数字PCR技术在动物疫苗研究中的应用前景 被引量：2

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作者 于晓璐 楚电峰 +2 位作者 夏娜 李振 孙化露 《中国动物检疫》 CAS 2022年第7期91-96,共6页

数字PCR(digital PCR,dPCR)技术是基于“有限稀释”和“泊松分布”原理迅速发展的第三代PCR技术,无需标准品即可实现样品的绝对定量,灵敏度高、操作简单,在疫病检测、转基因鉴定、食品检测等方面得到快速发展,而在动物疫苗研究领域也被... 数字PCR(digital PCR,dPCR)技术是基于“有限稀释”和“泊松分布”原理迅速发展的第三代PCR技术,无需标准品即可实现样品的绝对定量,灵敏度高、操作简单,在疫病检测、转基因鉴定、食品检测等方面得到快速发展,而在动物疫苗研究领域也被越来越多用于质控、筛查和定量。本文从动物疫苗研究的角度,阐述了数字PCR在动物疫苗基因变异检测、基因定量、效价测定、疫苗效果评价等方面的发展潜力。该技术将有助于解决动物疫苗研究过程中的病毒生长曲线和疫苗效价测定以及基因变异分析等重点难点问题,未来将成为疫苗研发的有力工具。 展开更多

关键词 数字PCR 基因变异检测 绝对定量 效价测定

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表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗在小鼠体内的存留时间分析 被引量：1

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作者 熊贝嘉 张会 +3 位作者 孙永科 范根成 张恒 杨玉艾 《动物医学进展》 北大核心 2019年第3期49-53,共5页

研究E0-E2基因和表达蛋白及抗体水平在小鼠体内的最长存留时间,以确定表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在小鼠体内的存留规律。本试验选用30只SPF级别的健康小鼠,随机分为A、B组,各免疫组以1×106 IFU/只剂量接种rAd... 研究E0-E2基因和表达蛋白及抗体水平在小鼠体内的最长存留时间,以确定表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在小鼠体内的存留规律。本试验选用30只SPF级别的健康小鼠,随机分为A、B组,各免疫组以1×106 IFU/只剂量接种rAd-E0-E2,对照组注射生理盐水。A组20只于接种后不同特定时间(2只/次)采集血液和组织进行PCR和IFA检测E0-E2基因及表达蛋白残留情况;B组10只于接种后1、3、5、7、10、14、21、28d采集血清检测猪瘟抗体水平。PCR和IFA检测显示,在接种12、24、36h后肝、脾、肾组织和血清中E0-E2基因和蛋白检出率为100%,接种48h后小鼠肝、脾组织检出率为50%,肾组织和血清检出率为100%。接种72h以后,小鼠血液和组织检测均为阴性。接种后7d试验组体内抗体阳性率为40%,接种后10d小鼠体内抗体阳性率为100%,抗体阻断率在43%～51.2%,接种后28d,猪瘟抗体阳性率为100%,抗体阻断率在75.6%～87.5%。表明rAd-E0-E2在小鼠体内的存留时间最长72h,接种时间与E2抗体水平呈正相关。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E0-E2基因 重组腺病毒疫苗 存留规律

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兽医生物制品中常用灭活剂和冻干保护剂研究进展 被引量：6

3

作者 赵成龙 王素春 +12 位作者 庄青叶 李阳 潘子豪 孙瑞妮 张富友 肖志宇 梁晚枫 孙福亮 汪洋 黄禹丰 陈海燕 刘华雷 王楷宬 《中国动物检疫》 CAS 2021年第8期69-74,共6页

微生物灭活和冻干是兽医生物制品制备过程中的常用技术,其对生物制品的抗原含量、核酸含量、免疫原性、稳定性和保存期影响较大。了解不同灭活和冻干技术的原理和适用性,对优化生物制品制备工艺,提高制品质量均有重要意义。常用的灭活... 微生物灭活和冻干是兽医生物制品制备过程中的常用技术,其对生物制品的抗原含量、核酸含量、免疫原性、稳定性和保存期影响较大。了解不同灭活和冻干技术的原理和适用性,对优化生物制品制备工艺,提高制品质量均有重要意义。常用的灭活剂有β-丙内酯、甲醛、烷化剂、Trizol试剂等,其中使用最多的是甲醛,但其存在破坏免疫原性、有致癌风险、灭活时间长等缺点;常用的冻干保护剂有糖类、氨基酸、蛋白质和大分子明胶等,其中糖类保护剂可使细菌存活率达到83%左右,蛋白质保护剂最高可达94.90%。未来需要研制安全、有效、可控性高的新型灭活剂以及常温的冻干保护剂和稳定的液态保护剂。本文综述了兽医生物制品制备过程中常用灭活剂和冻干剂研究进展,以期为提升生物制品的质量和制备工艺提供参考。 展开更多

