藏红花素对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制 被引量：13

1

作者 徐慧娟 仲任 +6 位作者 赵艳霞 李学荣 卢愿 宋爱琴 庞秀英 姚如永 孙立荣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期887-892,共6页

本研究探讨藏红花素(crocin)对人急性白血病细胞HL-60增殖抑制的影响及其促凋亡机制。测定HL-60细胞在不同浓度crocin作用后的生长曲线,用荧光显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测... 本研究探讨藏红花素(crocin)对人急性白血病细胞HL-60增殖抑制的影响及其促凋亡机制。测定HL-60细胞在不同浓度crocin作用后的生长曲线,用荧光显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测bcl-2、bax基因的表达。结果表明,不同浓度crocin作用后HL-60细胞生长明显受抑制,并呈现出剂量时间依赖关系。在0-5mg/ml范围内HL-60细胞凋亡率逐渐升高。当crocin浓度高于5mg/ml时,HL-60细胞凋亡率并没有升高,反而下降,表现为细胞坏死。流式细胞术检测结果显示,细胞周期被阻滞于G0/G1,且在5mg/ml时阻滞作用最明显。RT-PCR结果显示,bcl-2基因表达明显下调,bax基因表达上调。结论:crocin可诱导HL-60细胞凋亡,并对细胞周期起阻滞作用,其作用机制可能与bcl-2基因表达抑制及bax基因表达激活有关。 展开更多

关键词 藏红花素 HL-60细胞 细胞凋亡 bcl-2基因 BAX基因

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猫角膜内皮细胞的快速体外培养及其鉴定 被引量：8

2

作者 李东侃 宋跃 +2 位作者 王传富 吕振华 张悦 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2006年第6期581-581,共1页

关键词 角膜内皮细胞 细胞体外培养 神经特异性烯醇化酶 鉴定 养猫 细胞生物学功能 正常生理功能 透射电镜观察

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全反式维甲酸对兔颈动脉粥样硬化病变中C-myc表达及血管平滑肌细胞增生的影响 被引量：6

3

作者 郭琳琳 董果雄 +1 位作者 张社华 王国栋 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期526-529,共4页

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对兔颈动脉粥样硬化病灶中血管内膜的增生、血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、增殖细胞核抗原(PCNA)及原癌基因C-myc表达规律的影响。方法36只新西兰雄性大白兔随机分为3组:正常饮食组、手术组、ATRA治疗组,每组1... 目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对兔颈动脉粥样硬化病灶中血管内膜的增生、血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、增殖细胞核抗原(PCNA)及原癌基因C-myc表达规律的影响。方法36只新西兰雄性大白兔随机分为3组:正常饮食组、手术组、ATRA治疗组,每组12只。手术组和治疗组均给予高脂饮食,2周后用空气干燥法制作颈动脉内膜损伤模型,治疗组于术前3d开始给予ATRA灌胃。于术后1、4周处死动物,取病变血管应用苏木精-伊红染色、免疫组化和计算机图像分析法进行形态学、PCNA和C-myc表达水平的检测。结果①正常动脉壁未见PCNA及C-myc表达;②手术组在术后第1周时内膜开始增生,第4周增生明显,且出现泡沫细胞、脂质核心形成、管腔狭窄;增生内膜中C-myc表达水平增高;③治疗组C-myc的表达明显低于手术组(P<0.05),VSMCs的迁移、增殖、内膜增生和管腔狭窄显著减轻(P<0.05)。④PCNA表达与C-myc表达呈显著正相关(P<0.01)。结论ATRA可通过抑制C-myc表达,抑制VSMCs的迁移和增殖,从而抑制兔颈动脉粥样硬化新生内膜过度增生和管腔狭窄。 展开更多

关键词 全反式维甲酸 内膜增生 兔 颈动脉粥样硬化病 血管平滑肌细胞增生

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铬和镁联合补充对糖耐量异常患者miRNA差异表达的研究 被引量：5

4

作者 张方华 许爱梅 +3 位作者 李盈 王晔 高珊 姚民秀 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第13期2172-2176,共5页

