鸡源产气荚膜梭菌分离株的生物学特性鉴定 被引量：6

1

作者 王启琛 邹开宇 +4 位作者 王守春 王平 杜菲 徐守振 尹燕博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第11期16-19,I0002,共5页

为了解山东地区鸡源产气荚膜梭菌的生物学特性,对送检的3份疑似鸡坏死性肠炎病料进行了分离培养、生化鉴定和分子分型;分析了α毒素基因序列并构建了16S rRNA的系统进化树;通过药敏试验和攻毒试验了解其耐药性和毒力。结果显示,3株分离... 为了解山东地区鸡源产气荚膜梭菌的生物学特性,对送检的3份疑似鸡坏死性肠炎病料进行了分离培养、生化鉴定和分子分型;分析了α毒素基因序列并构建了16S rRNA的系统进化树;通过药敏试验和攻毒试验了解其耐药性和毒力。结果显示,3株分离株(AQ01、KD02、TA03)经生化鉴定和多重PCR分型均为A型产气荚膜梭菌,α毒素氨基酸间的同源性为98.7%~99.5%,与其他分离株和参考株序列相比,TA03株362位点由Pro突变为Ser,KD02株162位点由Tyr突变为His、137位点Gln缺失。16S rRNA系统进化树分析显示,AQ01株和KD02株同属一分支,亲缘关系较近。三株分离株对头孢唑啉、头孢曲松、头孢呋辛、氨苄青霉素、哌拉西林均敏感。以8×10~9CFU/mL口腔灌服攻毒21日龄SPF鸡(0.5 mL/只),TA03株、AQ01株、KD02株死亡率分别为100%、60%、10%,TA03株毒力最强,病死鸡剖检可见坏死性肠炎的典型病变。本试验对山东地区鸡源产气荚膜梭菌的生物学特性有了初步了解,可为鸡坏死性肠炎的诊断和预防提供依据。 展开更多

关键词 鸡 产气荚膜梭菌 多重PCR Α毒素 16S RRNA

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PRRSV的分离鉴定及与其他5种猪病毒混合感染情况调查 被引量：12

2

作者 李吉达 尹燕博 +5 位作者 徐守振 王建琳 王光 刘兴彩 韩丽敏 郭妍妍 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第3期48-54,共7页

应用PCR检测方法,对来自山东、河北、河南等10省44份表现高热病症状的临床发病猪病料,进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒(PCV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪巨细胞病病毒(PCMV)和猪流感病毒(SIV)6种病原的检... 应用PCR检测方法,对来自山东、河北、河南等10省44份表现高热病症状的临床发病猪病料,进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒(PCV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪巨细胞病病毒(PCMV)和猪流感病毒(SIV)6种病原的检测。结果发现,6种病原中PRRSV的检出率最高为72.7%;单纯PRRSV感染的比例仅为2.27%。根据PCR检测结果分析PRRSV与其他5种病毒的混合感染情况,结果发现两重感染中PRRSV/PRV并发率最高(62.50%),三重感染中PRRSV/PRV/PCV并发率最高(43.75%),四重感染中PRRSV/PRV/PCV/PCMV并发率最高(28.125%),五重感染中PRRSV/PCV/PCMV/CSFV/PRV并发率最高(15.625%),PRRSV/PCV/PCMV/CSFV/PRV/SIV六重感染的比例为9.375%。将PRRSV阳性病料接种猪肺巨噬细胞和Marc-145细胞,共分离到9株PRRSV,分离率为28.1%。结果表明,发病猪多为感染PRRSV的同时混合感染其他多种病毒,为制定合理的免疫程序预防猪场各种疾病提供科学依据。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 混合感染

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猪巨细胞病毒PCR诊断技术的建立 被引量：8

3

作者 刘兴彩 尹燕博 +3 位作者 张毅 徐守振 韩丽敏 王新 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第12期34-35,共2页

关键词 巨细胞病毒 仔猪 诊断技术 PCR 异种器官移植 疱疹病毒 胚胎死亡 发育不良

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63株H9N2亚型禽流感病毒NA基因序列分析 被引量：6

4

作者 王守春 尹燕博 +4 位作者 王晓红 李海英 王建琳 张毅 郭妍妍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期297-305,共9页

