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两种诊断制品对临床样品中布鲁氏菌抗体的检测比较 被引量：6
1
作者 朱绍辉 宫枫举 +3 位作者 邵钰 张如民 邵卫星 孙学强 《中国动物检疫》 CAS 2018年第11期92-95,共4页
本研究以国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T 18646-2018)中的试管凝集试验方法为确诊金标准,对353份临床牛、羊和猪血清样品进行确诊,然后分别采用虎红平板凝集试验抗原和抗体检测试纸条,对该353份临床血清进行检测,比较两种诊... 本研究以国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T 18646-2018)中的试管凝集试验方法为确诊金标准,对353份临床牛、羊和猪血清样品进行确诊,然后分别采用虎红平板凝集试验抗原和抗体检测试纸条,对该353份临床血清进行检测,比较两种诊断制品在布鲁氏菌病初筛中的差异。经统计分析发现,虎红平板凝集试验抗原敏感性为100%(23/23),特异性为97.88%(323/330),与确诊结果间的Kappa值为0.86;布鲁氏菌抗体检测试纸条敏感性为100%(23/23),特异性为99.39%(328/330),与确诊结果间的Kappa值为0.95,两种方法的重复性试验结果均一致。试验结果证明,布鲁氏菌抗体检测试纸条和布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原都能满足布鲁氏菌病初筛的需求;由于布鲁氏菌抗体检测试纸条的储存、运输和操作的便捷性,在部分地区或特殊环境下可替代布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原用于布鲁氏菌病初筛。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 平板凝集 试纸条 比较
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三种感染动物阳性血清与口蹄疫病毒重组非结构蛋白的反应原性 被引量：2
2
作者 孙学强 邵卫星 +5 位作者 张如民 南文龙 张兴进 宫枫举 张秀娟 刘爽 《中国动物检疫》 CAS 2017年第7期92-95,107,共5页
本试验通过生物信息学技术比对分析GenBank中口蹄疫病毒(A型、O型和亚洲1型)非结构蛋白的保守序列,根据大肠杆菌密码子偏好性,优化合成了非结构蛋白基因,经过测序和转化,筛选到能够表达重组非结构蛋白的阳性重组菌株。经过Western-blot... 本试验通过生物信息学技术比对分析GenBank中口蹄疫病毒(A型、O型和亚洲1型)非结构蛋白的保守序列,根据大肠杆菌密码子偏好性,优化合成了非结构蛋白基因,经过测序和转化,筛选到能够表达重组非结构蛋白的阳性重组菌株。经过Western-blot试验,证明表达的重组非结构蛋白能分别与口蹄疫病毒感染的牛、羊和猪阳性血清发生特异性反应。该重组蛋白待进一步验证后,可用于口蹄疫病毒感染动物的鉴别检测试剂盒研究。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 感染血清 重组非结构蛋白 反应原性
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双点突变对猪链球菌2型溶血素活性的影响
3
作者 刘爽 张秀娟 +4 位作者 张兴进 宫枫举 潘子豪 马喆 孙学强 《中国动物检疫》 CAS 2017年第9期87-91,共5页
猪链球菌2型作为一种人兽共患病病原,日益受到关注。而溶血素是其分泌的外毒素,是公认的重要毒力因子之一,具有良好的免疫原性。本试验通过PCR方法获得猪链球菌2型野生型溶血素基因sly和463、464双点突变的溶血素突变体基因slym。将sly... 猪链球菌2型作为一种人兽共患病病原,日益受到关注。而溶血素是其分泌的外毒素,是公认的重要毒力因子之一,具有良好的免疫原性。本试验通过PCR方法获得猪链球菌2型野生型溶血素基因sly和463、464双点突变的溶血素突变体基因slym。将sly和slym克隆至表达载体,构建了2个重组载体并在大肠杆菌中表达了野生型溶血素rSLY和突变型溶血素rSLYm。经过蛋白杂交试验,证明表达的rSLY和rSLYm与提取的猪链球菌的天然野生型SLY分子量完全一致。以提取的野生型SLY为对照,通过溶血试验证明,突变型溶血素rSLYm失去了溶血活性;通过接种PK15、RK13、SUVEC细胞单层,证明突变型溶血素rSLYm失去细胞毒性;通过小鼠试验,证明突变型SLYm对小鼠没有毒力。本试验通过溶血试验、细胞接种和小鼠实验,证明双点突变灭活了野生型溶血素的溶血活性、细胞毒性和小鼠毒力。该溶血素突变体经免疫实验证实后,可作为猪链球菌2型亚单位疫苗的候选抗原。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶血素 突变 溶血活性 细胞毒性
