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前扣带回至伏隔核GABA能神经通路调控小鼠肠易激综合征及潜在机制研究 被引量：2
1
作者 郭瑞晓 高胜利 +7 位作者 冯旭菲 刘华 明星 孙金秋 栾心驰 刘震宇 刘蔚毅 郭菲菲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期815-826,共12页
目的:探讨前扣带回(ACC)至伏隔核(NAc)的γ-氨基丁酸(GABA)能神经通路对小鼠肠易激综合征(IBS)的调控作用及潜在机制。方法:(1)慢急性联合应激法(CACS)建立C57BL/6J小鼠IBS模型,分为正常组和IBS组(均n=8),通过行为学测试、肠动力实验和... 目的:探讨前扣带回(ACC)至伏隔核(NAc)的γ-氨基丁酸(GABA)能神经通路对小鼠肠易激综合征(IBS)的调控作用及潜在机制。方法:(1)慢急性联合应激法(CACS)建立C57BL/6J小鼠IBS模型,分为正常组和IBS组(均n=8),通过行为学测试、肠动力实验和腹部退缩反射评分观察小鼠IBS样症状。(2)采用荧光金(FG)逆行追踪结合荧光免疫组织化学法检测ACC-NAc的GABA能通路和IBS小鼠ACC中GABA神经元兴奋性(均n=8)。(3)在正常和IBS小鼠NAc分别注射1.5μL生理盐水(NS)、GABA_A受体拮抗剂荷包牡丹碱(BIC)或激动剂异四氢烟酸(Isog),并据此将小鼠分为3组(均n=8):NS组、BIC组和Isog组,观察其IBS样症状。(4)采用化学遗传法将腺相关病毒载体AAV2/9-mDlx-iCre-WPRE-pA定向注射于ACC,AAV2/2Retro Plus-hSyn-DIO-hM3D(Gq)-eGFP-WPRE-pA注射于NAc,小鼠分为4组(均n=8):NS(腹腔注射)+NS(NAc注射)组、NS+BIC组、氯氮平N-氧化物(CNO)+NS组和CNO+BIC组;或AAV2/2Retro-hSyn-DIO-hM4D(Gi)-EGFP-WPRE-pA注射于NAc,小鼠分为3组(均n=8):NS+NS组、NS+BIC组和CNO+NS组,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结肠组织中组胺和5-羟色胺(5-HT)的表达,并观察ACC-NAc的GABA能神经通路对小鼠IBS样症状的影响。结果:CACS诱导小鼠出现IBS样症状;FG逆行追踪结合免疫荧光组织化学实验结果显示,ACC的GABA神经元可以投射至NAc。NAc注射BIC后IBS小鼠的焦虑样行为、腹泻样症状和内脏超敏反应显著减轻(P<0.05)。化学遗传法抑制投射至NAc的ACC内GABA能神经元可显著减轻IBS小鼠的症状(P<0.05)。结论:ACC^(GABA)-NAc神经通路可参与小鼠IBS样症状的调控,其机制可能与肠道组胺和5-HT的释放有关。 展开更多
关键词 前扣带回 伏隔核 γ-氨基丁酸 焦虑样行为 肠易激综合征 内脏超敏反应
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下丘脑室旁核外源性orexin-A对肥胖大鼠摄食的影响及NPY受体信号的调控 被引量：4
2
作者 王程 栾晓 +2 位作者 郭菲菲 孙向荣 徐珞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1162-1169,共8页