关键词 兽用生物制品 灭活剂 冻干保护剂 研究进展

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禽脑脊髓炎、鸡痘二联活疫苗安全性、最小免疫剂量及免疫效力试验 被引量：3

4

作者 王红 曹志 +7 位作者 毛娅卿 吴涛 宋新宇 宫晓 张恒 马爽 李慧姣 范根成 《中国兽药杂志》 2018年第7期16-21,共6页

为确定禽脑脊髓炎(AE)、鸡痘(AP)二联活疫苗的安全性、最小免疫剂量及免疫效力,自制3批二联活疫苗进行研究。结果显示,鸡接种10倍剂量疫苗后精神、食欲及发育均正常,临床表现和剖检均无异常;AEV YBF02株的最小免疫剂量为100 EID50,鸡痘... 为确定禽脑脊髓炎(AE)、鸡痘(AP)二联活疫苗的安全性、最小免疫剂量及免疫效力,自制3批二联活疫苗进行研究。结果显示,鸡接种10倍剂量疫苗后精神、食欲及发育均正常,临床表现和剖检均无异常;AEV YBF02株的最小免疫剂量为100 EID50,鸡痘鹌鹑化弱毒株的最小免疫剂量为10 EID50;3批疫苗AEV YBF02株的病毒含量均≥103.2EID50/羽份,鸡痘鹌鹑化弱毒株的病毒含量均≥103.4EID50/羽份,攻毒后保护指数为89~100。试验表明,自制二联活疫苗安全、有效、质量可控,可用于预防禽脑脊髓炎和鸡痘。 展开更多

关键词 禽脑脊髓炎 鸡痘 安全性 最小免疫剂量 免疫效力

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鹅星状病毒的分离鉴定及全基因组序列分析 被引量：31

5

作者 张玉杰 孙宁 +13 位作者 刘东 于静 刘红祥 于可超 任衍倍 高天佐 杨少燕 宫晓 邹敏 张宇龙 王玉超 钟声 马冬 杜元钊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2765-2777,共13页

2017年10月—2019年5月,本实验室从广东、四川、河北、山东、安徽、辽宁等广大养鹅地区采集了67份典型雏鹅痛风样品进行了实验室检测以及病原的分离鉴定,检测结果表明:所有样品中均检测到了鹅星状病毒,并且约有94.03%的样品为两个不同... 2017年10月—2019年5月,本实验室从广东、四川、河北、山东、安徽、辽宁等广大养鹅地区采集了67份典型雏鹅痛风样品进行了实验室检测以及病原的分离鉴定,检测结果表明:所有样品中均检测到了鹅星状病毒,并且约有94.03%的样品为两个不同种的鹅星状病毒混合感染。病原分离结果表明:鹅星状病毒FLX株的变异株病毒(命名为SCCD)可以在鹅胚上稳定增殖,并且能稳定致死10日龄鹅胚,致病力较鹅星状病毒FLX增强;新型鹅星状病毒株(命名为SDPD)不能在鹅胚和SPF鸡胚上稳定增殖。病毒的基因组测序结果表明:鹅星状病毒FLX株与鹅星状病毒FLX的变异株病毒SCCD株、新型鹅星状病毒SDPD株全基因组核苷酸相似性分别为89.7%、58.1%,ORF1b基因氨基酸相似性分别为98.4%、61.0%,ORF2基因氨基酸相似性分别为81.0%、42.5%。将新分离的鹅星状病毒株接种1日龄健康雏鹅,结果表明,鹅星状病毒SCCD株和鹅星状病毒SDPD株虽然能使雏鹅发生死亡,引起肝炎、肾肿胀和增重减少等变化,但雏鹅均无典型痛风(脏器尿酸盐沉积)表现,而两种鹅星状病毒株混合攻毒能使44%的雏鹅发生典型痛风,并与临床发病症状一致。因此,临床上引起雏鹅痛风的病原可能是两种鹅星状病毒,即新型鹅星状病毒和鹅星状病毒FLX的变异株病毒。 展开更多

