,重组质粒转化至大肠杆菌经大量克隆后,抽提阳性重组质粒并通过脂质体介导转染至PK15细胞,通过荧光显微镜观察转染后PK15细胞的荧光强度,进一步通过Western Blotting检测PK15细胞中SLA-2-HB01蛋白的表达情况。结果显示PCR成功扩增得到SLA-2-HB01,大小为1 104 bp,并成功构建重组质粒SLA-2-HB01/pEGFP N3,酶切鉴定证实插入片段大小为1 092 bp。SLA-2-HB01/pEGFP N3重组质粒转染PK15细胞后具有绿色荧光,Western Blotting显示SLA-2-HB01-EGFP融合蛋白分子量大小为70 kD,与理论值相符。成功构建了SLA-2-HB01/pEGFP N3重组质粒,并初步确认SLA-2-HB01-EGFP融合蛋白成功在PK15细胞中表达,为下一步进行SLA-2-HB01递呈多肽表位的研究奠定基础。
关键词
荷包猪
PK15细胞
SLA-2
真核表达载体
Keywords
Hebao pig
PK15 cell
SLA-2
eukaryotic expression vector
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
S828 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
荷包猪SLA-3-HB 01基因四聚体前体链的构建及表达
高花
翟晓鑫
姜平
甘慧
张宗辉
许崇波
高凤山
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018
0
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职称材料
2
猪丹毒丝菌强毒株与弱毒疫苗株SpaA基因生物信息学分析
袁晓晴
彭凌
陈锦红
温权
刘博婷
蔡巩林
《江苏农业科学》
2020
1
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职称材料
3
荷包猪SLA-2-HB01真核表达载体的构建及在PK15细胞中的表达
翟晓鑫
高花
姜平
许崇波
张宗辉
李文哲
高凤山
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
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