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人基质金属蛋白酶组织抑制剂1腺相关病毒表达质粒的构建及检测
被引量：
1
1
作者
魏见伟
王德春
胡有谷
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期99-103,共5页
目的构建含人基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases1,TIMP1)的腺相关病毒(adeno associated virus,AAV)表达质粒并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达,为进一步逆转椎间盘退变提供依据。方法以含有人T...
目的构建含人基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases1,TIMP1)的腺相关病毒(adeno associated virus,AAV)表达质粒并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达,为进一步逆转椎间盘退变提供依据。方法以含有人TIMP1基因序列的质粒pBLAST49-hTIMP1为模板,通过PCR的方法扩增出TIMP1基因,再采用分子克隆的方法,把TIMP1克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-TIMP1。把重组质粒转染HEK293细胞,用免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究,ELISA法检测细胞培养上清液中TIMP1蛋白的含量。结果PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的TIMP1基因序列的AAV表达质粒pSNAV2-TIMP1。体外成功转染入HEK293细胞,免疫荧光、Western blot及ELISA的结果表明重组质粒能够高表达TIMP1蛋白。结论成功构建了表达TIMP1的重组质粒pSNAV2-TIMP1,并证实在蛋白质水平获得了表达,为进一步逆转椎间盘退变研究奠定了基础。
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关键词
TIMP-1
腺相关病毒
质粒构建
基因转染
椎间盘
在线阅读
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职称材料
人CTGF和TIMP1基因重组腺相关病毒双表达质粒的构建及其活性检测
2
作者
魏见伟
王德春
胡有谷
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期401-406,共6页
目的构建人结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases1,TI MP1)基因腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)表达质粒,并观察其在HEK293细胞中的表...
目的构建人结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases1,TI MP1)基因腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)表达质粒,并观察其在HEK293细胞中的表达,检测目的蛋白的生物学活性。方法采用PCR技术,分别设计引物扩增所需序列并进行PCR鉴定。再采用分子克隆的方法,以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites,IRES)序列连接CTGF和TI MP1并克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TI MP1。把重组质粒转染HEK293细胞,用双重免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究,MTT法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性,ELISA法检测细胞培养上清液中TI MP1蛋白的含量。结果PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的CTGF和TI MP1基因序列的AAV表达质粒。双重免疫荧光和Western blot检测到目的蛋白的表达,转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性,ELISA法结果证实重组载体能够高表达TI MP1蛋白。结论成功构建了双表达质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TI MP1,转染HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的目的蛋白,为基因治疗椎间盘退变的研究工作奠定了基础。
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关键词
结缔组织生长因子
基质金属蛋白酶组织抑制剂1
基因载体
腺相关病毒
椎间盘
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职称材料
题名
人基质金属蛋白酶组织抑制剂1腺相关病毒表达质粒的构建及检测
被引量：
1
1
作者
魏见伟
王德春
胡有谷
机构
青岛大学医学院附属医院脊柱外科-山东省创伤骨科研究所
出处
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期99-103,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30471750)
文摘
目的构建含人基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases1,TIMP1)的腺相关病毒(adeno associated virus,AAV)表达质粒并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达,为进一步逆转椎间盘退变提供依据。方法以含有人TIMP1基因序列的质粒pBLAST49-hTIMP1为模板,通过PCR的方法扩增出TIMP1基因,再采用分子克隆的方法,把TIMP1克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-TIMP1。把重组质粒转染HEK293细胞,用免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究,ELISA法检测细胞培养上清液中TIMP1蛋白的含量。结果PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的TIMP1基因序列的AAV表达质粒pSNAV2-TIMP1。体外成功转染入HEK293细胞,免疫荧光、Western blot及ELISA的结果表明重组质粒能够高表达TIMP1蛋白。结论成功构建了表达TIMP1的重组质粒pSNAV2-TIMP1,并证实在蛋白质水平获得了表达,为进一步逆转椎间盘退变研究奠定了基础。
关键词
TIMP-1
腺相关病毒
质粒构建
基因转染
椎间盘
Keywords
TIMP-1
adeno associated virus
plasmid construction
gene transfection
intervertebral disc
分类号
R68 [医药卫生—骨科学]
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职称材料
题名
人CTGF和TIMP1基因重组腺相关病毒双表达质粒的构建及其活性检测
2
作者
魏见伟
王德春
胡有谷
机构
青岛大学医学院附属医院脊柱外科-山东省创伤骨科研究所
出处
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期401-406,共6页
基金
国家自然科学基金项目(30471750)
文摘
目的构建人结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases1,TI MP1)基因腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)表达质粒,并观察其在HEK293细胞中的表达,检测目的蛋白的生物学活性。方法采用PCR技术,分别设计引物扩增所需序列并进行PCR鉴定。再采用分子克隆的方法,以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites,IRES)序列连接CTGF和TI MP1并克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TI MP1。把重组质粒转染HEK293细胞,用双重免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究,MTT法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性,ELISA法检测细胞培养上清液中TI MP1蛋白的含量。结果PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的CTGF和TI MP1基因序列的AAV表达质粒。双重免疫荧光和Western blot检测到目的蛋白的表达,转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性,ELISA法结果证实重组载体能够高表达TI MP1蛋白。结论成功构建了双表达质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TI MP1,转染HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的目的蛋白,为基因治疗椎间盘退变的研究工作奠定了基础。
关键词
结缔组织生长因子
基质金属蛋白酶组织抑制剂1
基因载体
腺相关病毒
椎间盘
Keywords
human connective tissue growth factor
tissue inhibitor of metalloproteinases 1
genetic vectors
adeno-associated virus
intervertebral disc
分类号
R68 [医药卫生—骨科学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人基质金属蛋白酶组织抑制剂1腺相关病毒表达质粒的构建及检测
魏见伟
王德春
胡有谷
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
在线阅读
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职称材料
2
人CTGF和TIMP1基因重组腺相关病毒双表达质粒的构建及其活性检测
魏见伟
王德春
胡有谷
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008
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