关键词 雏鹅痛风 两种鹅星状病毒 分离鉴定 序列分析

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山东省青岛市猫病毒性鼻气管炎流行情况调查 被引量：1

6

作者 孙厚民 李陆梅 +4 位作者 祝洪伟 陈玉霞 孙鹏 楚电峰 范根成 《中国动物检疫》 CAS 2022年第3期4-8,12,共6页

为了解山东省青岛市猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的流行情况,2019年6月至2021年6月共采集猫眼鼻拭子样本218份,提取样本DNA后利用PCR方法进行FHV-1核酸检测,共检出阳性样本22份,阳性率为10.1%(22/218)。宠物救助站猫的FHV-1阳性率(16.7%)略高... 为了解山东省青岛市猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的流行情况,2019年6月至2021年6月共采集猫眼鼻拭子样本218份,提取样本DNA后利用PCR方法进行FHV-1核酸检测,共检出阳性样本22份,阳性率为10.1%(22/218)。宠物救助站猫的FHV-1阳性率(16.7%)略高于其他来源猫,2~6月龄幼猫的FHV-1阳性率(13.6%)略高于成年猫(7.0%),成年公猫阳性率(7.3%)稍高于成年母猫(6.7%),但各组间均无显著性差异(P>0.05)。对2021年3月采集的60份猫血清进行了FHV-1中和抗体检测,共检出阳性样本40份,抗体阳性率为66.7%。结果表明,青岛市猫群中存在一定的FHV-1流行,抗体保护水平不高,应加快国产FHV-1相关疫苗的研制,及时对猫进行免疫预防。 展开更多

关键词 猫疱疹病毒Ⅰ型 感染率 中和抗体 抗体阳性率

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2022年我国部分省份猪瘟猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病流行病学调查 被引量：3

7

作者 段坦然 刘红祥 +7 位作者 刘华阳 王玉超 杨雪 吕宁宁 许春雨 杨少艳 吴美丽 刘东 《中国动物检疫》 CAS 2024年第9期9-15,共7页

为了解我国不同地区不同生长阶段及不同规模猪场猪群的猪瘟CSF猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪伪狂犬病(PR)流行情况,对2022年收集的6172份血清样品和2301份病原检测样品分别进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及伪狂犬... 为了解我国不同地区不同生长阶段及不同规模猪场猪群的猪瘟CSF猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪伪狂犬病(PR)流行情况,对2022年收集的6172份血清样品和2301份病原检测样品分别进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及伪狂犬病病毒(PRV)抗体及抗原检测。结果显示:CSFV、PRRSV、PRV-g E抗体阳性率分别为94.15%、63.06%和8.55%,病原检出率分别为0.13%、8.50%和0.80%。育肥场的PRRSV抗原检出率最高,且S/P≥2.5占比最高;5~6胎母猪的PRV-g E抗体阳性率(60.87%)显著高于其他生长阶段猪群(P<0.05)。结果表明:CSF整体免疫防控效果良好,疫情发生风险较低;PRRSV免疫抗体阳性率不高,特别要警惕育肥场13~21周龄育肥猪的PRRSV感染;高胎龄母猪的PRV带毒情况严重,建议做好后备猪的更新与高胎次母猪的淘汰工作,并大力推进PR净化。 展开更多

关键词 猪瘟 猪繁殖与呼吸综合征 伪狂犬 流行病学 抗体

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2020—2022年我国部分地区鸡传染性喉气管炎流行病学调查

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作者 金卫 鄂伟 +8 位作者 刘红祥 刘华阳 周建超 张翔 赵成龙 李彬 桑圣云 宋姗姗 刘东 《中国动物检疫》 CAS 2024年第7期1-5,共5页

为了解我国部分地区鸡传染性喉气管炎(ILT)的流行特点,2020-2022年对安徽、北京、福建等29个省级行政区部分养殖场(户)送检的47 210份疑似鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染样品进行了PCR检测,并对检测结果进行了空间、时间、群间分布统... 为了解我国部分地区鸡传染性喉气管炎(ILT)的流行特点,2020-2022年对安徽、北京、福建等29个省级行政区部分养殖场(户)送检的47 210份疑似鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染样品进行了PCR检测,并对检测结果进行了空间、时间、群间分布统计分析。结果显示:共检出413份ILTV阳性样品,阳性检出率为0.87%;2020-2022年ILTV阳性检出率分别为1.41%、0.72%和0.56%;每月均有ILTV检出,10月-次年5月阳性检出率较高;大多数省份均有ILTV阳性检出,养鸡密集省份的阳性率较高;4种品种鸡均易感,其中黄羽鸡(1.56%)和蛋鸡(1.11%)阳性率较高;> 3~9以及> 18~24周龄鸡群阳性率较高。结果说明:我国鸡群中ILTV流行范围较广,阳性检出率呈逐年下降趋势,低温季节和小周龄鸡群感染风险相对较高,建议加强鸡群的饲养管理,并持续开展ILT流行病学监测,以期为ILT防控策略调整和研发新型疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 鸡传染性喉气管炎 流行病学调查 禽病毒性传染病

