左卡尼汀对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞保护作用的实验研究 被引量：14

1

作者 于常红 韩彦弢 +6 位作者 曹玉 安明 时肖 杨军廷 焦俊 李胜 王春波 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1502-1505,共4页

目的研究左卡尼汀对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用。方法通过STZ诱导建立I型糖尿病大鼠模型,成模后采用灌胃方式给予不同剂量的左卡尼汀口服液,6周后行电镜观察,比较疾病模型组与治疗组之间视网膜节细胞的超微结构变化,并进行DN... 目的研究左卡尼汀对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用。方法通过STZ诱导建立I型糖尿病大鼠模型,成模后采用灌胃方式给予不同剂量的左卡尼汀口服液,6周后行电镜观察,比较疾病模型组与治疗组之间视网膜节细胞的超微结构变化,并进行DNA末端转移酶介导缺口末端标记(TUNEL)染色,观察细胞的凋亡情况。结果电镜显示药物治疗组神经节细胞核异染色质及线粒体空泡化较对照组减少,200 mg·kg-1的治疗剂量效果优于100 mg·kg-1组(P<0.05)。药物治疗组减少了由糖尿病导致的视网膜神经节细胞的凋亡数目(P<0.05)。结论左卡尼汀对糖尿病大鼠模型视网膜节细胞具有保护作用,抗凋亡可能是作用机制之一。 展开更多

关键词 左卡尼汀 糖尿病视网膜病变 电镜 凋亡 视网膜神 经节细胞 大鼠

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C-PC抑制ox-LDL诱导内皮细胞脂质过氧化损伤的机制研究 被引量：12

2

作者 褚现明 王妮 +3 位作者 孙雪霞 李冰 安毅 徐庆科 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期588-589,共2页

氧化型低密度脂蛋白（ oxidized low density lipoprotein, ox-LDL）是诱导动脉血管内皮细胞凋亡的重要因素[3],内皮细胞保护是动脉粥样硬化防治的关键环节[1-3]。研究提示天然海洋药物--螺旋藻藻蓝蛋白（ C-Phycocyanin,C-PC）具有独... 氧化型低密度脂蛋白（ oxidized low density lipoprotein, ox-LDL）是诱导动脉血管内皮细胞凋亡的重要因素[3],内皮细胞保护是动脉粥样硬化防治的关键环节[1-3]。研究提示天然海洋药物--螺旋藻藻蓝蛋白（ C-Phycocyanin,C-PC）具有独特的抗动脉粥样硬化疗效[4-5],因此本研究旨在构建血管内皮细胞损伤模型,探讨C-PC在血管内皮细胞脂质过氧化损伤中所起的保护作用。 展开更多

关键词 藻蓝蛋白 内皮细胞 氧化型低密度脂蛋白 脂质过氧化 小鼠 动脉粥样硬化

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钝顶螺旋藻藻蓝蛋白诱导HeLa细胞凋亡的分子机制研究 被引量：16

3

作者 李冰 褚现明 +1 位作者 高美华 张学成 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1045-1050,共6页

目的探讨钝顶螺旋藻（Spirulina platensis）藻蓝蛋白（C-phycocyanin,CPC）对体外人宫颈癌细胞（HeLa细胞）凋亡的影响及分子机制。方法首先通过MTT法检测藻蓝蛋白对HeLa细胞增殖的影响,然后通过电镜观察藻蓝蛋白处理后的细胞的凋亡形... 目的探讨钝顶螺旋藻（Spirulina platensis）藻蓝蛋白（C-phycocyanin,CPC）对体外人宫颈癌细胞（HeLa细胞）凋亡的影响及分子机制。方法首先通过MTT法检测藻蓝蛋白对HeLa细胞增殖的影响,然后通过电镜观察藻蓝蛋白处理后的细胞的凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA结构变化,流式细胞仪显示不同浓度藻蓝蛋白对HeLa细胞的细胞周期变化的影响,免疫组化法检测藻蓝蛋白对细胞表面凋亡相关基因表达的影响,检测凋亡相关的caspase的活性及细胞色素C的释放,以揭示藻蓝蛋白诱导HeLa细胞凋亡的作用机制。结果与未用藻蓝蛋白作用的对照组相比,藻蓝蛋白组的HeLa细胞存活率明显降低,并存在浓度剂量效应。藻蓝蛋白处理后的细胞呈现典型的凋亡形态,如细胞皱缩、细胞膜微绒毛消失、起泡,染色体密集,形成凋亡小体。凋亡细胞的DNA出现断裂,呈梯状的电泳带（DNAladder）,分子量为180~200 bp及其倍体。并且发现藻蓝蛋白处理后的处于亚二倍体峰HeLa细胞数蛋白浓度随藻蓝蛋白浓度的增高而明显增多。另外藻蓝蛋白能促进HeLa细胞内促凋亡基因（Fas、ICAM-1）的表达并抑制抗凋亡基因（Bcl-2）的表达,从而促进细胞内凋亡信号的传导。藻蓝蛋白可以激活caspase酶并可促进凋亡蛋白——细胞色素C从线粒体到细胞质释放。结论钝顶螺旋藻藻蓝蛋白具有诱导体外HeLa细胞凋亡的作用,通过促进凋亡信号在HeLa细胞内的传导从而达到抗肿瘤的效果。 展开更多

