四川贡嘎山国家级自然保护区3种高山同域鸡形目鸟类的时空分化研究

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作者 刘名洋 姚雪岚 +6 位作者 李旭琴 赵鹏 李忠伦 李英 蒋勇 阮光发 杨楠 《四川动物》 北大核心 2025年第2期121-130,共10页

高山生态系统以其特殊的自然环境孕育了独特的生物多样性模式,探究高山同域分布物种在有限资源条件下生态位的分化,对于高山生态系统生物多样性保护与管理工作具有重要意义。利用四川贡嘎山国家级自然保护区2017—2020年的红外相机数据... 高山生态系统以其特殊的自然环境孕育了独特的生物多样性模式,探究高山同域分布物种在有限资源条件下生态位的分化,对于高山生态系统生物多样性保护与管理工作具有重要意义。利用四川贡嘎山国家级自然保护区2017—2020年的红外相机数据,分析了白马鸡Crossoptilon crossoptilon、血雉Ithaginis cruentus和藏雪鸡Tetraogallus tibetanus 3种高山雉类的时空分化情况。从空间分布尺度上来看,藏雪鸡偏好海拔≥4000 m的草甸和流石滩生境,而白马鸡和血雉偏好较低海拔的灌丛和林地生境;从栖息地利用尺度上来看,3种雉类对环境变量的偏好存在差异,在繁殖季血雉和藏雪鸡偏好离人为干扰较远、资源丰富的区域,而在非繁殖季3种雉类均偏好温暖且能获取资源的区域。时间生态位分析结果表明,三者的活动节律在繁殖季存在一定差异,且差异在非繁殖季增大。研究结果揭示了高山雉类在时空上的分布差异及栖息地选择偏好,为高山生态系统多样性保护与管理提供了科学依据。 展开更多

关键词 贡嘎山国家级自然保护区 同域雉类 高山生态系统 日活动节律 生态位分化

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牦牛、犏牛和黄牛肺脏比较转录组图谱研究

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作者 白媛媛 蔡雯祎 +4 位作者 邢嘉仪 姜雨婷 麻志伟 吉文汇 兰道亮 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3226-3243,共18页

旨在通过比较牦牛、犏牛和黄牛的转录组数据,探究高原特有哺乳动物低氧适应相关的基因标记及适应机制。本研究采集平均体重330 kg,3~4岁健康雄性牦牛、雄性犏牛(海拔3700 m)和平均体重350 kg雄性黄牛(海拔500 m)的肺脏组织,饲养方式均... 旨在通过比较牦牛、犏牛和黄牛的转录组数据,探究高原特有哺乳动物低氧适应相关的基因标记及适应机制。本研究采集平均体重330 kg,3~4岁健康雄性牦牛、雄性犏牛(海拔3700 m)和平均体重350 kg雄性黄牛(海拔500 m)的肺脏组织,饲养方式均为放牧,每个品种设置3个重复样本。对采集的样本进行RNA提取及转录组测序,随后进行品种间的转录组差异比较、GO和KEGG分析及表达量趋势分析。结果,共获得3个品种372.98 G的CleanData。转录组差异比较发现,牦牛vs.黄牛显著差异基因有2318个,犏牛vs.黄牛显著差异基因有1487个,牦牛与犏牛共同区别于黄牛的显著差异基因有1064个。它们主要涉及细胞外空间、免疫反应、离子跨膜运输、神经肽信号传递、趋化因子活性、造血细胞谱系等生物学过程,在神经活性配体-受体相互作用、CAMP信号通路、花生四烯酸代谢、酪氨酸代谢等通路显著富集。表达量趋势分析发现,1064个DEGs中有275个基因的表达量在牦牛-犏牛-黄牛之间表现出递增或递减的规律,与膜相关的术语和细胞质、细胞核相关术语高频出现,涉及神经系统、免疫反应、细胞黏附等方面的通路有较为明确的功能推测。此外还发现了与缺氧适应有关的基因,它们包括IL1B、CHRNA7、ALAS2、HIF3A、CAMK2A等。不仅参与了对缺氧的响应,还广泛涉及免疫、神经、红细胞生成等多方面。本研究揭示了牦牛、犏牛和黄牛在基因表达上的显著差异,涉及免疫、缺氧适应、神经信号等关键通路,阐明了其独特生理特性及环境适应性。本研究结果为杂交优势和高原适应机制提供了分子依据,为高原动物遗传改良和疾病防控奠定了理论基础。 展开更多

关键词 高原适应性 肺脏 基因调控 犏牛 牦牛

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藏猪源捷申病毒的检测和遗传演化分析 被引量：4

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作者 王丽瑄 周群 +5 位作者 付能胜 曹慧 何欣怡 方鹏飞 胡承哲 张斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期185-194,共10页

旨在调查四川地区藏猪捷申病毒(porcine teschovirus, PTV)的流行及分子特征和遗传演化。用RT-PCR法对2017—2018年采自四川省甘孜藏族自治州康定市14个藏猪场96份粪便样品进行检测,并对全基因组进行序列分析和基因分型。PCR检测结果表... 旨在调查四川地区藏猪捷申病毒(porcine teschovirus, PTV)的流行及分子特征和遗传演化。用RT-PCR法对2017—2018年采自四川省甘孜藏族自治州康定市14个藏猪场96份粪便样品进行检测,并对全基因组进行序列分析和基因分型。PCR检测结果表明,PTV核酸阳性率为20.8%(20/96,95%CI=13.2%~30.3%),14个规模藏猪场中PTV猪场阳性率为57.1%(8/14,95%CI=28.9%~82.3%),并从2份阳性样本中获得了2条近似全长的PTV全基因组序列,分别命名为SWU-E5-2018和SWU-ZG2-2018,核苷酸序列相似性为83.1%。通过VP1序列分析发现2条序列的血清型分别为3型和6型。通过基因重组分析发现SWU-E5-2018存在重组现象,重组区域位于衣壳蛋白基因P1的552—3 082 nt处。为了进一步研究2条PTV序列的演化过程,以贝叶斯进化分析软件进行分歧时间估算,结果表明,SWU-E5-2018的分歧时间约为2010年,SWU-ZG2-2018的分歧时间约为2011年。本研究首次对藏猪源PTV进行了初步调查,结果表明藏猪中存在一定程度的PTV感染,为深入研究藏猪源PTV遗传变异及其生物学特性提供了参考依据。 展开更多