为了从分子水平上掌握我国H9N2亚型禽流感病毒NA基因变异情况和流行规律,作者汇集了我国部分省市的63株H9N2亚型禽流感毒株,采用RT-PCR技术对其NA基因进行扩增、克隆和测序,并对所得序列进行同源性和进化分析。结果显示分离株核苷酸同... 为了从分子水平上掌握我国H9N2亚型禽流感病毒NA基因变异情况和流行规律,作者汇集了我国部分省市的63株H9N2亚型禽流感毒株,采用RT-PCR技术对其NA基因进行扩增、克隆和测序,并对所得序列进行同源性和进化分析。结果显示分离株核苷酸同源性在87.4%~99.5%;52株NA蛋白颈部63—65位点缺失了T、E、I 3个氨基酸,属于Y280-like分支,11株没有发生缺失,属于G9-like分支,没有发现G1-like分支和Y439-like分支的NA基因毒株;唾液酸结合位点（HB）和抗原决定簇的氨基酸发生了明显的变异;酶活性位点处的氨基酸非常保守,没有发生与抗神经氨酸酶抑制剂奥塞米韦和扎那米韦相关的氨基酸突变;36/63毒株失去了402位点处的潜在N-糖基化位点;而28/63毒株新出现了264位点处的潜在N-糖基化位点。本研究提示目前中国大陆地区商业鸡群流行的H9N2亚型禽流感病毒NA基因分为2个差异较大分支——Y280-like分支和G9-like分支,而Y280-like分支仍是我国H9N2亚型禽流感病毒流行的主要类型。 展开更多

关键词 禽流感 H9N2 神经氨酸酶 遗传进化分析

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胶东地区规模鸡场3种主要病毒感染情况的调查 被引量：9

5

作者 徐守振 王光 +1 位作者 郭艳艳 尹燕博 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第2期78-83,共6页

应用RT-PCR对山东青岛、潍坊和烟台3个地区2008年1月至2009年6月送检的1837份具有呼吸道症状鸡的病料进行新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和H9亚型禽流感病毒(AIV)3种主要病毒感染情况的调查。调查显示,3个地区3种病毒的感染... 应用RT-PCR对山东青岛、潍坊和烟台3个地区2008年1月至2009年6月送检的1837份具有呼吸道症状鸡的病料进行新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和H9亚型禽流感病毒(AIV)3种主要病毒感染情况的调查。调查显示,3个地区3种病毒的感染率可达65.76%,其中NDV、IBV和AIV(H9)的平均阳性率分别为12.36%、12.30%和41.10%。青岛地区NDV、AIV(H9)和IBV的阳性率最高,分别为13.45%、17.37%和44.08%。2008年下半年较2008年上半年3种病毒的检出率均有所升高,以AIV(H9)升高最为显著;2009年上半年较2008年上半年AIV(H9)阳性率上升最为明显。3种病毒混合感染的阳性率可达11.00%,以IBV+AIV(H9)和NDV+AIV(H9)二重混合感染临床最为常见。表明山东省胶东地区NDV、IBV和AIV(H9)的感染情况比较普遍,且存在一定程度的混合感染。本调查结果为山东省制定规模鸡场3种疫病的防控措施提供了科学资料。 展开更多

关键词 RT—PCR NDV IBV AIV 感染 调查

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CDV、CPV和CPIV多重PCR检测方法的建立 被引量：8

6

作者 康泰 毕玉敏 +3 位作者 陈欣 孙忠晟 王祖荣 尹燕博 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第9期62-65,共4页

为了建立一种快速诊断犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的多重PCR方法,参照GenBank中的犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬副流感病毒(CPIV)基因序列,设计了3对引物分别用于特异扩增犬瘟热病毒F基因、犬细小病毒VP2基因和犬副... 为了建立一种快速诊断犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的多重PCR方法,参照GenBank中的犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬副流感病毒(CPIV)基因序列,设计了3对引物分别用于特异扩增犬瘟热病毒F基因、犬细小病毒VP2基因和犬副流感病毒F基因上的目的片段。通过优化反应条件,建立同时扩增CDV(740bp)、CPV(419bp)和CPIV(559bp)的多重PCR方法。结果表明特异性和敏感性良好,对CDV、CPV、CPIV 3种病毒的最低核酸检测量为1ng/μL。临床样品的多重PCR检测结果表明,建立的多重PCR方法能够对CDV、CPV、CPIV单个感染或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。 展开更多

关键词 多重PCR 犬瘟热病毒 犬细小病毒 犬副流感病毒

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2007-2008年同一地点H9N2亚型禽流感病毒连续分离毒株HA基因序列分析 被引量：5