目的:探讨饮食诱导肥胖(DIO)大鼠神经肽Y(NPY)受体信号通路是否参与下丘脑室旁核(PVN)外源性注射食欲素A(orexin-A)对摄食和葡萄糖敏感(GS)神经元兴奋性的调控。方法:采用荧光免疫组织化学实验观察PVN中orexin-A受体(即食欲素1型受体,OX... 目的:探讨饮食诱导肥胖(DIO)大鼠神经肽Y(NPY)受体信号通路是否参与下丘脑室旁核(PVN)外源性注射食欲素A(orexin-A)对摄食和葡萄糖敏感(GS)神经元兴奋性的调控。方法:采用荧光免疫组织化学实验观察PVN中orexin-A受体(即食欲素1型受体,OX1R)和NPY受体Y5(NPY-5R)的表达;采用单细胞外放电记录观察orexin-A对PVN内GS神经元兴奋性的影响;分别于SD大鼠和DIO大鼠PVN埋置套管,经套管注射orexinA、OX1R拮抗剂SB-334867和NPY-5R拮抗剂CGP-71683,观察大鼠0~2 h和0~4 h摄食量。结果:DIO大鼠PVN中OX1R和NPY-5R的表达显著高于SD大鼠。Orexin-A抑制PVN内葡萄糖抑制性(GI)神经元,兴奋葡萄糖兴奋性(GE)神经元,但是orexin-A对GS神经元的兴奋或抑制效应可被NPY-5R拮抗剂CGP-71683部分阻断,且与SD大鼠相比,orexin-A对DIO大鼠PVN内GS神经元兴奋或抑制效应更加明显。PVN内注射orexin-A可增加SD大鼠和DIO大鼠摄食量。但是orexin-A诱导的促摄食效应被NPY-5R拮抗剂CGP-71683部分阻断。与SD大鼠相比,orexin-A诱导的促摄食效应在DIO大鼠中更加明显。结论:PVN内外源性注射orexin-A可能主要通过OX1R信号通路参与大鼠摄食和GS神经元兴奋性调控,NPY-5R信号也参与了该过程调控,在DIO大鼠中更敏感。 展开更多
关键词 食欲素A 下丘脑室旁核 葡萄糖敏感神经元 肥胖 NPY受体信号通路
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miR-29a基因敲除对C57BL/6小鼠肾小球结构和功能的影响 被引量：3
3
作者 李慧 王鑫 +3 位作者 王向东 李莉 于小玲 巩永凤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期884-892,共9页
目的:观察微小RNA-29a(miR-29a)基因敲除对小鼠肾小球功能和结构的影响。方法:应用CRISPR/Cas9技术,选择C57BL/6 miR-29a基因敲除型(miR-29a knockout,miR-29a KO)小鼠作为实验组,未敲除型小鼠作为野生型(wild-type,WT)对照组(n=30)。... 目的:观察微小RNA-29a(miR-29a)基因敲除对小鼠肾小球功能和结构的影响。方法:应用CRISPR/Cas9技术,选择C57BL/6 miR-29a基因敲除型(miR-29a knockout,miR-29a KO)小鼠作为实验组,未敲除型小鼠作为野生型(wild-type,WT)对照组(n=30)。分别在第3、12和24周收集小鼠24 h尿液。采用考马斯亮蓝染色法进行尿蛋白测定;ELISA测定尿白蛋白和尿肌酐水平,并计算尿白蛋白/肌酐比值(urinary albumin/creatinine ra‐tio,UACR)。选取3、12和24周的小鼠,采用过碘酸雪夫氏(periodic acid-schiff,PAS)染色法观察肾脏组织的病理变化;通过透射电镜以及冷冻蚀刻电镜观察肾小球超微结构。另取2组24周的小鼠,一组小鼠腹腔麻醉后用Dyna‐beads™M-450 Tosylactivated微磁珠经心脏灌流后分离肾小球,用于RNA和蛋白的提取;另一组小鼠肾脏用于免疫荧光染色。采用RT-qPCR、免疫荧光染色以及Western blot检测小鼠肾小球足细胞标志性蛋白nephrin和podocin以及肾小球IV型胶原(COL4α3、COL4α4和COL4α5)和层粘连蛋白β2(lamininβ2,LAMB2)的表达。结果:考马斯亮蓝染色法实验结果显示,miR-29a KO组小鼠出现尿白蛋白,WT组小鼠无蛋白尿。UACR结果显示3周时,miR-29a KO组与WT组相比,数据无统计学差异;12周时,miR-29a KO组的UACR比值与WT组相比显著增高(P<0.01);24周时,UACR比值差异更加显著(P<0.01)。