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1群4型禽腺病毒的分离鉴定及Fiber-2蛋白的免疫效果分析 被引量：6

9

作者 程增青 范根成 +4 位作者 窦小龙 刘红祥 申茂欣 徐全刚 杨汉春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2463-2471,共9页

旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析。本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究。结果显... 旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析。本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究。结果显示,所采集样品经卵黄囊途径接种7日龄SPF鸡胚,盲传2代后获得病毒;PCR可扩增出约900 bp的Hexon基因片段,经测序,其Hexon基因与血清C4型毒株的相似性为100%;血清中和试验结果表明分离的禽腺病毒为1群血清4型禽腺病毒,命名为HN-ZK株。该毒株可在鸡胚原代肝细胞上产生CPE,病毒含量可达10^(7.5)TCID50·0.1 mL^-1。动物回归试验表明,该分离毒株可使35日龄SPF鸡100%(10/10)表现出发病症状。以分离株的DNA为模板,利用大肠杆菌原核表达系统,获得相对分子质量约为33 ku的Fiber-2蛋白,离心浓缩、纯化后蛋白含量为300 mg·mL^-1。将表达的Fiber-2蛋白用不同的剂量免疫SPF鸡,结果表明20μg·只^-1的剂量能使鸡完全抵抗强毒株的攻击,说明Fiber-2蛋白具有较好的免疫原性。本研究可为禽心包积水-肝炎综合征的诊断和基因工程亚单位疫苗的研制提供数据参考。 展开更多

关键词 I群禽腺病毒 鉴定 Fiber-2蛋白 亚单位疫苗

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检测鸡毒支原体抗体的间接ELISA方法和HI试验方法的建立及初步应用 被引量：4

10

作者 陈杨 孟林春 +6 位作者 郭梦娇 张成成 薄宗义 楚电峰 曹永忠 吴艳涛 张小荣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2062-2072,共11页

本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法,结合HI试验,为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原,使用单一稀释法构建了关于血... 本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法,结合HI试验,为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原,使用单一稀释法构建了关于血清抗体滴度与1∶500血清稀释度处S/P值的回归方程lg(抗体滴度)=1.257×lg(1∶500处S/P值)+3.709,R^(2)=0.9176,S/P临界值为0.32,临界滴度是1200。经验证,rVlhA-ELISA方法具有良好的特异性、重复性,最低能检出1∶2000稀释的阳性血清。选择国内MG分离株SH/2020-1作为血凝抑制抗原建立HI试验方法。使用rVlhA-ELISA方法联合HI试验进行血清样品检测,IDEXX-MG方法作为对照,借助RT-qPCR方法监测MG感染情况。结果表明rVlhA-ELISA方法和IDEXX-MG监测的血清抗体趋势与HI复核结果均一致;rVlhA-ELISA与HI联合判定结果与IDEXX-MG符合率可达91.53%。上述结果显示,本研究建立的rVlhA-ELISA方法和HI试验具有较好的临床应用价值,可以初步应用于MG感染的临床大规模、快速筛查并对结果进行复核。 展开更多

关键词 鸡毒支原体 VlhA蛋白 抗体检测 间接ELISA

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鸭坦布苏病毒RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：4

11

作者 邹敏 张青 +4 位作者 王红 刘东 刘新文 范根成 吴发兴 《中国兽药杂志》 2018年第11期14-18,共5页

为建立一种能快速检测鸭坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)的分子生物学方法,从GenBank中下载了51个具有代表性的黄病毒全基因组序列及白洋淀病毒等5个禽源黄病毒株E基因序列,进行了黄病毒E基因序列分析,应用Primer 5.0软件设计了一对引物... 为建立一种能快速检测鸭坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)的分子生物学方法,从GenBank中下载了51个具有代表性的黄病毒全基因组序列及白洋淀病毒等5个禽源黄病毒株E基因序列,进行了黄病毒E基因序列分析,应用Primer 5.0软件设计了一对引物,扩增目的片段为549 bp,进行了TMUV RT-PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性试验,建立了TMUV RT-PCR检测方法应用该方法对收集的14份临床疑似蛋鸭鸭坦布苏病毒病发病样品进行了检测,共检出6份TMUV核酸阳性样品,检出率达42.86%。结果表明,该方法可用于水禽坦布苏病毒病的临床快速诊断、检测及流行病学调查。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 E基因 RT-PCR