7

作者 张毅 尹燕博 +4 位作者 韩丽敏 张巧燕 王新 王建琳 崔尚金 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第5期18-20,共3页

关键词 H9N2亚型禽流感病毒 分离毒株 基因序列分析 HA 地点 发病鸡群 病原鉴定 禽流感疫情

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引起幼貂大量死亡的肺炎克雷伯菌的分离和鉴定 被引量：6

8

作者 李超 王玉英 +4 位作者 王冬冬 范丹丹 王平 纪鸿翔 尹燕博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第11期27-29,I0002,共4页

采用西蒙式枸橼酸盐琼脂培养基从山东威海地区肺出血死亡幼貂的肺脏和肝脏中分离到1株细菌,对所分离的细菌进行形态特征、理化性质、16S rRNA测序鉴定,并对该分离菌进行了药敏试验和人工感染试验。结果显示,该菌16S rRNA序列与GeneBank... 采用西蒙式枸橼酸盐琼脂培养基从山东威海地区肺出血死亡幼貂的肺脏和肝脏中分离到1株细菌,对所分离的细菌进行形态特征、理化性质、16S rRNA测序鉴定,并对该分离菌进行了药敏试验和人工感染试验。结果显示,该菌16S rRNA序列与GeneBank登录号为CP006648的肺炎克雷伯菌16S rRNA序列同源性为95%,分离菌具有高度的耐药性,对小鼠具有较强致病作用,并可复制出与水貂类似的病理变化,由此推断肺炎克雷伯菌是导致幼貂大量死亡的主要致病菌。 展开更多

关键词 水貂 肺炎克雷伯菌 分离鉴定

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动物疫苗中常用抗原灭活剂的研究进展 被引量：40

9

作者 徐守振 尹燕博 王新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第9期162-167,共6页

作者介绍了当前动物灭活疫苗的灭活类型,对60Coγ射线、甲醛、β-丙内酯(BPL)、N-乙酰乙烯亚胺(AEI)、二乙烯亚胺(BEI)和盐酸聚六亚甲基胍(PHMG)等几种常用抗原灭活剂的特点、灭活机制、研究应用现状进行了综述,并对抗原灭活剂的发展方... 作者介绍了当前动物灭活疫苗的灭活类型,对60Coγ射线、甲醛、β-丙内酯(BPL)、N-乙酰乙烯亚胺(AEI)、二乙烯亚胺(BEI)和盐酸聚六亚甲基胍(PHMG)等几种常用抗原灭活剂的特点、灭活机制、研究应用现状进行了综述,并对抗原灭活剂的发展方向进行了展望。 展开更多

关键词 疫苗 灭活剂 进展

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2010—2014年山东H9N2亚型禽流感病毒分离鉴定及HA和NA基因序列分析 被引量：3

10

作者 王冬冬 张毅 +10 位作者 侯广宇 刘永举 刘朔 蒋文明 李金平 于建敏 范丹丹 陈文雅 王守春 尹燕博 陈继明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期852-856,共5页

旨在了解山东地区H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的流行和遗传变异情况,为该地区H9N2亚型禽流感的防制提供依据。通过鸡胚接种的方法从山东省分离到1 296株H9N2AIV,并选取40株对其进行HA和NA基因的扩增、测序及遗传进化分析。结果显示,2013年H... 旨在了解山东地区H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的流行和遗传变异情况,为该地区H9N2亚型禽流感的防制提供依据。通过鸡胚接种的方法从山东省分离到1 296株H9N2AIV,并选取40株对其进行HA和NA基因的扩增、测序及遗传进化分析。结果显示,2013年H9N2AIV的分离率最高,达42.30%;40株病毒的HA和NA的核苷酸序列同源性及推导的氨基酸相似性均在90%以上;HA裂解位点序列为PSRSSR↓GLF,NA颈部缺失3个氨基酸;HA和NA均存在糖基化位点的缺失和新的糖基化位点出现;大部分毒株发生了易于感染人型受体的突变;演化分析表明40株病毒的HA和NA基因均属于Y280-like亚分支。结果提示,H9N2AIV在山东省各地区普遍流行且在2013年达到高峰,所有毒株均符合低致病性禽流感病毒的分子特征,并且具有结合哺乳动物唾液腺受体的能力,因此应密切关注H9N2病原出现的新变化,制定相应的防控措施。 展开更多