关键词 藏猪 捷申病毒 基因组 重组分析 分子钟

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简州大耳羊CKMT2基因克隆、生物信息学分析及时空表达研究 被引量：2

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作者 孙诗雨 李金岚 +4 位作者 邢佳妮 董耀徽 李艳艳 王友利 林亚秋 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2342-2353,共12页

【目的】克隆简州大耳羊肌节线粒体肌酸激酶2(creatine kinase mitochondrial 2,CKMT2)基因并探究其生物学特征,明确其在简州大耳羊不同组织以及不同分化阶段成肌细胞中的表达特性。【方法】采集简州大耳羊心脏、肝脏、脾脏、肾脏、背... 【目的】克隆简州大耳羊肌节线粒体肌酸激酶2(creatine kinase mitochondrial 2,CKMT2)基因并探究其生物学特征,明确其在简州大耳羊不同组织以及不同分化阶段成肌细胞中的表达特性。【方法】采集简州大耳羊心脏、肝脏、脾脏、肾脏、背最长肌、臂三头肌组织样品,利用PCR方法扩增简州大耳羊CKMT2基因并克隆测序,通过在线软件对其进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术检测CKMT2基因在简州大耳羊不同组织及不同分化阶段成肌细胞中的表达水平。【结果】简州大耳羊CKMT2基因全长1 314 bp,其中包括CDS区1 259 bp,编码419个氨基酸,与绵羊和羚羊的亲缘关系最近。CKMT2蛋白是一种无信号肽及跨膜结构域的碱性亲水稳定蛋白,主要定位于线粒体、过氧化物类酶体及细胞质,共包含32个磷酸化位点、1个N-糖基化位点以及4个O-糖基化位点。蛋白二级结构主要包括α-螺旋(39.14%)、无规则卷曲(36.28%)、延伸链(16.23%)和β-转角(8.35%),三级结构与二级结构预测结果基本一致。蛋白互作分析结果显示,CKMT2蛋白与半胱氨酸和甘氨酸富含蛋白3(cysteine and glycine-rich protein 3,CSRP3)、M型肌酸激酶(creatine kinase M-type, CKM)、磷酸甘油酸变位酶2(phosphoglycerate mutase 2,PGAM2)等蛋白存在相互作用。组织表达谱结果显示,CKMT2基因在简州大耳羊心脏中表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05);在背最长肌中表达量较高,显著高于脾脏和臂三头肌(P<0.05)。时序表达谱结果显示,简州大耳羊CKMT2基因在成肌细胞诱导分化4 d时表达水平达到峰值,显著高于0、6 d(P<0.05)。【结论】本研究成功克隆简州大耳羊CKMT2基因序列并明确了其分子特征,其在心脏、背最长肌以及成肌分化4 d时表达量较高。研究结果为进一步揭示CKMT2基因调控简州大耳羊成肌细胞增殖分化的分子机制奠定基础。 展开更多

关键词 简州大耳羊 CKMT2基因 克隆 组织表达 细胞分化

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猫疱疹病毒1型的检测及一株分离毒株的致病性

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作者 邓梏男 张家祺 +8 位作者 保志鹏 陈涛云 喻琦胜 丁露 朱晨曦 王怡 任玉鹏 贺超 张斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2253-2258,共6页

旨在调查成都地区的猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus-1, FHV-1)的流行及遗传变异情况。试验选取2020—2023年从成都地区采集的178份具有呼吸道症状猫的眼、鼻及口咽拭子进行FHV-1核酸检测、gE基因遗传进化分析、FHV-1的分离鉴定和致... 旨在调查成都地区的猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus-1, FHV-1)的流行及遗传变异情况。试验选取2020—2023年从成都地区采集的178份具有呼吸道症状猫的眼、鼻及口咽拭子进行FHV-1核酸检测、gE基因遗传进化分析、FHV-1的分离鉴定和致病性研究。结果发现,成都地区FHV-1阳性率为11.8%(21/178);其中宠物医院FHV-1阳性率为6.4%(7/110),猫舍FHV-1阳性率为20.6%(14/68),表明在猫舍中FHV-1感染率更高。FHV-1 gE基因的遗传进化分析结果表明,本研究扩增出的5株gE基因和疫苗株的核苷酸同源性在99.1%~100%,并发现PX-9株存在3个独特的氨基酸突变位点(L259Q、C294I、W295F)。通过CRFK细胞对5份阳性样本进行病毒的分离培养,结果PX-9毒株被成功分离鉴定。对PX-9毒株进行动物回归试验,结果表明攻毒组猫只表现出眼鼻分泌物增多,打喷嚏等临床症状,在接毒后第4天病毒拷贝数最高,为9.05×10^(7) copies·μL^(-1),且排毒期较长;攻毒猫只FHV-1病毒载量检测结果显示,气管及肺组织病毒拷贝数分别为1.7×10^(7)和3.5×10^(4) copies·μg^(-1),其它组织核酸阴性。综上表明,在成都地区仍然存在FHV-1流行,并且流行毒株有较强的致病性。 展开更多

关键词 FHV-1 流行情况 遗传变异 动物回归试验

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过表达FGF10促进山羊皮下前体脂肪细胞分化 被引量：8

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作者 许晴 李倩 +3 位作者 王永 朱江江 张亚楠 林亚秋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1972-1984,共13页