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2019—2021年我国29个省级行政区鸡传染性支气管炎流行病学调查 被引量：14

12

作者 李彬 韩晓青 +7 位作者 刘红祥 宋姗姗 于静 范庆增 张宇龙 谭鹏 杜元钊 刘东 《中国动物检疫》 CAS 2022年第4期19-25,共7页

为了解鸡传染性支气管炎病毒(IBV)在我国的流行规律,通过RT-PCR方法,对2019—2021年从我国29个省级行政区送检的38442份疑似IBV感染样品进行病原检测和鉴定,对检出的阳性样品进行S1基因测序分型,然后对检测结果进行时间、空间和群间统... 为了解鸡传染性支气管炎病毒(IBV)在我国的流行规律,通过RT-PCR方法,对2019—2021年从我国29个省级行政区送检的38442份疑似IBV感染样品进行病原检测和鉴定,对检出的阳性样品进行S1基因测序分型,然后对检测结果进行时间、空间和群间统计分析。结果显示:共检出6436份IBV阳性样本,阳性检出率为16.7%。2019—2021年的IBV阳性检出率分别为12.5%、16.4%、21.0%,呈逐年增长趋势:阳性检出率呈现一定的季节性变化特点,7—9月检出率(11.3%~15.4%)较低,而3—6月(17.3%~19.3%)和10—12月(17.5%~19.0%)较高。全国29个省级行政区中有27个检出阳性样品,其中东部和中部家禽养殖密集区阳性检出率较高,而西部和北部地区较低。白羽肉鸡阳性检出率最高(28.9%),肉种鸡阳性检出率最低(5.0%),0~6周龄阶段IBV感染较为严重。共检出5种基因型,其中QX型(66.5%)、GVI型(27.7%)占比较高,为当前流行的优势基因型;不同品种鸡群中流行的基因型存在一定差异,白羽肉鸡群中以QX和GVI型为主,而其他鸡群中流行的基因型较为复杂;QX型0~3周龄(33.2%)、GVI型3~6周龄(66.4%)阳性检出数量占比较高,6周龄以后占比均较低(<14.0%)。结果表明:我国鸡群中IBV感染普遍,尤其是家禽养殖密集区,且流行呈逐年加重趋势;冬春或秋冬季节多发,小日龄鸡群感染严重;流行基因型复杂,以QX型和GVI型多见。结果提示,我国的IB防控面临较大压力与挑战,需要加强优势基因型疫苗的研发,重点做好小日龄鸡群的IB防控。 展开更多

关键词 鸡传染性支气管炎 基因型 流行病学调查

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2020-2021年我国部分省份禽呼肠孤病毒分子流行病学调查 被引量：11

13

作者 李彬 韩晓青 +8 位作者 刘平 刘红祥 宋姗姗 于静 范庆增 张宇龙 谭鹏 杜元钊 刘东 《中国动物检疫》 CAS 2022年第8期6-11,共6页

近年来,禽呼肠孤病毒(ARV)在我国白羽肉鸡群中的感染率呈上升趋势,流行范围较广,给我国肉鸡养殖企业带来了较大经济损失。ARV易变异重组,因此全面了解其分子流行病学特征具有十分重要的意义。为了解我国白羽肉鸡群中ARV的遗传变异特点,2... 近年来,禽呼肠孤病毒(ARV)在我国白羽肉鸡群中的感染率呈上升趋势,流行范围较广,给我国肉鸡养殖企业带来了较大经济损失。ARV易变异重组,因此全面了解其分子流行病学特征具有十分重要的意义。为了解我国白羽肉鸡群中ARV的遗传变异特点,2020—2021年从山东、河北、福建、安徽、辽宁、江苏等6个省份收集疑似ARV感染样品,采用RT-PCR方法筛选阳性样本,然后对阳性样本进行σC基因(1088 bp)测序,根据测序结果分析ARV不同基因型分布规律及占比。结果显示:2020—2021年,从6个省份中,经RT-PCR检测,检出ARV阳性样品157份,总阳性检出率为62.1%,不同省份的阳性检出率为44.4%~77.3%。157份阳性样品可分为6个基因型,其中基因1型61份(38.85%)、基因2型41份(26.11%)、基因3型15份(9.56%)、基因4型9份(5.73%),基因5型30份(19.11%),基因6型1份(0.64%);61份基因1型样品中,38份与标准ARV疫苗株(S1133)属于同一亚分支,另外23份与4599参考株处于单独的另一亚分支。结果表明:我国肉鸡群中存在一定程度的ARV流行;流行的ARV基因型较为复杂,且存在基因1型变异毒株,当前的疫苗株已不能对其提供足够的保护。结果提示,今后需要进一步开展ARV感染监测,评估其流行及变异情况,调整免疫策略,加快新疫苗等防疫技术及产品研发。本研究初步了解了我国部分省份的ARV分子流行病学特征,对我国ARV感染的防控具有重要意义,也为变异株新型疫苗研发提供了依据。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒 分子流行病学 σC基因