PAS染色显示,3周时,miR-29a KO组小鼠肾小球出现轻微的细胞外基质沉积和系膜增生,随着周龄的增加,miR-29a KO组小鼠肾小球出现胶原纤维沉积,系膜扩张和外周血管壁增厚。透射电镜显示,miR-29a KO组小鼠肾小球超微结构在3周开始出现改变,包括足突排列紊乱,轻微融合等现象;12周时足突数量减少、足突融合加重,肾小球基底膜增厚的程度加重;24周时,上述变化进一步加重。与WT组小鼠相比,miR-29a KO组小鼠足细胞标志性蛋白nephrin的表达在mRNA水平显著下调(P<0.05);podocin表达在mRNA水平也呈下降趋势,但结果无统计学意义;COL4α3/α4/α5以及LAMB2表达在mRNA水平明显上调(P<0.05)。West‐ern blot结果显示,与WT组小鼠相比,miR-29a KO组小鼠nephrin和podocin蛋白表达显著降低(P<0.05);COL4α3/α4/α5以及LAMB2表达显著增加(P<0.01)。肾小球免疫荧光结果和Western blot结果一致。结论:miR-29a基因敲除会导致小鼠出现蛋白尿、肾小球损伤及纤维化,随着小鼠的老龄化损伤程度加重。 展开更多
关键词 微小RNA-29a 基因敲除 蛋白尿 纤维化
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中央杏仁核GABA神经元对小鼠情绪和摄食的调控研究 被引量：2
4
作者 刘宁 纪鹏飞 +3 位作者 胡阳 于立政 张鸿飞 郭菲菲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期588-598,共11页
目的:探讨中央杏仁核(CeA)内γ-氨基丁酸(GABA)能神经元到下丘脑室旁核(PVN)神经通路对小鼠情绪和摄食的调控作用及潜在机制。方法:采用慢性束缚应激(CRS)建立KM小鼠焦虑抑郁样模型。(1)在CRS小鼠和正常对照(NOR)小鼠的PVN注射0.3µ... 目的:探讨中央杏仁核(CeA)内γ-氨基丁酸(GABA)能神经元到下丘脑室旁核(PVN)神经通路对小鼠情绪和摄食的调控作用及潜在机制。方法:采用慢性束缚应激(CRS)建立KM小鼠焦虑抑郁样模型。(1)在CRS小鼠和正常对照(NOR)小鼠的PVN注射0.3µL生理盐水(NS)或GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱(BIC),并据此将小鼠分为4组(n=10):NOR+NS组、NOR+BIC组、CRS+NS组和CRS+BIC组。通过旷场实验、高架十字迷宫实验、大理石掩埋实验和强迫游泳实验观察小鼠行为学的变化;观察2周内小鼠摄食和体重的变化。(2)采用荧光金逆行追踪结合荧光免疫组织化学法检测CeA-PVN神经通路。(3)采用化学遗传法将腺相关病毒载体AAV2/9-mDlx-hM3D(Gq)-EGFP-ER2-WPRE-PA定向注射于CeA,小鼠分为4组(n=10):NS(腹腔注射)+NS(PVN微量注射)组、NS+BIC组、氯氮平N-氧化物(CNO)+NS组和CNO+BIC组。观察CeA-PVN的GABA能神经通路对小鼠行为学和摄食体重的影响。结果:行为学结果显示,CRS+NS组出现焦虑抑郁样行为改变;与NOR+NS组相比,CRS+NS组小鼠在6~12 h、12~24 h和2周内的摄食和体重显著降低(P<0.05)。PVN注射BIC后CRS小鼠焦虑抑郁样行为显著减轻(P<0.05),6~12 h、12~24 h和2周内的摄食量显著增加(P<0.05),持续给药第8天开始CRS小鼠的体重显著增加(P<0.05)。荧光金逆行追踪结合免疫荧光组织化学实验结果显示,CeA的GABA神经元可以投射至PVN。化学遗传法和行为学实验结果显示,与NS+NS组相比,CNO+NS组小鼠出现焦虑抑郁样行为(P<0.05),在6~12 h、12~24 h和2周内的摄食量显著降低(P<0.05),且第6天开始体重显著减轻(P<0.05);与CNO+NS组相比,CNO+BIC组的焦虑抑郁样行为显著减轻(P<0.05),在6~12 h、12~24 h和2周内的摄食量显著增加(P<0.05),给药第8天体重也开始显著增加(P<0.05)。结论:CeA-PVN的GABA能神经通路可参与小鼠的情绪行为和摄食调控。 展开更多