本研究在构建山羊FGF 10过表达腺病毒载体的基础上,阐明过表达FGF 10基因对山羊皮下前体脂肪细胞分化的影响及可能的作用机制。本试验利用胶原酶消化法分离获得山羊皮下前体脂肪细胞,采用AdEasy腺病毒包装系统成功构建过表达腺病毒pAdTr... 本研究在构建山羊FGF 10过表达腺病毒载体的基础上,阐明过表达FGF 10基因对山羊皮下前体脂肪细胞分化的影响及可能的作用机制。本试验利用胶原酶消化法分离获得山羊皮下前体脂肪细胞,采用AdEasy腺病毒包装系统成功构建过表达腺病毒pAdTrack-CMV-FGF 10,并感染细胞。采用油红O染色方法从形态学上观察FGF 10对成脂分化的影响;利用qPCR技术检测脂肪细胞分化标志基因、脂代谢相关基因、成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptors,FGFRs)和Kruppel样因子家族(Kruppel like factors,KLFs)mRNA的相对表达变化。结果显示,在过表达FGF 10后的第2天,皮下脂肪细胞中脂滴聚集显著多于对照组,C/EBPα、LPL、ACACA、FGFR 1和FGFR 3的相对表达水平极显著上调(P<0.01),FASN和ATGL的相对表达水平分别出现显著上调(P<0.05)和显著下调(P<0.05),同时,过表达FGF 10显著上调KLF家族成员KLF 8-10、16和17基因mRNA相对表达水平(P<0.05),显著下调KLF 1、2、4和15基因的相对表达水平(P<0.05)。结果表明,过表达FGF10基因可能通过调控C/EBPα、LPL、FASN、ACACA、ATGL和KLFs部分成员的表达促进山羊皮下前体脂肪细胞的分化及脂滴聚集,结果为进一步阐明其调控山羊不同部位脂肪沉积的分子机理提供重要的数据支撑。 展开更多

关键词 山羊 FGF10基因 皮下脂肪细胞 过表达 分化

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miR-301b对山羊肌内脂肪细胞分化的调控作用 被引量：3

7

作者 张浩 何长晟 +4 位作者 李艳艳 王永 朱江江 俄木曲者 林亚秋 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期254-261,共8页

旨在明确miR-301b对山羊肌内脂肪细胞分化的调控作用,探讨其发挥调控作用的可能机制。利用化学合成的miR-301b mimics和miR-301b siRNA,通过脂质体转染法在山羊肌内脂肪细胞过表达和干扰miR-301b,并通过油红O染色、qPCR和生物信息学分... 旨在明确miR-301b对山羊肌内脂肪细胞分化的调控作用,探讨其发挥调控作用的可能机制。利用化学合成的miR-301b mimics和miR-301b siRNA,通过脂质体转染法在山羊肌内脂肪细胞过表达和干扰miR-301b,并通过油红O染色、qPCR和生物信息学分析等方法,从细胞形态学和mRNA水平明确miR-301b对山羊肌内脂肪细胞分化的调控作用,并初步探究其可能的作用机制。结果表明,过表达miR-301b效率约29290倍,细胞形态学结果显示,过表达miR-301b后山羊肌内脂肪细胞脂滴积聚减少,甘油三酯合成降低。qPCR结果显示,过表达miR-301b后成脂标志基因CEBPα、PPARγ、SREBP1、LPL表达水平极显著下调(P<0.01)。miR-301b干扰效率约60%,干扰miR-301b表达后,细胞形态学结果显示,山羊肌内脂肪细胞脂滴积聚增加,甘油三酯合成升高。qPCR结果显示,干扰miR-301b后成脂标志基因AP2、CEBPα、CEBPβ、PPARγ、SREBP1、LPL表达水平极显著上调(P<0.01)。通过对miR-301b生物信息学分析,推测KLF3为miR-301b的靶标基因,qPCR验证发现过表达miR-301b后显著抑制KLF3的mRNA表达水平(P<0.05),干扰miR-301b后显著促进KLF3的表达水平(P<0.05)。过表达miR-301b抑制山羊肌内前体脂肪细胞分化,同时KLF3表达水平下调;干扰miR-301b促进山羊肌内前体脂肪细胞分化,KLF3表达水平上调,推测miR-301b可能通过KLF3抑制山羊肌内脂肪细胞分化。 展开更多

关键词 山羊 miR-301b KLF3 肌内脂肪细胞 分化

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KLF2对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响 被引量：6

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作者 何长晟 王永 +4 位作者 许晴 白文林 王江林 朱江江 林亚秋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期64-73,共10页

旨在克隆山羊KLF2基因的锌指结构域序列,明确其在组织及细胞表达模式,最终阐明其对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响及可能发挥作用的方式。本研究以5只1周岁左右的健康简州大耳羊为试验动物,利用RT-PCR、细胞培养、实时荧光定量PCR(real... 旨在克隆山羊KLF2基因的锌指结构域序列,明确其在组织及细胞表达模式,最终阐明其对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响及可能发挥作用的方式。本研究以5只1周岁左右的健康简州大耳羊为试验动物,利用RT-PCR、细胞培养、实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)、RNA干扰等方法克隆KLF2基因锌指结构,明确KLF2基因的时空表达特性并阐明其对肌内前体脂肪细胞分化的影响。结果显示,本研究获得的山羊KLF2锌指结构域为454 bp(KU041748.1),且该结构域与绵羊、牛、小鼠的同源性为100%。KLF2在山羊各组织中存在广泛表达,且在肺和腹间脂肪中存在较高水平表达(P<0.05)。KLF2在山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达呈先下降又上升然后又下降趋势,且在成脂诱导分化12 h呈最低表达水平,显著低于在未分化的前体脂肪细胞中的表达水平(P<0.05)。油红O染色结果显示,干扰KLF2基因可明显促进山羊肌内脂肪细胞的脂滴积聚;并且PPARγ和C/EBPβ表达量伴随着这个过程分别极显著上调48.5%(P<0.01)和显著上调43.6%(P<0.05);同时该家族中的KLF1、KLF13、KLF14、KLF15和KLF16表达水平极显著升高(P<0.01),KLF4显著下降(P<0.05),KLF3、KLF6、KLF8、KLF9及KLF11极显著下降(P<0.01)。山羊KLF2的锌指结构域与其他物种同源性高度保守,且其在山羊肺和腹间脂肪中表达量较高(P<0.05)。同时KLF2是山羊肌内脂肪细胞分化的负调控因子,并且可能通过PPARγ和C/EBPβ基因来发挥作用,且与其他KLFs基因存在等级调控现象。 展开更多