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以4单位病毒为标准物质定量新城疫病毒RT-PCR检测试剂盒的最低检出量
4
作者 刘爽 张如民 +6 位作者 王晓东 张兴进 张浩 宫枫举 邵钰 邵卫星 孙学强 《中国动物检疫》 CAS 2017年第6期94-97,共4页
本实验首次以4单位病毒为标准物质,定量新城疫病毒RT-PCR检测试剂盒的最低检出量,用新城疫病毒La Sota株接种SPF鸡胚,制备尿囊液,经血凝试验测定滴度为27;将尿囊液倍比稀释后,提取各稀释度样品核酸,用新城疫病毒RT-PCR检测试剂盒进行扩... 本实验首次以4单位病毒为标准物质,定量新城疫病毒RT-PCR检测试剂盒的最低检出量,用新城疫病毒La Sota株接种SPF鸡胚,制备尿囊液,经血凝试验测定滴度为27;将尿囊液倍比稀释后,提取各稀释度样品核酸,用新城疫病毒RT-PCR检测试剂盒进行扩增,结果多数样品均可检出特定长度的核酸。用该尿囊液制备4单位病毒为标准物质,倍比稀释后,提取各稀释度病毒核酸,对新城疫病毒RT-PCR检测试剂盒的最低检出量进行定量,结果表明该试剂盒的最低检出量为4单位病毒的1:32倍。该方法对于新城疫病毒RT-PCR检测试剂盒等分子生物学诊断试剂的研发、生产、质量控制和比对具有参考意义。 展开更多
关键词 新城疫病毒 RT-PCR 4单位病毒 标准物质 最低检出量
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非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的原核表达与反应原性鉴定 被引量：6
5
作者 官丽娟 邵钰 +7 位作者 任伟杰 宫枫举 韩同福 邹艳丽 孙学强 吴晓东 张志 黄保续 《中国动物检疫》 CAS 2019年第12期63-67,共5页
p54蛋白为非洲猪瘟病毒(ASFV)的主要结构蛋白之一,参与病毒对靶细胞的吸附与进入。为深入研究p54结构蛋白的抗原性,根据GenBank序列号(MK128995)对应的E183L基因序列,设计1对特异性引物扩增其整个CDS区,并克隆至pET-30a(+)载体,构建了表... p54蛋白为非洲猪瘟病毒(ASFV)的主要结构蛋白之一,参与病毒对靶细胞的吸附与进入。为深入研究p54结构蛋白的抗原性,根据GenBank序列号(MK128995)对应的E183L基因序列,设计1对特异性引物扩增其整个CDS区,并克隆至pET-30a(+)载体,构建了表达p54蛋白的重组质粒pET-30a(+)-p54。用BL21(DE3)转化该质粒,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳,可见重组质粒表达出1条分子量约为20 kDa的特异性条带,且重组表达蛋白以融合表达蛋白形式存在于上清。进一步通过His亲和层析法纯化目的蛋白,用ASFV阳性血清进行蛋白质免疫印迹反应,发现表达的重组p54蛋白能与ASFV阳性血清产生特异性反应,表明p54蛋白表达成功。本研究为ASFV抗体ELISA检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 结构蛋白 p54蛋白 表达
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基于全面质量管理提升实验室非洲猪瘟病毒检测能力 被引量：10
6
作者 张志 葛栋 +2 位作者 李翠翠 宫枫举 孙学强 《中国动物检疫》 CAS 2021年第1期65-68,共4页
非洲猪瘟已经成为我国养猪业防控的头号疫病,而荧光PCR方法是广泛用于各实验室非洲猪瘟病毒检测的首选方法。为提高相关实验室非洲猪瘟病毒荧光PCR检测的准确性,针对非洲猪瘟病毒荧光PCR检测过程可能存在的“假阳性”和“假阴性”现象,... 非洲猪瘟已经成为我国养猪业防控的头号疫病,而荧光PCR方法是广泛用于各实验室非洲猪瘟病毒检测的首选方法。为提高相关实验室非洲猪瘟病毒荧光PCR检测的准确性,针对非洲猪瘟病毒荧光PCR检测过程可能存在的“假阳性”和“假阴性”现象,从全面质量管理理论的“人、机、料、法、环”等具体方面,详细阐述了这些现象产生的原因及改进措施或解决方案,从而为我国各级兽医实验室、屠宰场、养殖场、第三方检测机构等开展非洲猪瘟病毒检测提供参考,同时也为其他疫病病原的荧光PCR检测提供借鉴。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 荧光PCR 检测能力 兽医实验室
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丁达尔效应定位伪狂犬病病毒密度梯度离心区带 被引量：2
7
作者 齐安生 宫枫举 +4 位作者 刘爽 凌红丽 张兴进 邵卫星 孙学强 《中国动物检疫》 CAS 2018年第4期92-95,共4页