关键词 H9N2 禽流感病毒 HA NA 序列分析

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鸡包涵体肝炎的病原检测及病理学观察 被引量：3

11

作者 李海英 尹燕博 +6 位作者 王建琳 郭妍妍 王晓红 王守春 张毅 王光 李吉达 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第7期55-60,共6页

2007年和2008年山东某鸡场相继暴发某疫病,为了确定病原和了解患病鸡死亡原因,分别对患病鸡进行了PCR检测、动物回归试验,并同时进行了病理学观察。结果表明,光镜下肝脏严重变性、坏死,肝细胞核内形成嗜酸性或嗜碱性核内包涵体的特征性... 2007年和2008年山东某鸡场相继暴发某疫病,为了确定病原和了解患病鸡死亡原因,分别对患病鸡进行了PCR检测、动物回归试验,并同时进行了病理学观察。结果表明,光镜下肝脏严重变性、坏死,肝细胞核内形成嗜酸性或嗜碱性核内包涵体的特征性病变。电镜下也观察到大量呈典型的晶格状排列的禽腺病毒粒子。说明鸡包涵体肝炎过程中,肝脏和肾脏的严重损伤所引起的代谢紊乱,可能是患鸡死亡的直接或间接原因。 展开更多

关键词 鸡 包涵体肝炎 聚合酶链反应 六邻体蛋白基因 病理学观察

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四种不同灭活剂对新城疫病毒的灭活效果研究 被引量：10

12

作者 徐守振 王新 尹燕博 《中国家禽》 北大核心 2011年第14期15-19,共5页

为探索甲醛、β-丙内酯(BPL)、二乙烯亚胺(BEI)和盐酸聚六亚甲基胍(PHMG)对新城疫病毒(NDV)的最佳灭活条件,试验采用不同浓度梯度的甲醛、BPL、BEI和PHMG对NDV进行不同时间的灭活处理,通过血凝(HA)试验、无菌检验和灭活检验确定灭活效... 为探索甲醛、β-丙内酯(BPL)、二乙烯亚胺(BEI)和盐酸聚六亚甲基胍(PHMG)对新城疫病毒(NDV)的最佳灭活条件,试验采用不同浓度梯度的甲醛、BPL、BEI和PHMG对NDV进行不同时间的灭活处理,通过血凝(HA)试验、无菌检验和灭活检验确定灭活效果。结果显示,37℃下,NDV的最佳灭活条件为0.1%～0.2%的甲醛灭活22～24h、0.02%～0.025%的BPL灭活9～10h、2%～3%的PHMG灭活16～20h,该研究为筛选规模化生产ND疫苗所需的理想灭活剂提供了依据。 展开更多

关键词 新城疫病毒 甲醛 β-丙内酯 盐酸聚六亚甲基胍 二乙烯亚胺 灭活

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鸡J亚群禽白血病病毒与七种常见病毒混合感染的调查 被引量：3

13

作者 王林山 尹燕博 +4 位作者 徐守振 郭妍妍 吴珊珊 胡永新 张本清 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第11期111-116,共6页

应用PCR方法对2009年6月到2009年9月来自不同地区、不同品种、不同日龄的45个疑似感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的病鸡病料进行检测,同时对ALV-J与新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、H9N2亚型禽流... 应用PCR方法对2009年6月到2009年9月来自不同地区、不同品种、不同日龄的45个疑似感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的病鸡病料进行检测,同时对ALV-J与新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)、包涵体肝炎病毒(IB-HV)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)和呼肠病毒(REOV)等病毒的混合感染情况进行了调查。结果表明,采用ALV-J的特异性引物H5/H7,在45份送检病料中,有3份检出ALV-J,阳性率为6.67%。绝大多数病例检测出内源性禽白血病病毒,部分病例检测有其他7种病毒中的一种或几种。混合感染病例中以IBHV和IBV混合感染的比率较高,其中ALV-J与H9N2亚型AIV混合感染多见。 展开更多

关键词 J亚群禽白血病病毒 PCR 混合感染 调查

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临床病死犬细菌分离鉴定及耐药性分析 被引量：3

14

作者 李超 王作昭 +6 位作者 王玉英 康泰 项路娟 黄凯 纪鸿翔 杨宗统 尹燕博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第7期90-91,共2页