关键词 中央杏仁核 下丘脑室旁核 Γ-氨基丁酸 情绪 摄食
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SNAP94847经腹侧被盖区至迷走神经背侧运动核对焦虑大鼠胃黏膜损伤作用研究 被引量：2
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作者 李颜君 郭菲菲 +7 位作者 张娜娜 李俊姝 姚守恒 任翔 王怡茹 马鑫奇 尚高昊 刘华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期978-987,共10页
目的:探究黑色素浓集激素(MCH)受体1(MCHR1)拮抗剂SNAP94847能否作用于腹侧被盖区至迷走神经背侧运动核(VTA-DMV)神经通路,进而参与调控大鼠应激性焦虑所致胃黏膜损伤及其潜在机制。方法:采用荧光金逆行追踪结合免疫荧光组织化学法检测V... 目的:探究黑色素浓集激素(MCH)受体1(MCHR1)拮抗剂SNAP94847能否作用于腹侧被盖区至迷走神经背侧运动核(VTA-DMV)神经通路,进而参与调控大鼠应激性焦虑所致胃黏膜损伤及其潜在机制。方法:采用荧光金逆行追踪结合免疫荧光组织化学法检测VTA-DMV的MCHR神经通路(n=10);采用单细胞外放电记录法检测大鼠VTA微量注射MCH或SNAP94847对多巴胺(DA)神经元放电活动的影响(n=30);18只大鼠随机分为正常+生理盐水(NS)组、焦虑+NS组和焦虑+SNAP94847组,观察VTA微量注射SNAP94847后大鼠行为学变化、胃黏膜炎症损伤及相关炎症指标的变化(n=6);24只焦虑模型大鼠随机分为假损毁+NS组、假损毁+SNAP94847组、电损毁+NS组及电损毁+SNAP94847组,观察电损毁DMV后VTA微量注射SNAP94847对胃黏膜炎症损伤相关炎症指标的影响(n=6)。结果:逆行追踪结合荧光免疫组织化学染色结果显示,VTA可见部分MCHR和荧光金双重标记神经元;MCH可改变大鼠VTA内DA神经元放电活动,且对焦虑模型大鼠的影响更显著(P<0.05);高架十字迷宫实验中,与对照组相比,焦虑+SNAP94847组进入闭合臂次数和时间百分比显著增加(P<0.05);焦虑模型大鼠炎症标志物过氧化氢酶(CAT)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量显著降低(P<0.05),髓过氧化物酶(MPO)活性及丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量显著升高(P<0.05),VTA微量注射SNAP94847可显著减轻焦虑模型大鼠胃黏膜炎症损伤(P<0.05);与假损毁+SNAP94847组相比,电损毁+SNAP94847组焦虑模型大鼠CAT活性和GSH-Px含量显著降低(P<0.05),而MPO活性及MDA、TNF-α和IL-6含量显著升高(P<0.05)。结论:VTA-DMV的MCHR信号通路可能参与应激所致焦虑大鼠胃黏膜炎症损伤及焦虑样行为的调控。 展开更多
关键词 腹侧被盖区 迷走神经背侧运动核 黑色素浓集激素受体 SNAP94847 焦虑
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