关键词 山羊 KLF2 RNA干扰 肌内前体脂肪细胞分化 表达模式

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SRSF10对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响 被引量：5

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作者 刘珂含 王永 +5 位作者 李艳艳 王重洋 朱江江 熊燕 李安 林亚秋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1768-1778,共11页

旨在克隆山羊SRSF10基因序列,明确其生物学特性,并通过过表达和干扰手段阐明SRSF10对山羊肌内脂肪细胞分化的影响。本研究以简州大耳羊(Capra hircus)为试验对象,利用RT-PCR技术克隆山羊SRSF10基因序列,并进行生物信息学分析;利用实时... 旨在克隆山羊SRSF10基因序列,明确其生物学特性,并通过过表达和干扰手段阐明SRSF10对山羊肌内脂肪细胞分化的影响。本研究以简州大耳羊(Capra hircus)为试验对象,利用RT-PCR技术克隆山羊SRSF10基因序列,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)技术研究其在成脂诱导分化不同阶段细胞中的表达水平;转染pcDNA3.1-SRSF10过表达载体和SRSF10-siRNA至山羊肌内前体脂肪细胞并诱导分化,通过油红O和Bodipy染色法从形态学上明确其对脂滴积聚的影响;通过qPCR方法检测脂肪细胞分化标志基因表达的变化。结果显示,获得山羊SRSF10基因序列为1026 bp,其中CDS区552 bp,共编码183个氨基酸;SRSF10在诱导分化96 h的肌内脂肪细胞中表达量最高;过表达和干扰山羊SRSF10分别促进和抑制了肌内脂肪细胞中的脂滴积聚;过表达后基因SREBP1、PPARγ和C/EBPα的相对表达量极显著上调(P<0.01),干扰后分化标志基因SREBP1、PPARγ和C/EBPα相对表达水平极显著降低(P<0.01)。结果表明,山羊SRSF10是肌内脂肪细胞分化的正调控作用因子,并且这种调控作用可能主要通过调节SREBP1、PPARγ和C/EBPα的表达来实现。 展开更多

关键词 山羊 SRSF10 基因克隆 表达特性 肌内前体脂肪细胞 细胞分化

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山羊DGAT1基因的克隆及对前体脂肪细胞脂质沉积的调控作用研究 被引量：5

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作者 杨昌恒 李琪 +4 位作者 黄维 林亚秋 王永 向华 朱江江 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期76-87,共12页

旨在克隆山羊DGAT1基因序列,明确DGAT1基因在山羊不同组织中的表达模式,并进一步揭示过表达DGAT1基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响。本试验以10月龄健康简州大耳公羊(n=7)为试验动物。采用RT-PCR法克隆山羊DGAT1基因序列,并对... 旨在克隆山羊DGAT1基因序列,明确DGAT1基因在山羊不同组织中的表达模式,并进一步揭示过表达DGAT1基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响。本试验以10月龄健康简州大耳公羊(n=7)为试验动物。采用RT-PCR法克隆山羊DGAT1基因序列,并对序列进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测DGAT1在山羊不同组织中的相对表达水平;采用双酶切法构建pcDNA3.1-DGAT1真核表达载体并转染至山羊肌内前体脂肪细胞;使用RT-qPCR检测DGAT1过表达效率及脂质代谢相关基因的表达情况;通过油红O染色法观察过表达DGAT1对脂滴形成的影响,利用GPO-Trinder酶学反应检测甘油三酯含量。结果显示,获得山羊DGAT1基因序列全长1651 bp(GenBank登录号:MT221183),包含5′UTR 125 bp,CDS 1470 bp,3′UTR 56 bp,编码489个氨基酸残基;山羊DGAT1基因在小肠中的表达量最高,在脾中表达量最低;RT-qPCR检测结果显示,DGAT1在细胞中过表达极显著(P<0.01),GPAM基因的相对表达水平显著上调(P<0.05),ADRP和ACOX1基因极显著上调(P<0.01),而AGPAT6基因相对表达水平显著下调(P<0.05),MLYCD和HSL基因极显著下调(P<0.01);油红O染色结果显示,过表达DGAT1后脂滴聚积相较于对照组极显著增多(P<0.01),甘油三酯测定结果显示,过表达DGAT1基因可极显著增加山羊肌内脂肪细胞甘油三酯含量(P<0.01)。本研究成功获得山羊DGAT1基因CDS区序列并构建了pcDNA3.1-DGAT1真核表达载体,过表达DGAT1可显著促进山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积,并显著影响脂质代谢相关基因的表达,这些结果为进一步阐明DGAT1对调控山羊肌内脂肪代谢的作用机制提供了重要数据。 展开更多

关键词 山羊 DGAT1 过表达 肌内前体脂肪细胞 甘油三酯

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KLF11抑制山羊肌内前体脂肪细胞分化 被引量：6

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作者 王江林 王永 +2 位作者 池永东 朱江江 林亚秋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期976-986,共11页