为更全面地掌握犬源细菌的流行及抗生素耐药情况,本试验对2012-2015年采集自某规模化养殖场的60余份病死犬样本进行细菌分离鉴定,并参考CLSI推荐的纸片扩散法检测了部分分离菌对21种抗菌药物的敏感性。结果显示,3年共计分离鉴定出28株... 为更全面地掌握犬源细菌的流行及抗生素耐药情况,本试验对2012-2015年采集自某规模化养殖场的60余份病死犬样本进行细菌分离鉴定,并参考CLSI推荐的纸片扩散法检测了部分分离菌对21种抗菌药物的敏感性。结果显示,3年共计分离鉴定出28株病原菌和条件致病菌,混合感染为犬细菌感染的主要形式;分离菌普遍呈多重耐药,以大肠杆菌耐药性最为严重。犬的细菌感染应在临床引起足够的重视,临床治疗应合理有效用药。 展开更多

关键词 犬源细菌 分离鉴定 耐药性

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SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法检测猪流感H3N2亚型病毒方法的建立 被引量：5

15

作者 孙忠晟 尹燕博 +1 位作者 王平 韩丽敏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第4期7-9,I0001,共4页

本试验针对H3N2亚型流感病毒神经氨酸酶基因建立SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR检测方法。根据GenBank上的SIV N2基因序列设计一对引物,扩增片段406bp。纯化扩增目的片段后连接pMD18-T载体中,命名为pMD18-TN2,转化入E.coli DH5α,测序正确作为... 本试验针对H3N2亚型流感病毒神经氨酸酶基因建立SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR检测方法。根据GenBank上的SIV N2基因序列设计一对引物,扩增片段406bp。纯化扩增目的片段后连接pMD18-T载体中,命名为pMD18-TN2,转化入E.coli DH5α,测序正确作为阳性模板,优化反应条件建立方法。此荧光PCR方法所能检测最低病毒含量为75copies/μL,拥有良好的特异性和重复性。此方法的建立将为流感病毒N2亚型神经氨酸酶基因定型检测提供一种有效方法。 展开更多

关键词 猪流感H3N2亚型 神经氨酸酶基因 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR

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2008年~2012年山东胶东鸡场NDVIBVAIV（H9）感染情况调查 被引量：3

16

作者 徐守振 郭妍妍 +2 位作者 卢春晓 韩丽敏 尹燕博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第9期12-14,17,共4页

为了解2008年1月～2012年6月山东胶东青岛、潍坊和烟台三地区新城疫病毒（NDV）、传染性支气管炎病毒（IBV）和H9亚型禽流感病毒（AIV（H9））的感染情况，采用RT—PCR对送检的5001份患有呼吸道症状的病料进行了检测。结果显示，3地区3... 为了解2008年1月～2012年6月山东胶东青岛、潍坊和烟台三地区新城疫病毒（NDV）、传染性支气管炎病毒（IBV）和H9亚型禽流感病毒（AIV（H9））的感染情况，采用RT—PCR对送检的5001份患有呼吸道症状的病料进行了检测。结果显示，3地区3种病毒的总阳性率为48．49％，其中AIV（H9）感染率最高，为26．15％。青岛地区NDV和IBV的阳性率均最高，分别为15．94％和11．63％，潍坊地区AIV（H9）阳性率最高（29．23％）。4年半间AIV（Hg）感染下降明显，但NDV近3年感染明显抬头。寒冷月份3种病毒感染较高，3月份NDV和AIV（H9）阳性率均最高，分别为21．07％和38．17％；10月份1BV阳性率最高为15．40％。3种病毒混合感染阳性率为6．66oA，以NDV＋AIV（H9）二重感染最常见（2．98％），NDV＋IBV＋AIV（H9）三重感染为0．40％。结果表明，山东胶东地区NDV、IBV和AIV（Hg）的感染情况较普遍，存在一定程度的混合感染，为有效防控山东省规模鸡场该3种主要疾病提供了依据。 展开更多

关键词 RT-PCR 感染 调查

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山东胶东地区规模鸡场三种主要病毒感染情况的调查 被引量：3

17

作者 徐守振 尹燕博 郭艳艳 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第S1期142-145,共4页