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2012—2018年山东省部分地区猪瘟分子流行病学研究 被引量：6

14

作者 邹敏 宫晓 +7 位作者 张青 杨旭兵 于可超 刘东 刘蕾 李陆梅 刘拥军 范根成 《中国动物检疫》 CAS 2019年第10期20-26,共7页

为了解山东省不同地区猪群中猪瘟病毒(CSFV)分子流行病学特点,采用RT-PCR方法,对2012—2018年收集到的79份临床疑似猪瘟病例组织样品,进行E2基因主要抗原区域扩增与序列测定,对获取的59个CSFVE2基因主要抗原区域序列进行遗传演化分析,... 为了解山东省不同地区猪群中猪瘟病毒(CSFV)分子流行病学特点,采用RT-PCR方法,对2012—2018年收集到的79份临床疑似猪瘟病例组织样品,进行E2基因主要抗原区域扩增与序列测定,对获取的59个CSFVE2基因主要抗原区域序列进行遗传演化分析,并构建了遗传发育进化树。结果显示:7株CSFV属1.1亚型,其中有3个毒株的E2基因与疫苗株E2基因几乎一致,提示这7个毒株可能来自疫苗毒或为类疫苗毒株;SDJZ-15株归属2.1b亚型,其E2基因推导氨基酸仅A51(丙氨酸)突变为V51(缬氨酸);其他51个毒株属2.1d亚型,与2型CSFV的E2基因主要抗原区(28~90aa)氨基酸序列相比发生了4处突变,总体保持稳定。研究结果表明,2.1亚群中的2.1d分支CSFV是山东省当前的优势流行毒株。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2基因 基因型 遗传变异

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猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用 被引量：7

15

作者 邹敏 李陆梅 +3 位作者 宫晓 王红 杨旭兵 范根成 《中国动物检疫》 CAS 2016年第8期94-97,共4页

参考Gen Bank中发表的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,预期目的条带约591 bp。对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了试验,建立了PPV的PCR检测方法。符合性实验结果表明,该PCR方法优于HA、VI以及IHA。... 参考Gen Bank中发表的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,预期目的条带约591 bp。对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了试验,建立了PPV的PCR检测方法。符合性实验结果表明,该PCR方法优于HA、VI以及IHA。使用该方法对215份病料进行了检测,检出阳性样品25份,检出率为11.63%。结果表明,该方法可用于PPV的诊断及流行病学监测。 展开更多

关键词 猪细小病毒 VP2基因 聚合酶链式反应 检测

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2020年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征分子流行病学调查 被引量：13

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作者 梁俊超 赵翔 +7 位作者 刘红祥 袁飞 李坤 郝尧光 王宗升 王辉之 刘东 杜元钊 《中国动物检疫》 CAS 2022年第8期17-25,共9页