目的探讨铬镁联合补充对糖耐量异常(IGT)人群血糖的影响,观察循环miRNA表达谱的变化,筛查表达差异miRNA。方法选取IGT患者及与其年龄相匹配的糖耐量正常人群。分为:正常对照组、安慰剂对照组、铬镁干预组,干预3个月。测定血糖、胰岛素... 目的探讨铬镁联合补充对糖耐量异常(IGT)人群血糖的影响,观察循环miRNA表达谱的变化,筛查表达差异miRNA。方法选取IGT患者及与其年龄相匹配的糖耐量正常人群。分为:正常对照组、安慰剂对照组、铬镁干预组,干预3个月。测定血糖、胰岛素。二代测序(NGS)技术检测循环miRNA的表达,qPCR技术验证NGS的结果。生物信息学的方法分析差异miRNA相关的信号通路。结果干预后,铬镁干预组FBG、2h PG较安慰剂对照组下降(P<0.05),胰岛素抵抗改善。NGS测序得到了6个差异表达的循环miRNA。qPCR结果表明,miR-182、miR-96-5p和miR-27b的表达趋势与NGS相同。miR-182-5p靶基因的功能富集分析发现与之相关的信号通路是葡萄糖结合通路。与miR-96-5p靶基因相关的信号通路是磷脂酰肌醇信号通路。结论联合补充微量元素铬镁降低IGT患者的血糖,改善胰岛素抵抗。IGT患者miR-182-5p和miR-96-5p表达降低,补充铬镁后可使miR-182-5p和miR-96-5p表达升高。 展开更多

关键词 糖耐量异常 微小RNA 铬(三价) 镁 二代测序

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人淋巴组织中5-HT_(1A)受体的表达 被引量：3

5

作者 孟云霄 纪祥瑞 +3 位作者 李玉军 谢琰臣 魏志敏 隋爱华 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期285-288,共4页

目的　检测 5 HT1A受体蛋白及其mRNA在人淋巴组织中的表达情况 ,寻求神经免疫内分泌网络间功能双向调节的形态学依据。方法　应用免疫组织化学Picture法及核酸分子原位杂交的方法 ,检测 5 HT1A受体蛋白及其mRNA在 10 0例人淋巴结、脾... 目的　检测 5 HT1A受体蛋白及其mRNA在人淋巴组织中的表达情况 ,寻求神经免疫内分泌网络间功能双向调节的形态学依据。方法　应用免疫组织化学Picture法及核酸分子原位杂交的方法 ,检测 5 HT1A受体蛋白及其mRNA在 10 0例人淋巴结、脾脏及肠道淋巴组织中的表达。结果　免疫表型显示 5 HT1A受体蛋白在人各种淋巴组织中表达的阳性率为 86 2 5 % ,与原位杂交 (阳性率为 75 0 % )之间的差异无统计学意义 (χ2 =0 5 70 ,P >0 0 5 )。结论　人的淋巴组织不但可以表达 5 HT1A受体蛋白还可以合成其mRNA ,5 HT1A受体为神经免疫内分泌网络共有的生物学语言媒介 ;神经源性与免疫源性的 5 HT都可以通过免疫细胞膜上的 5 展开更多

关键词 人淋巴组织 5-HT1A受体 检测 5-羟色胺受体1A亚型 免疫组织化学 免疫调节

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钙调神经磷酸酶-T细胞核因子信号通路在应力诱导成肌细胞凋亡中的作用 被引量：2

6

作者 丁弦 夏晨蕾 +8 位作者 贺苗 孙文娜 王芳 姜文心 张彩霞 王爽玉 张强 姚如永 袁晓 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期456-461,共6页