关键词 钝顶螺旋藻 藻蓝蛋白 HELA细胞 细胞凋亡 抗肿瘤 信号传导

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藻蓝蛋白抑制血管平滑肌细胞过度增殖性管腔狭窄的机制研究 被引量：10

4

作者 褚现明 冷敏 +5 位作者 安毅 李冰 李丹 李永红 徐庆科 李健 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1383-1388,共6页

目的联合体内外实验,探讨钝顶螺旋藻藻蓝蛋白(C-PC)抑制血管平滑肌细胞过度增殖、血管损伤后内膜增生和管腔狭窄的作用和机制。方法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用不同浓度的藻蓝蛋白进行干预,用氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)参入率... 目的联合体内外实验,探讨钝顶螺旋藻藻蓝蛋白(C-PC)抑制血管平滑肌细胞过度增殖、血管损伤后内膜增生和管腔狭窄的作用和机制。方法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用不同浓度的藻蓝蛋白进行干预,用氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)参入率检测血管平滑肌细胞DNA合成和增殖状态,用Western blot和图像分析方法检测细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子P21、P27的表达。构建大鼠胸主动脉球囊损伤后再狭窄动物模型,用藻蓝蛋白进行灌胃干预,术后14d取胸主动脉应用HE染色、免疫组化和计算机图像分析仪进行形态学、肌动蛋白(SM-α-actin)、增殖细胞核抗原(PCNA)、P21、P27表达水平检测。结果胎牛血清诱导的血管平滑肌细胞增殖活跃,P21、P27低表达;藻蓝蛋白明显促进P21、P27蛋白表达,明显抑制胎牛血清诱导的血管平滑肌细胞增殖和DNA合成。大鼠胸主动脉球囊损伤后,平滑肌细胞向内膜迁移、过度增殖、形成明显的新生内膜,导致管腔狭窄,SM-α-actin免疫组化证实新生内膜富含平滑肌细胞,PCNA高表达的同时P21、P27处于低表达水平;藻蓝蛋白干预后明显促进P21、P27基因表达,下调PCNA表达,抑制新生内膜形成、病理性血管重构,从而明显抑制管腔狭窄。结论钝顶螺旋藻藻蓝蛋白具有抑制血管平滑肌细胞过度增殖、血管损伤后管腔狭窄的作用,其机制与促进细胞周期关键调节因子P21、P27基因表达有关。 展开更多

关键词 藻蓝蛋白 血管平滑肌细胞 P21 P27 细胞周期 球囊损伤 再狭窄

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川穹嗪对AngⅡ诱导的大鼠心肌肥大细胞JAK-STAT通路作用 被引量：10

5

作者 高美华 张丽 +2 位作者 李冰 任书荣 张蓓 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期519-521,524,共4页

目的:研究川穹嗪对心肌肥大JAK-STAT通路的影响。方法:建立心肌肥大动物模型,分离培养新生大鼠心肌细胞,利用RT-PCR检测试验组和对照组基因ANP相对水平、Western blot检测试验组和对照组心肌肥大信号转导途径分子pJAK2、pJAK1、pSTAT3,... 目的:研究川穹嗪对心肌肥大JAK-STAT通路的影响。方法:建立心肌肥大动物模型,分离培养新生大鼠心肌细胞,利用RT-PCR检测试验组和对照组基因ANP相对水平、Western blot检测试验组和对照组心肌肥大信号转导途径分子pJAK2、pJAK1、pSTAT3,并进行统计学分析。结果:川芎嗪可显著抑制ANP mRNA的表达(P<0.01),可明显抑制JAK2 JAK1 STAT3的表达(P<0.01)。结论:川穹嗪能干扰大鼠心肌肥大JAK-STAT信号转导通路,为中药干扰JAK-STAT信号转导通路治疗心肌肥大奠定基础。 展开更多