为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行及遗传变异情况,2020年对来自7个省的570份疑似PRRSV感染样品进行RT-PCR检测,并对60个PRRSV阳性样品进行ORF5基因测序及分析比较。... 为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行及遗传变异情况,2020年对来自7个省的570份疑似PRRSV感染样品进行RT-PCR检测,并对60个PRRSV阳性样品进行ORF5基因测序及分析比较。RT-PCR检测结果显示,2020年送检样品中,PRRSV阳性检出率为23.68%(135/570),其中保育猪病料的阳性检出率最高,为32.24%(108/335)。同源性对比及遗传进化分析结果显示,60个PRRSV均为PRRSV2(美洲株),主要属于谱系1和谱系8,占比分别为51.67%和43.33%。氨基酸分析结果显示,60个PRRSV的GP5蛋白氨基酸以点突变为主,其中10个PRRSV的GP5蛋白氨基酸出现缺失突变,且非中和表位、中和表位、潜在毒力位点及N-糖基化位点均发生不同程度的变异。结果表明,保育猪群为PRRSV高发病群体,谱系1 PRRSV或已成为国内流行优势毒株,且PRRSV不断发生变异,这或许会影响现有疫苗的免疫保护效果。因此,针对PRRS需要综合防控,除选用安全有效的PRRSV弱毒活疫苗进行免疫外,加强猪场生物安全及饲养管理也极其重要。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 ORF5基因 分子遗传变异

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我国部分地区Sicinivirus流行病学调查

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作者 王楷宬 姜利建 +10 位作者 陈海燕 王素春 庄青叶 姜楠 肖志宇 赵成龙 黄禹丰 李金积 崔成都 孙福亮 徐太辉 《中国动物检疫》 CAS 2022年第2期1-4,共4页

Sicinivirus是一种禽类新发病毒,可引起家禽发育迟缓综合症、腹泻、吸收不良综合征等。目前,仅部分国家开展了该病毒的流行病学调查,研究数据极为有限。为明确该病毒在我国的流行情况,以及该病毒感染率与地域、宿主、养殖方式之间的关系... Sicinivirus是一种禽类新发病毒,可引起家禽发育迟缓综合症、腹泻、吸收不良综合征等。目前,仅部分国家开展了该病毒的流行病学调查,研究数据极为有限。为明确该病毒在我国的流行情况,以及该病毒感染率与地域、宿主、养殖方式之间的关系,2019年下半年在江苏、广西、河北、安徽、广东、上海、湖北和江西8个省(自治区、直辖市),采集25个场点1 920份家禽咽喉/泄殖腔双拭子样品,采用RT-PCR方法进行Sicinivirus检测和基因测序分析。采样场点涉及农贸市场、批发市场、屠宰场和养殖场,样品来自鸡、鸭、鹅以及鸽和鹧鸪等不同禽类。结果显示:25个场点中有13个检出阳性,检出阳性样品134份,个体阳性率为6.97%(134/1 920)。其中,河北、湖北、上海、广东、江苏、江西、广西和安徽的个体阳性率分别为24.16%(58/240)、10.83%(24/240)、5.83%(14/240)、5.41%(13/240)、4.16%(10/240)、2.50%(6/240)、1.66%(4/240)和1.25%(3/240),鸡、鹅和鸽的个体阳性率分别为10.81%(132/1 221)、2.44%(1/41)和0.42%(1/235),鸭和鹧鸪中未检测到Sicinivirus。农贸市场、批发市场和屠宰场的个体阳性率分别为3.00%(18/600)、6.23%(58/930)和24.16%(58/240),养殖场中未检测到Sicinivirus。结果表明,鸡是该病毒主要的易感宿主,不同类型场点感染率差别较大,表明家禽养殖环境与该病毒的感染有较大的关系。 展开更多

关键词 Sicinivirus 流行病学调查 感染率

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鸡肝破裂血水综合征病因初探 被引量：3

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作者 刘东 刘红祥 +9 位作者 李彬 王群义 刘平 刘丰波 任衍倍 张翔 张玉杰 栾栋祖 宋姗姗 杜元钊 《中国动物检疫》 CAS 2021年第5期88-95,共8页