目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)-T细胞核因子(NFAT)信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用。方法构建成肌细胞体外培养—力学刺激模型,利用多通道应力加载系统对细胞加载不同时间的周期性张应力,加入CaN的特异性抑制剂环孢素(CsA)作... 目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)-T细胞核因子(NFAT)信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用。方法构建成肌细胞体外培养—力学刺激模型,利用多通道应力加载系统对细胞加载不同时间的周期性张应力,加入CaN的特异性抑制剂环孢素(CsA)作为对比。采用Hoechst 33258染色法和流式细胞术检测成肌细胞凋亡情况,实时聚合酶链式反应检测CaN和NFAT mRNA的表达情况,蛋白质印迹法检测NFAT3的蛋白含量。结果随加力时间的延长,细胞凋亡逐渐增加,CaN亚基CnA、CnB及NFAT3的mRNA表达及NFAT3蛋白含量逐渐升高;加入CsA后,细胞凋亡减少,CnA、NFAT3的mRNA表达及NFAT3的蛋白含量明显减少。结论周期性张应力可以诱导成肌细胞发生凋亡;CaN-NFAT信号通路可能参与了周期性张应力诱导的成肌细胞凋亡。 展开更多

关键词 成肌细胞 细胞凋亡 钙调神经磷酸酶 T细胞核因子 周期性张应力

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基质金属蛋白酶3基因rs522616多态性与脑梗死亚型的关系 被引量：2

7

作者 范凌燕 邢玉波 +9 位作者 马爱军 王琨 王源 韩莹 姜雪松 伊朋 李翠玲 隋爱华 刘相萍 潘旭东 《中国脑血管病杂志》 CAS 2012年第8期393-397,402,共6页

目的探讨基质金属蛋白酶3(MMP-3)血清水平及其启动子区基因rs522616(-709A/G)多态性与低分子肝素试验病因分型(TOAST)中,大动脉粥样硬化性(LAA)和小动脉闭塞性(SAO)卒中的相关性。方法选取289例急性缺血性卒中(发病≤3d)患者,LAA卒中185... 目的探讨基质金属蛋白酶3(MMP-3)血清水平及其启动子区基因rs522616(-709A/G)多态性与低分子肝素试验病因分型(TOAST)中,大动脉粥样硬化性(LAA)和小动脉闭塞性(SAO)卒中的相关性。方法选取289例急性缺血性卒中(发病≤3d)患者,LAA卒中185例,SAO卒中104例,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清MMP-3水平,聚合酶链反应后直接测序法检测其启动子基因rs522616多态性。结果①LAA组MMP-3血清水平为(245±56)ng/ml,高于SAO组的(227±51)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.01)。②LAA组患者中,MMP-3基因rs522616多态位点AA基因型频率为50.8%,A等位基因频率为71.1%,分别高于SAO组的38.5%和61.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。③多因素Logistic回归分析发现,AA基因型(OR=1.72,95%CI:1.04～2.85)和MMP-3(OR=0.014,95%CI:0.00～0.29)水平增高是LAA型卒中的独立危险因子。结论与SAO性卒中比较,MMP-3血清增高水平及rs522616基因多态性位点AA基因型与LAA性卒中关系更为密切。 展开更多

关键词 卒中 基质金属蛋白酶类 多态性 单核苷酸 TOAST分型

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趋化因子CXCL16基因A181V多态性与TOAST分型的相关性研究 被引量：3