为了解2009下半年山东胶东地区规模化鸡场主要疫病的感染情况,应用RT-PCR技术对山东青岛、潍坊和烟台三地区送检的774份具有呼吸道症状的病鸡病料进行了新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和H9亚型禽流感病毒(AIV)3种主要病毒的... 为了解2009下半年山东胶东地区规模化鸡场主要疫病的感染情况,应用RT-PCR技术对山东青岛、潍坊和烟台三地区送检的774份具有呼吸道症状的病鸡病料进行了新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和H9亚型禽流感病毒(AIV)3种主要病毒的感染情况调查。调查结果显示,三个地区3种病毒的感染率为25.58%,NDV、IBV和AIV(H9)的阳性率分别为8.14%、11.37%和6.07%。青岛地区NDV、IBV的阳性率均最高,分别为12.47%、14.55%。2种病毒混合感染的阳性率达2.84%,以IBV+NDV二重混合感染临床最为常见。调查结果表明,山东省胶东地区NDV、IBV和AIV(H9)的感染情况比较普遍,且存在一定程度的混合感染,为有效预防和控制山东省规模鸡场该3种主要疫病提供了科学依据。 展开更多

关键词 新城疫病毒 传染性支气管炎病毒 H9亚型禽流感病毒 感染 调查

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间接ELISA检测猪流感抗体方法的建立及应用 被引量：3

18

作者 孙忠晟 尹燕博 +2 位作者 王平 陈桂来 张思娟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第1期78-80,共3页

近年来流感病毒已突破宿主限制,猪作为人与禽类流感病毒的中间宿主,更是有着不可忽视的作用,对猪流感病的预防和诊断就具有重要的公共卫生意义。而防治的关键需借助于准确的检测方法,

关键词 ELISA检测 猪流感 抗体方法 应用 间接 流感病毒 公共卫生意义 中间宿主

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猪巨细胞病毒gB基因的克隆与序列分析 被引量：1

19

作者 刘兴彩 尹燕博 +3 位作者 徐守振 李吉达 张毅 郭妍妍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第2期17-21,共5页

应用PCR方法,从郑州、福建、浙江金华和宁波猪肺脏中分别扩增出4段PCMV gB基因,并将其分别克隆入pMD18-T载体,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,将阳性克隆进行序列分析并构建系统进化树。序列分析表明,其gB基因全长为2 580bp,编码860个氨基酸,与P... 应用PCR方法,从郑州、福建、浙江金华和宁波猪肺脏中分别扩增出4段PCMV gB基因,并将其分别克隆入pMD18-T载体,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,将阳性克隆进行序列分析并构建系统进化树。序列分析表明,其gB基因全长为2 580bp,编码860个氨基酸,与PCMV其他序列相比,其同源性在96.1%～99.7%,与β疱疹病毒亚科中其他常见毒株同源性在25.9%～38.1%;推导的氨基酸序列,有11个半胱氨酸,17个潜在N-糖基化位点,其裂解位点是RYKR;系统进化树分析发现,推导的氨基酸序列出现两个分支,而且来自上述4个地区PCMV gB糖蛋白氨基酸序列处在不同的分支中。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 GB基因 克隆 序列分析

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鸡Ⅰ型IFN及TLR-3和TLR-7实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：1

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作者 曹志伟 孙忠晟 +2 位作者 郭学金 王建琳 尹燕博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第2期25-27,30,共4页

为检测鸡抗病毒相关基因在病毒感染过程中的动态变化规律,研究建立了鸡IFN-a、IFN-β、TLR-3和TLR-7的实时荧光定量RT-PCR的检测方法。根据GenBank提供的鸡IFN-α、IFN-β、FLR-3和TLR-7参考序列设计了相应的特异引物,用常规RT-PCR方法... 为检测鸡抗病毒相关基因在病毒感染过程中的动态变化规律,研究建立了鸡IFN-a、IFN-β、TLR-3和TLR-7的实时荧光定量RT-PCR的检测方法。根据GenBank提供的鸡IFN-α、IFN-β、FLR-3和TLR-7参考序列设计了相应的特异引物,用常规RT-PCR方法从鸡脾脏总RNA中扩增得到鸡相应基因。将其cDNA分别克隆到pMD19-T载体中进行测序鉴定,采用SYBR Green I染料法,建立标准曲线并分析其溶解曲线。结果表明,这4种基因的检测灵敏度可高达46 copies/μL,且具有良好的特异性和重复性。此检测方法的建立为动态定量检测及研究鸡IFN-α、IFN-β、TLR-3和TLR-7基因的表达变化提供了有效的手段。 展开更多

关键词 IFN-Α IFN-Β TLR-3 TLR-7 实时荧光定量PCR

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