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用于非洲猪瘟病毒核酸检测的假病毒阳性对照品的制备和标定
被引量：
5
1
作者
李朋霏
宋晓明
+4 位作者
周保琨
曹志
张洪亮
马清霞
单虎
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第2期647-655,共9页
【目的】制备安全、稳定的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)实时荧光定量PCR阳性对照品。【方法】人工合成含ASFV P 72、CD 2 v和MGF 360-12 L基因片段的核苷酸序列,将3段基因串联插入腺病毒载体PacAd5中,将重组腺病毒质...
【目的】制备安全、稳定的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)实时荧光定量PCR阳性对照品。【方法】人工合成含ASFV P 72、CD 2 v和MGF 360-12 L基因片段的核苷酸序列,将3段基因串联插入腺病毒载体PacAd5中,将重组腺病毒质粒和腺病毒骨架质粒共转染293A细胞,利用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况,培养10 d后用PCR方法检测假病毒包装情况,将制备的假病毒颗粒加冻干保护剂制备成阳性对照品,进行均一性和稳定性试验,并对制备好的阳性对照品进行核酸拷贝数的绝对定量。【结果】重组腺病毒质粒和腺病毒骨架质粒共转染293A细胞24 h后出现点状荧光,转染后7 d细胞有形成岛屿状感染区的趋势,转染后10 d细胞出现固缩和脱落等明显细胞病变,收获的假病毒液经PCR检测和测序鉴定,结果显示,能扩增出大小约2400 bp的阳性条带且测序序列与插入片段一致。均一性试验显示,阳性对照品Ct值的变异系数<1%,表明均一性良好;加速热稳定性试验显示,制备的阳性对照品分别经4℃放置7 d、室温(25℃)和37℃处理24 h后仍能保持稳定;阳性对照品在DNaseⅠ作用1 h后仍具有良好的稳定性;保存期试验表明制备的阳性对照品在-20℃下可稳定保存6个月。经微滴式数字PCR(ddPCR)检测结果显示,制备的阳性对照假病毒液的核酸拷贝数为(2.26±0.09)×10^(4)拷贝/μL。【结论】本研究成功制备了含有P 72、CD 2 v和MGF 360-12 L基因片段的ASFV假病毒阳性对照品,可实现对核酸提取与检测过程的全程监控。
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关键词
非洲猪瘟病毒(AFSV)
假病毒
阳性对照品
在线阅读
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职称材料
设施蔬菜栽培智能化管理平台建设及应用
被引量：
10
2
作者
严德全
《农业工程技术》
2022年第30期63-65,共3页
通过大力发展现代化农业,农业生产实现智能化、自动化管理,生产成本将全面降低,农产品的品质将获得大幅度提高。将信息技术融入到设施蔬菜栽培中,蔬菜种植实现智能化管理,水肥管理、病虫害管理、环境管理都将实现自动化,设施蔬菜的生产...
通过大力发展现代化农业,农业生产实现智能化、自动化管理,生产成本将全面降低,农产品的品质将获得大幅度提高。将信息技术融入到设施蔬菜栽培中,蔬菜种植实现智能化管理,水肥管理、病虫害管理、环境管理都将实现自动化,设施蔬菜的生产水平将获得全面提高。“智能+蔬菜”的农业生产模式必然能够带来新一轮的农业生产技术改革,推动中国农业产业的发展。该文分析了信息技术在设施蔬菜栽培智能管理上的应用价值,阐述了温室环境管控系统的主要内容,探索智能化管理系统在设施蔬菜栽培中的应用方法,旨在推动信息技术在设施蔬菜栽培智能管理方面的应用,促进设施蔬菜现代化发展。
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关键词
信息技术
设施蔬菜
智能管理
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职称材料
设施草莓采摘期主要病虫害零化学农药防治技术
被引量：
1
3
作者
王向积
《现代农业科技》
2022年第20期84-86,94,共4页
本文总结了设施草莓采摘期主要病虫害零化学农药防治技术,包括草莓白粉病、草莓灰霉病、红蜘蛛、蓟马的危害症状、发生规律、防治技术等方面内容,以期为保障鲜食草莓生产安全提供参考。
关键词
设施草莓
采摘期
病虫害防治
零化学农药
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职称材料
题名
用于非洲猪瘟病毒核酸检测的假病毒阳性对照品的制备和标定
被引量：
5
1
作者
李朋霏
宋晓明
周保琨
曹志
张洪亮
马清霞
单虎
机构
青岛
农业
大学动物医学院