8

作者 宋双 潘旭东 +3 位作者 马爱军 马翠苓 王琨 姚如永 《中国卒中杂志》 2012年第2期91-97,共7页

目的探讨趋化因子CXC配体1 6(chemokine CXC ligand 1 6,CXCL16)基因A181V位点多态性与血清CXCL16水平、脑梗死(cerebral infarction,CI)及急性卒中治疗低分子肝素试验病因分型法(the Trialof Org 10172 in Acute Stroke Treatment,TOA... 目的探讨趋化因子CXC配体1 6(chemokine CXC ligand 1 6,CXCL16)基因A181V位点多态性与血清CXCL16水平、脑梗死(cerebral infarction,CI)及急性卒中治疗低分子肝素试验病因分型法(the Trialof Org 10172 in Acute Stroke Treatment,TOAST)分型的关系。万法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(polymerase chain reaction-restrictionfragment length polymorphism,PCR-RFLP)检测基因型,同时对脑梗死急性期患者(n=177)和对照组(查体中心老年健康查体者,n=74)应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清CXCL16水平。结果 CI组血清CXCL16水平明显高于对照组(P<0.001);按TOAST分型后比较,大动脉粥样硬化性卒中(1arge artery atherosclerotic stroke,LAA)组、小动脉闭塞性卒中(small artery occlusion stroke,SAO)组及对照组三组之间血清CXCL1 6水平差异仍有显著统计学意义(P<0.001);Logistic回归显示血清CXCL16水平是CI的独立危险因素(P<0.001)。CXCL16基因A181V多态性位点基因型频率及等位基因频率在CI组和对照组之间无显著差异(P>0.05),但是TOAST分型后显示AA纯合子比G等位基因携带者(GA+GG)发生大动脉粥样硬化性卒中的危险增加(P<0.001)。多元线性回归显示,CXCL16基因A181V多态性与血清CXCL16水平独立相关(P=0.009)。结论 CXCL16基因A181V多态性与血清CXCL16水平有关,AA基因型与大动脉粥样硬化性卒中密切相关,A等位基因是大动脉粥样硬化严重程度的重要标志。 展开更多

关键词 趋化因子 基因多态性 脑梗死 TOAST分型

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三磷酸腺苷后处理对兔心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究 被引量：2

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作者 王芳 廉哲勋 +1 位作者 李妮妮 姚如永 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2012年第12期1308-1311,共4页

目的观察ATP后处理对再灌注损伤挽救激酶信号通路中的蛋白激酶B(Akt)及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达的影响,探讨ATP后处理的心血管保护效应及可能机制。方法选择48只健康新西兰白兔,随机分为缺血再灌注组(再灌注组)、ATP后处理组(后... 目的观察ATP后处理对再灌注损伤挽救激酶信号通路中的蛋白激酶B(Akt)及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达的影响,探讨ATP后处理的心血管保护效应及可能机制。方法选择48只健康新西兰白兔,随机分为缺血再灌注组(再灌注组)、ATP后处理组(后处理组)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂Wortmannin+ATP后处理组(Wortmannin+ATP组)、ERK1/2抑制剂PD98059+ATP后处理组(PD98059+ATP组),每组12只。建立兔急性心肌缺血再灌注模型。实验终点检测各组心肌梗死面积、细胞凋亡指数,Western blot法检测心肌p Akt,p ERK1/2蛋白表达。结果后处理组心肌梗死面积、细胞凋亡指数明显低于再灌注组(P<0.01)。Western blot检测显示,后处理组p-Akt、p-ERK1/2表达水平明显高于再灌注组(P<0.05)。结论 ATP后处理可以减轻兔缺血再灌注心肌的梗死面积,降低细胞凋亡指数,同时上调p Akt和p-ERK1/2的表达,提示PI3K/Akt及ERK1/2信号通路参与了ATP后处理对兔缺血再灌注心肌的保护作用。 展开更多

关键词 心肌缺血 腺苷三磷酸 再灌注损伤 蛋白激酶类 细胞外信号调节MAP激酶类 细胞凋亡

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TIMP-2基因转染FDM豚鼠模型早期后极部巩膜中MMP-2的动态表达 被引量：1

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作者 李勇子 刘桂香 +3 位作者 王玲 隋爱玲 郭强强 万鲁芹 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第12期1104-1109,共6页