旨在获得山羊Krüppel样因子11(Krüppel-like factor 11,KLF11)基因序列,明确其组织及细胞表达模式,阐明KLF11对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响及可能作用途径。本研究利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)... 旨在获得山羊Krüppel样因子11(Krüppel-like factor 11,KLF11)基因序列,明确其组织及细胞表达模式,阐明KLF11对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响及可能作用途径。本研究利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术检测KLF11在山羊各组织及成脂诱导分化不同阶段细胞中的表达水平,利用油红O染色和qPCR等方法从形态学及分子生物学等角度确定干扰KLF11后对山羊肌内脂肪细胞分化的影响及可能的作用途径。结果表明,KLF11核苷酸序列总长为1752 bp,CDS区为1518 bp,编码505个氨基酸残基。KLF11基因在山羊各个组织中都有广泛表达,并且在肝、背最长肌及腹部脂肪中存在较高水平表达;KLF11在成脂诱导48 h的山羊肌内脂肪细胞中表达水平极显著高于诱导分化前(P<0.01)。筛选到干扰效率可达到63.58%的KLF11-siRNA1有效干扰序列,转染山羊肌内前体脂肪细胞后发现可明显促进山羊肌内脂细胞的脂滴积聚,且脂肪细胞分化标志基因PPARγ和C/EBPβmRNA水平出现极显著上调(P<0.01),Pref-1 mRNA水平出现极显著下调(P<0.01);干扰KLF11基因后,KLFs有些成员(KLF1、KLF2、KLF4、KLF5、KLF8、KLF10、KLF14、KLF16)表达水平发生极显著下降(P<0.01),有些(KLF15)则出现相反的表达模式。KLF11基因可能通过调控PPARγ、C/EBPβ和Pref-1的表达抑制山羊肌内前体脂肪细胞分化,并且这种作用可能是通过协同KLF2、KLF4、KLF10,拮抗KLF7和KLF15来进行的。 展开更多

关键词 山羊 KLF11基因 肌内前体脂肪细胞 干扰 细胞分化

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miR-106b-5p靶向KLF4调控山羊肌内前体脂肪细胞分化 被引量：8

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作者 杜宇 赵越 +4 位作者 林亚秋 朱江江 王永 马洁琼 谢光杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1219-1228,共10页

旨在明确miR-106b-5p对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响,并确定这种作用是通过靶向KLF4来实现的。本研究利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测miR-106b-5p在山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达模式,通... 旨在明确miR-106b-5p对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响,并确定这种作用是通过靶向KLF4来实现的。本研究利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测miR-106b-5p在山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达模式,通过脂质体转染技术将miR-106b-5p mimic和miR-106b-5p inhibitor转入体外培养的山羊肌内前体脂肪细胞,油红O染色法从形态学验证miR-106b-5p对脂肪细胞中脂滴积聚的影响,qRT-PCR检测预测的靶标基因KLF4和脂肪分化标志基因的表达情况,利用双荧光素酶报告系统鉴定miR-106b-5p与KLF4的靶标关系。qRT-PCR结果显示,miR-106b-5p在山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化第3天时表达量最高。在山羊肌内脂肪细胞中干扰miR-106b-5p后油红O染色显示脂滴聚积减少,过表达miR-106b-5p后脂滴聚积增加。在山羊肌内前体脂肪细胞中转染miR-106b-5p inhibitor后PPARγ表达量显著降低(P<0.05),而KLF4表达量极显著升高(P<0.01);转染miR-106b-5p mimic后LPL和PPARγ表达量极显著升高(P<0.01)。荧光素酶活性试验结果显示,过表达miR-106b-5p可显著抑制KLF4荧光活性。miR-106b-5p通过靶向并负调节KLF4的表达促进山羊肌内脂肪细胞分化。 展开更多

关键词 山羊 miR-106b-5p KLF4 脂肪细胞 荧光素酶活性试验

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2017—2021年成都市猫细小病毒的检测及其VP2基因的变异分析 被引量：6

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作者 周群 杨苑 +3 位作者 宋鑫 何欣怡 曹慧 张斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期1303-1309,共7页

本研究旨在通过对成都地区家养猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)的分子检测,了解FPV在成都地区的流行及遗传变异情况。2017-2021年分别从四川成都地区采集168份家养猫的腹泻粪便样本,用PCR方法对168份样本进行FPV检测,并选取13份阳性... 本研究旨在通过对成都地区家养猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)的分子检测,了解FPV在成都地区的流行及遗传变异情况。2017-2021年分别从四川成都地区采集168份家养猫的腹泻粪便样本,用PCR方法对168份样本进行FPV检测,并选取13份阳性样本进行VP2基因全长的克隆和测序,用MegAlign软件分析FPV核苷酸和氨基酸序列的同源性及变异,通过MEGA 7.0软件用邻近法构建系统进化树分析成都地区FPV的遗传进化情况。结果表明,168份猫样本中检出FPV阳性样本118份,阳性率为70.2%。本研究获得的13株FPV VP2基因与参考毒株之间的同源性为97.1%~100%。VP2蛋白氨基酸分析表明,SMU-D18和SMU-D14毒株序列与new CPV-2a一致,为猫源犬细小毒株。有趣的是,本研究中SMU-D46毒株在第293和297位氨基酸均出现了独特的由Ser(S)到Phe(F)的替换。此外,系统进化分析显示,国内外FPV毒株在进化树中聚类为3个基因群(G1、G2和G3),本研究获得的毒株分别位于G1和G3群中,值得注意的是,商品化的FPV疫苗株位于G2群中,与我国流行的FPV毒株亲缘关系较远。本研究表明,成都市猫群中FPV的流行十分普遍,急需重新评估现有的商品化疫苗的保护效率。 展开更多

关键词 猫细小病毒 分子流行病学 VP2基因 变体

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过表达NR4A1促进山羊皮下脂肪细胞分化 被引量：3

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作者 崔胜 王永 +2 位作者 朱江江 熊燕 林亚秋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1258-1266,共9页

旨在克隆山羊NR4A1基因的CDS区序列,明确其组织和细胞表达模式,以及探究过表达NR4A1基因对山羊皮下脂肪细胞分化的影响。本试验利用双酶切法构建山羊过表达载体pcDNA3.1-NR4A1。以1周岁简州大耳羊(n=5)为试验动物。利用RT-PCR方法和实... 旨在克隆山羊NR4A1基因的CDS区序列,明确其组织和细胞表达模式,以及探究过表达NR4A1基因对山羊皮下脂肪细胞分化的影响。本试验利用双酶切法构建山羊过表达载体pcDNA3.1-NR4A1。以1周岁简州大耳羊(n=5)为试验动物。利用RT-PCR方法和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)技术克隆NR4A1基因编码区序列并明确其时空表达特性,再将山羊pcDNA3.1-NR4A1载体转染皮下脂肪细胞使NR4A1过表达,利用形态学方法检测过表达后脂滴聚集的变化,同时采用qPCR方法检测脂肪分化标志基因相对表达水平的变化。结果获得山羊NR4A1基因的编码区序列是1797 bp,编码598个氨基酸;NR4A1在山羊各组织中广泛表达,且在山羊背最长肌中的相对表达水平最高(P<0.01),在山羊皮下脂肪细胞分化60 h表达量最高(P<0.01);过表达NR4A1基因显著促进山羊皮下脂肪细胞的脂滴积累,并且显著提高C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ、LPL、SREBP1和AP2的相对表达水平(P<0.05)。NR4A1基因可能是山羊皮下脂肪细胞分化的正调控因子,且可能是协同脂肪分化标志基因的表达量来实现的。 展开更多