近几年,在鸡群中出现一种以肝破裂血水为主要特征的疾病,简称为肝破裂血水综合征,给养殖单位造成较大经济损失。为探究鸡肝破裂血水综合征发生原因,采集11省区市9种品系鸡的458份临床肝破裂血水样本,开展病原分离以及分子生物学检测、... 近几年,在鸡群中出现一种以肝破裂血水为主要特征的疾病,简称为肝破裂血水综合征,给养殖单位造成较大经济损失。为探究鸡肝破裂血水综合征发生原因,采集11省区市9种品系鸡的458份临床肝破裂血水样本,开展病原分离以及分子生物学检测、病理学诊断、内毒素检测和动物试验,并结合流行病学调查进行病因探讨。病原分离结果显示:检测到大肠杆菌14份,占比2.8%;沙门氏菌7份,占比1.5%;未检测到弯曲杆菌以及未分离到相关病毒。PCR、RT-PCR结果显示:检测到禽腺病毒(FAdV)3份,占比0.66%;禽戊型肝炎病毒(HEV)1份,占比0.22%;未检测到鸡传染性贫血病毒(CIAV)、马立克病毒(MDV)、禽白血病病毒(ALV)。Random PCR检测未发现RNA和DNA病毒;内毒素检测发现15份样本超标,占比3.3%。动物试验结果显示,腹腔攻毒不能复制出临床肝破裂血水表征。选取11省区市99份有代表性的肝脏样本,固定后病理学诊断发现:无疑似髓样白血病/白血病病理变化;疑似细菌造成的坏死性肝炎4份,占比4.04%;疑似禽网状内皮细胞增生病并发血管瘤病理变化1份,占比2.02%;淀粉样变94份,占比93.94%。流行病学调查发现:该病在全国各地均有发病,发病鸡品种和日龄广泛,无明显季节性;同一鸡场不同品种,在饲料、免疫和管理都一致的情况下,有的品种肝破裂血水,有的品种正常。以上研究表明,近几年鸡群中出现的肝破裂血水综合征病例与常见的可引起鸡肝破裂出血的因素无明显相关性,初步分析与鸡体本身存在遗传自身免疫性缺陷因素有关,机体反应过度,出现细胞因子风暴综合征导致鸡肝脏淀粉样变出血,从而出现肝脏破裂血水的临床症状。 展开更多

关键词 鸡肝破裂血水综合征 流行病学调查 细胞因子风暴 淀粉样变

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禽脑脊髓炎病毒VR株的致病性研究 被引量：1

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作者 王红 曹志 +2 位作者 韩乃君 郭伟伟 范根成 《动物医学进展》 北大核心 2016年第10期57-59,共3页

为探索禽脑脊髓炎病毒强毒VR株对SPF鸡的致病性,开展了不同接种途径和不同日龄SPF鸡的致病力试验。不同接种途径致病力试验结果表明,AEV VR株口服后不能引起发病;刺种、肌肉注射途径接种随着日龄增大,发病率降低;脑内注射途径接种可引... 为探索禽脑脊髓炎病毒强毒VR株对SPF鸡的致病性,开展了不同接种途径和不同日龄SPF鸡的致病力试验。不同接种途径致病力试验结果表明,AEV VR株口服后不能引起发病;刺种、肌肉注射途径接种随着日龄增大,发病率降低;脑内注射途径接种可引起试验鸡全部发病。最小致病量试验结果显示,VR株脑内注射攻毒的最小致病量为10^(2.0) EID_(50)。不同日龄SPF鸡的致病力试验结果表明,随着试验鸡日龄的增大,其致病力略有差异,日龄越小,发病率越高。结果表明,AEV VR株脑内攻毒70日龄内SPF鸡的发病率为80%及以上,攻毒剂量为10^(4.0)EID_(50)。 展开更多

关键词 禽脑脊髓炎病毒VR株 接种途径 日龄 最小致病量 致病性

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鸭源1:A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定 被引量：1

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作者 程增青 郭玉广 +2 位作者 马冬 赵永军 范根成 《中国动物检疫》 CAS 2019年第9期88-91,共4页

经形态观察、培养特性、生化特性、PCR鉴定及PCR分型等鉴定,确定2018年从河南省某蛋鸭场分离到的一株疑似多杀性巴氏杆菌菌株为1:A型。采用药敏纸片,对该分离菌株进行药敏试验,发现其对头孢噻肟、头孢曲松钠、左氧氟沙星高度敏感,对强... 经形态观察、培养特性、生化特性、PCR鉴定及PCR分型等鉴定,确定2018年从河南省某蛋鸭场分离到的一株疑似多杀性巴氏杆菌菌株为1:A型。采用药敏纸片,对该分离菌株进行药敏试验,发现其对头孢噻肟、头孢曲松钠、左氧氟沙星高度敏感,对强力霉素、环丙沙星、头孢哌酮舒巴坦钠、丁胺卡那中度敏感,对氟苯尼考、林可霉素不敏感。用该菌株的培养物腹腔注射4只体质量为25g左右的昆明小鼠进行毒力试验,结果攻毒菌量为3.7CFU时,能使全部小鼠死亡,证明该菌株具有较强的毒力。本研究对于了解河南省鸭源多杀性巴氏杆菌的血清型及其耐药性和致病性提供了数据支撑。 展开更多

关键词 巴氏杆菌 鸭 分离鉴定 致病性 耐药性

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