青岛市城阳区农业农村服务中心
即墨区畜牧业发展
服务
中心
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第2期647-655,共9页
基金
山东省重点研发计划(重大科技创新工程)“非洲猪瘟防控关键技术研究与应用”(2020CXGC010801-02)。
文摘
【目的】制备安全、稳定的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)实时荧光定量PCR阳性对照品。【方法】人工合成含ASFV P 72、CD 2 v和MGF 360-12 L基因片段的核苷酸序列,将3段基因串联插入腺病毒载体PacAd5中,将重组腺病毒质粒和腺病毒骨架质粒共转染293A细胞,利用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况,培养10 d后用PCR方法检测假病毒包装情况,将制备的假病毒颗粒加冻干保护剂制备成阳性对照品,进行均一性和稳定性试验,并对制备好的阳性对照品进行核酸拷贝数的绝对定量。【结果】重组腺病毒质粒和腺病毒骨架质粒共转染293A细胞24 h后出现点状荧光,转染后7 d细胞有形成岛屿状感染区的趋势,转染后10 d细胞出现固缩和脱落等明显细胞病变,收获的假病毒液经PCR检测和测序鉴定,结果显示,能扩增出大小约2400 bp的阳性条带且测序序列与插入片段一致。均一性试验显示,阳性对照品Ct值的变异系数<1%,表明均一性良好;加速热稳定性试验显示,制备的阳性对照品分别经4℃放置7 d、室温(25℃)和37℃处理24 h后仍能保持稳定;阳性对照品在DNaseⅠ作用1 h后仍具有良好的稳定性;保存期试验表明制备的阳性对照品在-20℃下可稳定保存6个月。经微滴式数字PCR(ddPCR)检测结果显示,制备的阳性对照假病毒液的核酸拷贝数为(2.26±0.09)×10^(4)拷贝/μL。【结论】本研究成功制备了含有P 72、CD 2 v和MGF 360-12 L基因片段的ASFV假病毒阳性对照品,可实现对核酸提取与检测过程的全程监控。
关键词
非洲猪瘟病毒(AFSV)
假病毒
阳性对照品
Keywords
African swine fever virus(AFSV)
pseudovirus
positive control
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
设施蔬菜栽培智能化管理平台建设及应用
被引量：
10
2
作者
严德全
机构
山东省
青岛市城阳区农业农村服务中心
出处
《农业工程技术》
2022年第30期63-65,共3页
文摘
通过大力发展现代化农业,农业生产实现智能化、自动化管理,生产成本将全面降低,农产品的品质将获得大幅度提高。将信息技术融入到设施蔬菜栽培中,蔬菜种植实现智能化管理,水肥管理、病虫害管理、环境管理都将实现自动化,设施蔬菜的生产水平将获得全面提高。“智能+蔬菜”的农业生产模式必然能够带来新一轮的农业生产技术改革,推动中国农业产业的发展。该文分析了信息技术在设施蔬菜栽培智能管理上的应用价值,阐述了温室环境管控系统的主要内容,探索智能化管理系统在设施蔬菜栽培中的应用方法,旨在推动信息技术在设施蔬菜栽培智能管理方面的应用,促进设施蔬菜现代化发展。
关键词
信息技术
设施蔬菜
智能管理
分类号
F32 [经济管理—产业经济]
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职称材料
题名
设施草莓采摘期主要病虫害零化学农药防治技术
被引量：
1
3
作者
王向积
机构
青岛市城阳区农业农村服务中心
出处
《现代农业科技》
2022年第20期84-86,94,共4页
文摘
本文总结了设施草莓采摘期主要病虫害零化学农药防治技术,包括草莓白粉病、草莓灰霉病、红蜘蛛、蓟马的危害症状、发生规律、防治技术等方面内容,以期为保障鲜食草莓生产安全提供参考。
关键词
设施草莓
采摘期
病虫害防治
零化学农药
分类号
S436.68 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
用于非洲猪瘟病毒核酸检测的假病毒阳性对照品的制备和标定
李朋霏
宋晓明
周保琨
曹志
张洪亮
马清霞
单虎
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
设施蔬菜栽培智能化管理平台建设及应用
严德全
《农业工程技术》
2022
10
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
设施草莓采摘期主要病虫害零化学农药防治技术
王向积
《现代农业科技》
2022
1
在线阅读
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职称材料
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