目的通过对形觉剥夺性近视豚鼠模型脉络膜上腔注射外源性组织金属蛋白酶抑制剂-2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-2)基因,观察近视早期后极部巩膜中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达,探... 目的通过对形觉剥夺性近视豚鼠模型脉络膜上腔注射外源性组织金属蛋白酶抑制剂-2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-2)基因,观察近视早期后极部巩膜中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达,探讨外源性TIMP-2基因对后极部巩膜MMP-2表达的影响。方法采用单眼遮盖法对3周龄三色豚鼠进行形觉剥夺,2周后从模型建立成功的豚鼠中随机选取60只,随机分成4组,分别为TIMP-2组(脉络膜上腔注射外源性TIMP-2质粒)、空质粒组(脉络膜上腔注射空质粒)、生理盐水组(脉络膜上腔注射生理盐水)、对照组,每组15只。TIMP-2组、空质粒组、生理盐水组对右眼完成注射操作后继续遮盖,其中TIMP-2组左眼为自身对照组;对照组右眼持续遮盖不做任何处理。分别于注射后2d、7d、14d采集后极部巩膜标本,用RT-PCR及Western blot法检测MMP-2 mRNA、TIMP-2 mRNA及MMP蛋白的表达,统计分析各组之间不同时间的表达差异。结果 TIMP-2组注射后2d与7dMMP-2 mRNA及蛋白表达变化差异有统计学意义(均为P<0.05),7d与14d表达差异无统计学意义(均为P>0.05)。注射后2d、7d、14d,TIMP-2组与自身对照组、对照组之间比较,MMP-2 mR-NA及蛋白的表达变化均有统计学意义(均为P<0.05);空质粒组、生理盐水组、对照组之间比较,差异无统计学意义(均为P>0.05)。TIMP-2组注射后2d与7dTIMP-2 mRNA表达变化差异有统计学意义(P<0.05),7d与14d差异无统计学意义(均为P>0.05)。注射后2d、7d、14dTIMP-2组与自身对照组、对照组之间比较,TIMP-2 mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05);空质粒组、生理盐水组、对照组之间比较,TIMP-2 mRNA表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论外源性TIMP-2基因转染能明显抑制形觉剥夺性近视眼后极部巩膜MMP-2 mRNA及蛋白的表达,这种改变早期就已经开始发生,随着转染时间的延长出现先降低后增高的变化。 展开更多

关键词 形觉剥夺性近视 巩膜 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶组织抑制剂

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人同源盒基因HoxB4真核表达载体的构建及鉴定

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作者 李田兰 赵春亭 +4 位作者 张忠广 刘竹珍 刘世海 孟冬梅 张元峰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期721-724,共4页

本研究旨在构建人同源盒基因HoxB4真核表达载体并进行鉴定,为进一步研究HoxB4的作用提供物质基础。采用RT-PCR的方法从健康产妇脐血单个核细胞中扩增出该基因,并将HoxB4的PCR产物用EcoRI和BamHI双酶切后连接到用EcoRI和BamHI双酶切的带... 本研究旨在构建人同源盒基因HoxB4真核表达载体并进行鉴定,为进一步研究HoxB4的作用提供物质基础。采用RT-PCR的方法从健康产妇脐血单个核细胞中扩增出该基因,并将HoxB4的PCR产物用EcoRI和BamHI双酶切后连接到用EcoRI和BamHI双酶切的带有EGFP编码序列和内部核糖体转入位点(IRES)的真核表达载体pIRES2-EGFP中,重组质粒在大肠杆菌DH5α内扩增后,对其进行双酶切及测序鉴定以证实载体构建成功。结果表明,双酶切和质粒测序结果证明HoxB4基因正确的连接到真核表达载体pIRES2-EGFP中,开放阅读框架正确,pIRES2-EGFP/HoxB4真核表达载体构建成功。结论 :利用PCR,DNA重组等分子生物学技术,成功构建了pIRES2-EGFP/HoxB4真核表达载体,为探讨HoxB4基因在造血干细胞的增殖和分化的调控功能提供了实验基础。 展开更多

关键词 同源盒基因 HOXB4 重组质粒 真核表达载体

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初发免疫性血小板减少症患者外周血中维生素D及其受体mRNA的表达水平和意义 被引量：5

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作者 穆玮 王伟 +1 位作者 崔中光 隋爱华 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期684-687,共4页