关键词 山羊 NR 4A1 克隆 过表达 皮下脂肪细胞

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Loop6、Loop7和Loop8参与副猪嗜血杆菌OmpP2抗血清的杀菌作用研究 被引量：3

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作者 何欣怡 周叶 +4 位作者 周群 曹慧 宋鑫 岳华 张斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期639-645,共7页

为研究副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P2(OmpP2)不同表面环状结构(Loop)在HPS抗血清杀菌过程中发挥的作用。本研究以pBAD18-Km质粒和HPS SC096为模板,PCR扩增卡那霉素抗性基因(Km)片段和含ompP2 TTA终止密码子下臂基因片段。通过重叠延伸PC... 为研究副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P2(OmpP2)不同表面环状结构(Loop)在HPS抗血清杀菌过程中发挥的作用。本研究以pBAD18-Km质粒和HPS SC096为模板,PCR扩增卡那霉素抗性基因(Km)片段和含ompP2 TTA终止密码子下臂基因片段。通过重叠延伸PCR扩增融合基因片段Km-ompP2克隆至自杀性质粒pK18mobsacB中,获得重组自杀性质粒pZY01。以HPS SC096为模板经PCR分别扩增ompP2 Loop1~Loop8上臂片段和ompP2 Loop1~Loop 8下游片段,并经重叠延伸PCR扩增各loop基因融合片段(分别缺失Loop1~Loop8基因序列的ompP2片段)并克隆至pZY01,构建各Loop基因缺失的自杀性质粒pZY02~pZY08,所有的自杀性质粒均经PCR鉴定。将正确构建的自杀性质粒pZY01~pZY08通过自然转化法转化至ompP2基因缺失的HPS SC096(SC096ΔompP2)中,构建了HPS ompP2ΔLoop缺失菌株,并均经PCR鉴定后在TSA中传10代,通过PCR方法检测其遗传稳定性。结果显示,正确构建了8个自杀性质粒pZY01~pZY08及缺失各Loop基因的HPS ompP2ΔLoop2、ompP2ΔLoop5、ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8,共5个HPS ompP2ΔLoop缺失菌株,且各缺失菌株的Loop基因均能够稳定缺失,表明其均具有较好的遗传稳定性。未获得HPS ompP2ΔLoop1、ompP2ΔLoop3和ompP2ΔLoop4缺失菌株。制备新鲜兔血清并分别测定不同HPS ompP2ΔLoop缺失菌株在50%和90%兔血清中的存活率,分析不同缺失菌株的抗兔血清中补体介导的杀菌作用。结果显示,与HPSΔompP2菌株相比,HPS ompP2ΔLoop2菌株在50%和90%兔血清中的存活率分别增加了4×10^(5)倍和1×10^(6)倍;HPS ompP2ΔLoop5菌株在50%和90%兔血清中的存活率分别增加了3×10^(5)倍和1×10^(6)倍;HPS ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8的存活率无显著变化。与野生型SC096株相比,在50%兔血清中,HPS ompP2ΔLoop2、ompP2ΔLoop5、ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8缺失菌株的存活率分别降低了53.7%、60.1%、99.8%、99.6%和99.9%;在90%兔血清中,上述HPS ompP2ΔLoop菌株的存活率分别降低了78.0%、84.4%、99.9%、99.9%和99.9%。以上结果表明Loop6、Loop7和Loop8参与OmpP2的抗血清杀菌作用,且这三者可能是OmpP2重要的活跃肽段。本研究为探究HPS ompP2的毒力机制提供参考。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 外膜蛋白P2 表面环状结构 血清杀菌作用

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山羊GPR35基因表达特性分析及对皮下脂肪细胞分化作用的研究 被引量：2

16

作者 孟秋赤 卢光玉 +8 位作者 陈定双 林亚秋 王瑞龙 钟朝崧 王永 刘伟 王友利 李艳艳 李志雄 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期4993-5007,共15页

旨在克隆山羊GPR35基因序列,探究其表达特性并初步阐明该基因对山羊皮下前体脂肪细胞分化的影响以及可能的作用机制。本研究以1周岁的健康雄性(n=4)简州大耳羊为试验对象,利用RT-PCR技术(reverse transcription-polymerase chain reacti... 旨在克隆山羊GPR35基因序列,探究其表达特性并初步阐明该基因对山羊皮下前体脂肪细胞分化的影响以及可能的作用机制。本研究以1周岁的健康雄性(n=4)简州大耳羊为试验对象,利用RT-PCR技术(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)克隆山羊GPR35基因完整的蛋白质编码区(sequence coding for amino acids in protein, CDS)序列,并对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)技术检测GPR35基因在山羊各组织及不同分化阶段皮下脂肪细胞中的表达情况;随后将GPR35过表达载体(pEGFP-N1-GPR35)及其干扰序列(Si-GPR35)分别转染至山羊皮下前体脂肪细胞中并使用油酸诱导分化,通过油红O和Bodipy染色对其脂滴的变化进行形态学观察并对其甘油三酯含量变化进行检测,最后通过qRT-PCR技术来检测脂肪细胞分化、甘油三酯合成和分解相关标志基因的表达量变化(所有样本均设置3个生物学样本重复和3个技术重复)。结果表明,克隆获得的山羊GPR35基因序列全长为1 167 bp,开放阅读框长906 bp,共编码301个氨基酸残基。GPR35基因在山羊背最长肌中的表达量显著高于其它肌肉组织(P<0.01);在皮下脂肪中的表达量显著高于其它脂肪组织(P<0.01);在脾脏中显著高于山羊的其它内脏组织(P<0.01),此外该基因在诱导分化120 h后的皮下脂肪细胞中表达量最高(P<0.01)。过表达和干扰GPR35后分别抑制和促进皮下脂肪细胞中的脂滴含量和聚集程度,甘油三酯相对含量分别显著下降和上升;过表达该基因后C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ、AP2、SREBP1基因的表达量极显著下调(P<0.01),HSL极显著上调(P<0.01);而干扰该基因后C/EBPα、C/EBPβ、AP2、SREBP1、DGAT1基因的表达量极显著上调(P<0.01),FASN极显著下调(P<0.01)。综合以上结果表明,GPR35基因可能是山羊皮下前体脂肪细胞分化过程中的一个负向的调控因子,这种作用可能是通过调控C/EBPα、C/EBPβ、AP2、SREBP1的表达或与CXCL17蛋白相互作用来实现的。 展开更多