在病毒密度梯度离心纯化过程中,利用光对不同大小粒子发生散射的强弱,即丁达尔效应,定位超速离心后形成的离心区带;以伪狂犬病毒为研究对象,以不连续梯度蔗糖为介质,超速离心后,通过光束对离心区带生的丁达尔效应进行精确分层取样,并对... 在病毒密度梯度离心纯化过程中,利用光对不同大小粒子发生散射的强弱,即丁达尔效应,定位超速离心后形成的离心区带;以伪狂犬病毒为研究对象,以不连续梯度蔗糖为介质,超速离心后,通过光束对离心区带生的丁达尔效应进行精确分层取样,并对处理后的离心区带样品分别进行透射电镜观察,发现区带3中存在大量符合伪狂犬病病毒形态学特征的病毒颗粒。本研究将光学物理现象与经典病毒纯化方法相结合,大大提高了病毒纯化成功率,对密度梯度离心法提纯各种病毒或者蛋白的实验操作均有指导意义。 展开更多
关键词 丁达尔效应 伪狂犬病毒 密度梯度 离心
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口蹄疫病毒A型竞争ELISA抗体检测试剂盒在流行病学调查中的应用 被引量：3
8
作者 陈小丽 邵钰 +4 位作者 仲焕香 宫枫举 汤荣福 孙学强 张志 《中国动物检疫》 CAS 2021年第2期104-107,共4页
为评价口蹄疫病毒A型竞争ELISA(cELISA)抗体检测试剂盒在流行病学调查中的应用前景,对2017年从福建省三明市采集的336份黄牛、奶牛、羊和猪血清样品,用A型cELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测。结果显示,92份黄牛血清、92份羊血清、92份... 为评价口蹄疫病毒A型竞争ELISA(cELISA)抗体检测试剂盒在流行病学调查中的应用前景,对2017年从福建省三明市采集的336份黄牛、奶牛、羊和猪血清样品,用A型cELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测。结果显示,92份黄牛血清、92份羊血清、92份猪血清、60份奶牛血清的A型抗体阳性率分别为13.04%、11.96%、20.65%、86.67%。从上述4种血清中,各挑选10份血清(阴性、阳性各5份)共40份,采用口蹄疫病毒液相阻断ELISA(LPB-ELISA)抗体检测试剂盒进行验证。结果显示:cELISA检测为阳性的20份血清中,用LPB-ELISA检出阳性19份;cELISA检测为阴性的20份血清中,用LPB-ELISA检出阴性17份;两种方法的κ值为0.8,总符合率为90.00%。结果表明,A型cELISA试剂盒与LPB-ELISA试剂盒的符合率和一致性均较高,可用于口蹄疫流行病学调查和血清学监测。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒抗体 A型 竞争ELISA
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信号肽对溶血素在大肠杆菌中跨膜转运的影响 被引量：1
9
作者 齐安生 张秀娟 +4 位作者 宫枫举 张兴进 马喆 潘子豪 孙学强 《中国动物检疫》 CAS 2018年第3期67-71,共5页
信号肽在引导外源蛋白的跨膜转运过程中具有重要作用。本试验通过PCR方法获得带有信号肽序列和不带有信号肽序列的溶血素基因,构建表达载体在大肠杆菌中进行诱导表达。经过溶血试验和免疫印迹试验证明缺失了信号肽的重组溶血素不能被跨... 信号肽在引导外源蛋白的跨膜转运过程中具有重要作用。本试验通过PCR方法获得带有信号肽序列和不带有信号肽序列的溶血素基因,构建表达载体在大肠杆菌中进行诱导表达。经过溶血试验和免疫印迹试验证明缺失了信号肽的重组溶血素不能被跨膜转运至细胞外;带有信号肽的重组溶血素能够跨膜转运大肠杆菌细胞外。本试验为猪链球菌2型基因缺失弱毒疫苗的研究、细菌信号肽以及基因工程重组蛋白的可溶性表达进行了有益探索。 展开更多
关键词 溶血素 信号肽 大肠杆菌 跨膜转运
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布鲁氏菌抗体检测试纸条的研制和初步比较 被引量：4
10
作者 齐安生 邵钰 +4 位作者 宫枫举 张兴进 张如民 朱绍辉 孙学强 《中国动物检疫》 CAS 2018年第10期78-82,共5页
本试验利用胶体金免疫层析技术原理,研制了布鲁氏菌抗体检测试纸条,并以布鲁氏菌阳性血清国家标准品进行了敏感性试验,确定了最低检出量,同时与有可能存在交叉反应的血清和阴性血清进行了特异性试验;然后将保存不同时间的试纸条在进行... 本试验利用胶体金免疫层析技术原理,研制了布鲁氏菌抗体检测试纸条,并以布鲁氏菌阳性血清国家标准品进行了敏感性试验,确定了最低检出量,同时与有可能存在交叉反应的血清和阴性血清进行了特异性试验;然后将保存不同时间的试纸条在进行了敏感性和特异性试验,证明其稳定期可以达到15个月。选择临床牛羊血清30份,利用该试纸条与布鲁氏菌病虎红平板试验抗原进行同步检测,发现两种试剂的检测符合率为98%。试验证明,所研制的布鲁氏菌抗体检测试纸条敏感性高、特异性强、稳定期长。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 脂多糖 胶体金 免疫层析 金黄色葡萄球菌A蛋白
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