为了探讨维生素D(VD)对初发免疫性血小板减少症(ITP)发病与治疗的作用,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测45例初发ITP患者和30例健康体检者外周血中25羟基维生素D3[25(OH)D3]和1,25-二羟基D3[1,25(OH)2D3]的浓度,利用逆转录一聚合酶链反... 为了探讨维生素D(VD)对初发免疫性血小板减少症(ITP)发病与治疗的作用,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测45例初发ITP患者和30例健康体检者外周血中25羟基维生素D3[25(OH)D3]和1,25-二羟基D3[1,25(OH)2D3]的浓度,利用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法检测患者外周血VD受体(VDR)mRNA表达水平。研究结果表明,ITP患者外周血中25(OH)D3(10.6±7.7 ng/ml)和1,25(OH)2D3(69.9±29.0 pg/ml)的浓度明显低于健康对照组(13.7±9.1 ng/ml,87.3±19.9 pg/ml)(P<0.05),而VDR mRNA的表达(1.588±0.127)明显高于健康对照组(1.055±0.734)(P<0.05)。结论:VD水平及其受体的表达异常可能参与了ITP的发病,VD及类似物可用于ITP的治疗。 展开更多

关键词 血小板减少症 免疫性 维生素D受体

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人同源盒基因HOXB4慢病毒载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达(英文) 被引量：4

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作者 乔艳 赵春亭 +3 位作者 刘竹珍 冯献启 王丽 刘世海 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期703-709,共7页

本研究构建人同源盒基因(homeobox gene)HOXB4的慢病毒载体,探讨慢病毒介导的HOXB4感染人脐带间充质干细胞后的变化。利用PCR扩增获得HOXB4,并克隆入慢病毒穿梭载体lenti-shuttle;运用4质粒慢病毒包装系统转染HEK293T细胞,48 h收获慢病... 本研究构建人同源盒基因(homeobox gene)HOXB4的慢病毒载体,探讨慢病毒介导的HOXB4感染人脐带间充质干细胞后的变化。利用PCR扩增获得HOXB4,并克隆入慢病毒穿梭载体lenti-shuttle;运用4质粒慢病毒包装系统转染HEK293T细胞,48 h收获慢病毒lenti-HOXB4,并测定慢病毒滴度;将lenti-HOXB4感染人脐带间充质干细胞,在倒置荧光显微镜下观察细胞感染效果,确定最佳的病毒感染复数(MOI);同时,利用RT-PCR、免疫荧光染色、CCK-8、流式细胞术检测HOXB4的表达情况及对细胞生长的影响。结果表明:利用四质粒共转染293T细胞,成功获得lenti-HOXB4,测定的病毒滴度为3×108TU/ml;当MOI为20时,lenti-HOXB4对人脐带间充质干细胞具有较高的转染效率,达80%以上;感染lenti-HOXB4的人脐带间充质干细胞,在mRNA和蛋白水平上均检测到了目的基因的表达,其能促进脐带间充质干细胞的增殖;流式细胞术检测结果显示,HOXB4基因并未明显影响间充质干细胞的表面标志。结论:成功获得带有HOXB4基因的慢病毒并实现在脐带间充质干细胞中表达,HOXB4基因能促进脐带间充质干细胞的大量增殖,并未明显影响脐带间充质干细胞表面标志的表达。 展开更多

关键词 HOXB4 人脐带间充质干细胞 慢病毒载体

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p38丝裂素活化蛋白激酶信号通路在应力调控成肌细胞分化中的作用 被引量：3

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作者 李菲菲 阎潇 +3 位作者 王庆 曲竹丽 袁晓 郭杰 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期574-578,共5页

目的研究在C2C12细胞成肌分化过程中应力对丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路中p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响。方法将6孔Bio Flex培养板上贴壁培养的C2C12细胞,以0.5 Hz的加载频率和10%的细胞拉伸变形幅度,分别进行... 目的研究在C2C12细胞成肌分化过程中应力对丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路中p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响。方法将6孔Bio Flex培养板上贴壁培养的C2C12细胞,以0.5 Hz的加载频率和10%的细胞拉伸变形幅度,分别进行拉伸培养2、6、12、24 h,应用Western blot免疫印迹检测总p38和磷酸化p-p38(Thr180/Tyr182)蛋白的表达情况。结果周期性机械拉伸在调控C2C12成肌细胞分化过程中,p38MAPK信号通路被激活。p38MAPK信号通路蛋白磷酸化水平在较高水平;而p38MAPK通路总蛋白表达维持在一基线水平,各组之间差异无统计学意义。加入p38MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580后再加力,Myogenin的表达明显降低。结论p38MAPK信号通路在应力介导的C2C12成肌细胞分化过程中发挥重要作用,但不是这一调控过程的唯一通路。 展开更多