关键词 山羊 GPR 35 生物信息学分析 皮下脂肪细胞 细胞分化

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山羊APOA 4基因抑制肌内脂肪细胞分化 被引量：2

17

作者 曲比伍且 李艳艳 +5 位作者 李鑫 王永 王友利 刘伟 朱江江 林亚秋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1927-1938,共12页

旨在明确山羊脂蛋白A-IV(apolipoprotein A-IV,APOA 4)对肌内脂肪细胞分化的调控作用。本试验所用动物为1周岁生理状态良好,舍饲的简州大耳羊公羊(n=5)。试验利用RT-PCR技术克隆山羊APOA 4基因序列,通过生物信息学分析方法对克隆得到的... 旨在明确山羊脂蛋白A-IV(apolipoprotein A-IV,APOA 4)对肌内脂肪细胞分化的调控作用。本试验所用动物为1周岁生理状态良好,舍饲的简州大耳羊公羊(n=5)。试验利用RT-PCR技术克隆山羊APOA 4基因序列,通过生物信息学分析方法对克隆得到的序列进行分析,并获得序列特征;利用qPCR技术构建山羊APOA 4的组织与细胞时序表达谱;通过构建山羊APOA 4基因过表达载体,本试验分为过表达组(pEGFP-N1-APOA 4)与阴性对照组(pEGFP-N1),每组设置3个重复,每个重复的样本量为2个。转染pEGFP-N1-APOA 4过表达载体和pEGFP-N1至山羊肌内前体脂肪细胞并诱导分化,通过油红O染色、Bodipy染色、DAPI染色、吸光度(OD490 nm)测定及qPCR等方法确定过表达山羊APOA 4基因对肌内脂肪细胞分化及脂肪形成标志物的影响。结果表明:1)试验克隆得到山羊APOA 4基因序列1467 bp,其中CDS区1143 bp,编码380个AA;2)生物信息学分析推测得到山羊APOA4为带负电且属于酸性不稳定疏水蛋白;3)山羊APOA 4在山羊各组织广泛表达,在肝中表达量最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。APOA 4在诱导分化48 h的肌内脂肪细胞中表达最高;4)过表达山羊APOA 4基因后与对照组相比较,发现肌内脂肪细胞脂滴积聚减少,脂肪分化标志基因C/EBPα、PPARγ表达极显著下调(P<0.01),SREBP1、C/EBPβ表达水平显著下调(P<0.05)。脂代谢标志基因AP2、LPL显著下调(P<0.05)。综合形态学染色和分子生物学结果,山羊APOA 4基因可能通过抑制分化标志基因C/EBPα、PPARγ、SREBP1、C/EBPβ以及脂代谢标志基因AP2、LPL的表达,进而抑制肌内脂肪细胞的分化和脂滴积聚,提示过表达山羊APOA 4基因抑制肌内脂肪细胞分化。 展开更多

关键词 山羊 APOA 4 肌内脂肪细胞 过表达 细胞分化

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干扰Smad3促进山羊脂肪细胞分化 被引量：2

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作者 崔胜 林亚秋 +2 位作者 许晴 朱江江 王永 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期475-489,共15页

旨在克隆山羊Smad3的基础上,明确其组织和细胞表达谱,最终阐明干扰Smad3基因对山羊肌内和皮下脂肪细胞分化的影响。本研究选用5只体况良好的1周龄简州大耳羊,空腹24 h后屠宰并采集相应组织和细胞进行试验。利用RT-PCR技术克隆山羊Smad3... 旨在克隆山羊Smad3的基础上,明确其组织和细胞表达谱,最终阐明干扰Smad3基因对山羊肌内和皮下脂肪细胞分化的影响。本研究选用5只体况良好的1周龄简州大耳羊,空腹24 h后屠宰并采集相应组织和细胞进行试验。利用RT-PCR技术克隆山羊Smad3基因cDNA区序列并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)技术检测Smad3基因的组织和细胞时序表达水平;并且合成靶向Smad3的siRNA,采用油红O染色从形态学上明确干扰Smad3对山羊前体脂肪细胞成脂分化的影响,利用qPCR检测干扰Smad3对脂肪细胞分化标志基因C/EBPα、C/EBPβ、LPL、SREBP1、AP2、PPARγ、Pref-1、KLF3、KLF4、KLF6、KLF7、KLF8、KLF9、KLF10和KLF15以及Smads相关基因Smad2、Smad4、Smad7和TGF-β1基因mRNA表达水平的影响,探讨可能的作用机制。结果,获得山羊Smad3基因1 449 bp,其中CDS区序列为1 278 bp,编码425个氨基酸;Smad3在山羊各组织中具有广泛表达特性,且在肾脏中的表达水平最高(P<0.01);Smad3均在山羊肌内和皮下两种脂肪细胞诱导分化的36 h表达量最低,极显著低于在未分化前体脂肪细胞中的表达丰度(P<0.01);干扰Smad3后发现显著促进了山羊肌内和皮下脂肪细胞中脂滴的聚集,且脂肪细胞分化标志基因、KLF3、KLF4、KLF8、KLF9、KLF10和KLF15的表达水平显著上升(P<0.05),Pref-1的相对表达水平极显著下降(P<0.01),同时干扰Smad3基因下调了Smad2、Smad4和Smad7基因的相对表达水平(P<0.05)。研究结果指出,干扰Smad3促进山羊脂肪细胞分化,且可能通过调控脂肪细胞分化标志基因C/EBPα、C/EBPβ、LPL、SREBP1、AP2、Pref-1、KLF3、KLF4、KLF8、KLF9、KLF10和KLF15等及协同Smad2、Smad4和Smad7的表达来实现的。 展开更多

关键词 山羊 SMAD3 基因克隆 RNA干扰 肌内脂肪细胞 皮下脂肪细胞

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基于E2蛋白BVDV-1病毒样颗粒的构建及对小鼠的免疫效力评估 被引量：3

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作者 张家祺 贾浠宁 +4 位作者 周群 宋鑫 朱晨曦 李格格 张斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期5143-5153,共11页

本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)E2病毒样颗粒(VLPs),并测定其对小鼠的免疫效力。选用BVDV-1 SWU-Z6株的E 2基因序列为模板,针对昆虫细胞密码子偏嗜性优化合成E 2基因,利用昆虫细胞-杆状病毒表达... 本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)E2病毒样颗粒(VLPs),并测定其对小鼠的免疫效力。选用BVDV-1 SWU-Z6株的E 2基因序列为模板,针对昆虫细胞密码子偏嗜性优化合成E 2基因,利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备BVDV-1 E2 VLPs。采用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot验证E2蛋白在SF9细胞中的表达,通过电镜鉴定BVDV-1 E2 VLPs的组装。对获得的VLPs进行超离纯化,使用不同剂量的VLPs添加MF59佐剂和CpG-ODN免疫增强剂肌注免疫小鼠,同时设立BVDV商业灭活苗组和PBS空白对照组。二免4周后选用BVDV-1 SWU-Z6毒株以灌胃途径对小鼠进行攻毒,通过小鼠体重变化以及粪便中的病毒载量来评估BVDV-1 E2 VLPs的免疫保护效果。经酶切鉴定和测序验证表明,优化后的E 2基因已正确克隆至杆状病毒穿梭载体pFast Dual中,并获得重组质粒pFast Dual BVDV-1 E2,将重组质粒转化到DH10.Bac感受态细胞经过蓝白斑筛选获得重组杆粒Bacmid-BVDV-1 E2,将重组杆粒转染至SF9细胞,获得重组杆状病毒Baculo-BVDV-1 E2。电镜下观察可见大量直径在80~100 nm的BVDV病毒样颗粒,IFA和Western blot结果证实重组杆状病毒能够正确表达E2蛋白,并具有良好的生物学活性。BVDV-1 E2 VLPs 50μg组小鼠首免2周时ELSIA抗体效价约为1∶10000,加强免疫2周后抗体效价达到1∶100000。攻毒保护试验结果表明,免疫组小鼠在攻毒后第7天表现出体重下降,而后开始回升;在攻毒后第10天采集粪便没有检测到病毒拷贝。与非免疫组小鼠相对比,BVDV-1 E2 VLPs 50μg剂量两次免疫后阻止了因病毒感染而导致体重下降以及消化道内病毒的复制。研究中成功制备了BVDV-1 E2 VLPs,能诱导机体产生较强的体液免疫反应,可使小鼠获得抵抗BVDV-1 SWU-Z6毒株感染的免疫保护力。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 杆状病毒 病毒样颗粒 免疫原性

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山羊RPL26基因生物信息学分析及对肌内脂肪细胞分化的影响 被引量：1

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作者 张浩 王永 +5 位作者 李艳艳 罗成 李鑫 李志雄 朱江江 林亚秋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期1064-1076,共13页

旨在克隆山羊RPL26基因序列并对其在山羊各组织中的表达情况和对山羊脂肪细胞分化的调控作用进行探究。本研究以1周岁简州大耳羊公羊作为试验对象(健康生长状态良好,体重约50 kg,n=3),利用RT-PCR等方法克隆RPL26序列,对基因及蛋白质序... 旨在克隆山羊RPL26基因序列并对其在山羊各组织中的表达情况和对山羊脂肪细胞分化的调控作用进行探究。本研究以1周岁简州大耳羊公羊作为试验对象(健康生长状态良好,体重约50 kg,n=3),利用RT-PCR等方法克隆RPL26序列,对基因及蛋白质序列进行生物信息学分析;以山羊各组织cDNA为模板,利用qPCR方法构建组织表达谱;利用双酶切方法构建RPL26过表达载体,通过脂质体转染在山羊肌内脂肪细胞中过表达RPL26,诱导分化后利用油红O染色和Bodipy染色观察细胞形态学变化,qPCR检测过表达效率及成脂相关基因的表达情况,以阐明其对肌内脂肪细胞分化的影响。结果表明,克隆获得山羊RPL26序列544 bp,CDS区为438 bp,编码蛋白质为带负电的不稳定亲水性蛋白质,主要定位于细胞核。RPL26在山羊各组织广泛表达,其中以腹部皮下脂肪和背部皮下脂肪表达量较高,极显著高于其他组织(P<0.01)。在山羊肌内脂肪细胞中过表达RPL26,肌内脂肪细胞的脂滴明显增多,油红O染色OD值极显著上升;qPCR结果显示,Pref1表达水平极显著下降(P<0.01),PPARγ等成脂标志基因及LPL等脂代谢标志基因的表达都极显著上升(P<0.01)。本研究克隆获得了山羊RPL26序列544 bp,CDS区为438 bp,在腹部皮下脂肪中表达量最高,RPL26对山羊肌内前体脂肪细胞的分化有着正向调控作用。 展开更多

关键词 山羊 核糖体蛋白 克隆 肌内脂肪细胞 细胞分化

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