关键词 P38丝裂素活化蛋白激酶 分化 成肌细胞

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直接转染HOXB4基因和转染HOXB4基因的脐带间充质干细胞体外扩增人脐血CD34＋细胞的研究 被引量：2

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作者 贺艳霞 赵春亭 +6 位作者 王丽 刘竹珍 吴少玲 冯献启 苏湛 隋爱华 刘晓丹 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1578-1584,共7页

本研究探讨直接转染HOXB4基因和转染HOXB4基因的人脐带间充质干细胞体外扩增人脐血CD34+细胞中有核细胞数、CD34+细胞比例与扩增倍数、细胞周期及集落形成能力的异同。将人脐带间充质干细胞(HUCMSC)分为2组,1组利用慢病毒载体将HOXB4基... 本研究探讨直接转染HOXB4基因和转染HOXB4基因的人脐带间充质干细胞体外扩增人脐血CD34+细胞中有核细胞数、CD34+细胞比例与扩增倍数、细胞周期及集落形成能力的异同。将人脐带间充质干细胞(HUCMSC)分为2组,1组利用慢病毒载体将HOXB4基因转染至HUCMSC并建立滋养层(HOXB4-HUCMSC),另1组建立未转染的滋养层(HUCMSC)。应用免疫磁珠分选系统(MACS)分选出人脐血CD34+细胞,在含细胞因子的培养液中培养48 h后分5组,其中对照组2组:A组CD34+细胞(CD34+cells)为空白对照组,B组空病毒转染CD34+细胞(GFP-CD34+cells)为阴性对照组;实验组共3组:直接转染HOXB4基因组(HOXB4-CD34+cells)为C组;HUCMSC滋养层组(HUCMSC+CD34+cells)为D组;HOXB4-HUCMSC滋养层组(HOXB4-HUCMSC+CD34+cells)为E组。于培养第6、10、14 d计数有核细胞数(NC),第10 d比较不同处理条件对CD34+细胞比例、细胞周期与集落形成能力的影响。结果表明,利用慢病毒载体可将HOXB4基因转染至HUCMSC并检测到表达,成功建立了HUCMSC与HOXB4-HUCMSC滋养层。经过14 d体外培养,5组有核细胞均得到显著扩增,比较表明,其效果依次为HOXB4-HUCMSC滋养层组>直接转染HOXB4基因组>HUCMSC滋养层组>2对照组(P<0.05)。在体外扩增第10 d,5组有核细胞CD34+比例均大幅下降,经计算实验组CD34+细胞扩增倍数较第0 d显著增高,经比较显示,CD34+细胞比例与扩增倍数高低依次为直接转HOXB4基因组>HOXB4-HUCMSC滋养层组>HUCMSC滋养层组>两对照组(P<0.05);流式细胞仪分析细胞周期表明,实验组的S+G2/M期比例较对照组高,其中HOXB4-HUCMSC滋养层组比例最高,为41.57%,高于直接转染HOXB4基因的37.87%与HUCMSC的滋养层组的28.65%(P<0.05)。HOXB4-HUCMSC滋养层组与直接转HOXB4基因组的集落形成能力无差别,但均高于HUCMSC滋养层组与对照组。结论:HOXB4-HUCMSC滋养层可显著扩增CD34+细胞并可保持其干细胞活性,与直接转染HOXB4基因的CD34+细胞可能产生的潜在致病性基因插入和致突变性风险相比较,HOXB4-HUCMSC滋养层对CD34+细胞的体外扩增相对更安全,有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 脐血 脐带间充质干细胞 CD34+细胞 日删基因 体外扩增

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