关键词 心肌 肥大 JAK-STAT 信号转导

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藻蓝蛋白介导光动力疗法在乳腺癌治疗中的机制研究 被引量：12

6

作者 李冰 褚现明 +1 位作者 高美华 徐颖婕 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期383-389,共7页

目的探讨藻蓝蛋白介导的光动力学疗法在乳腺癌治疗中的机制。方法将MCF-7细胞接种于小鼠肋缘皮下脾区构建乳腺癌小鼠模型。小鼠分成4组:对照组、He-Ne激光照射组、藻蓝蛋白处理组、光动力学治疗组(PDT组)。10d后检测瘤块重量,NK细胞活性... 目的探讨藻蓝蛋白介导的光动力学疗法在乳腺癌治疗中的机制。方法将MCF-7细胞接种于小鼠肋缘皮下脾区构建乳腺癌小鼠模型。小鼠分成4组:对照组、He-Ne激光照射组、藻蓝蛋白处理组、光动力学治疗组(PDT组)。10d后检测瘤块重量,NK细胞活性和T细胞增殖活性。取瘤块制成石蜡包埋切片,采用原位核酸杂交技术、免疫组织化学技术检测组织细胞内凋亡相关蛋白的表达。体外培养的MCF-7细胞也相应分成4组,通过MTT法、电镜和免疫荧光技术检测细胞增殖活性、细胞形态、细胞色素C表达量的变化。结果与对照组相比,激光照射组各检测指标均无明显差异,而藻蓝蛋白处理组中NK细胞和T细胞的增殖活性有所增强,肿瘤组织细胞内抗凋亡蛋白(Fas)表达量明显增多,而瘤块的重量、肿瘤形成率和抗凋亡蛋白(p53、NF-κB、CD44)明显减少,如果藻蓝蛋白结合激光治疗发现各检测指标与对照组比较差异更为明显。体外试验证实藻蓝蛋白能抑制MCF-7细胞的增殖,促进细胞色素C的释放,电镜下细胞呈现典型的凋亡形态,用光动力学方法处理后效果更为明显。结论藻蓝蛋白可以作为一种光敏剂,其介导的光动力学疗法通过增强机体的免疫力同时启动乳腺癌细胞内的凋亡信号转导通路诱导细胞凋亡,从而达到杀死肿瘤的目的。 展开更多

关键词 藻蓝蛋白 HE-NE激光 光动力学疗法 MCF-7细胞 细胞凋亡 机制

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海兔素对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响 被引量：11

7

作者 刘颖 梁惠 +2 位作者 苏爱 贺娟 于红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期333-337,共5页

目的研究海兔素(Aplysin)对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法MTT法测定海兔素对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞生长状态的变化;HE染色检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测SGC-7901细胞中COX-2mRNA的表达。结果经60... 目的研究海兔素(Aplysin)对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法MTT法测定海兔素对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞生长状态的变化;HE染色检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测SGC-7901细胞中COX-2mRNA的表达。结果经60、120、240、480mg.L-1海兔素作用24、48h后,SGC-7901细胞的生长增殖均明显受到抑制,呈量效依赖性。延长作用时间,抑制作用差异无显著性(P>0.05);120、240mg·mL-1海兔素作用24h后,细胞生长状态明显下降;经120、240mg·mL-1海兔素处理18h后,细胞凋亡率分别为(15.0±2.12)%和(18.4±2.30)%,与对照组(1.4±0.55)%比较差异均有显著性(P<0.05);60、120、240mg·mL-1海兔素处理24h后,SGC-7901细胞COX2mRNA水平有下调趋势,但差异无显著性(P>0.05)。结论海兔素对人胃癌SGC-7901细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。 展开更多

关键词 海兔素 萜 SGC-7901细胞 MTT 凋亡 RT-PCR 环氧合酶-2

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藻蓝蛋白协同全反式维甲酸影响人宫颈癌HeLa细胞的增殖和凋亡 被引量：2

8

作者 李冰 杨帆 +3 位作者 吕丛仪 杨鹏 刘媛 李仁飞 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期516-520,共5页

目的:探讨全反式维甲酸(all-transretinoic acid,ATRA)和钝顶螺旋藻藻蓝蛋白(C-phycocyanin,C-PC)联合用药对人宫颈癌HeLa细胞繁殖和凋亡的影响及其诱导细胞凋亡可能的分子机制。方法:实验分4组:对照组,C-PC组,ATRA组,C-PC+ATRA联合用... 目的:探讨全反式维甲酸(all-transretinoic acid,ATRA)和钝顶螺旋藻藻蓝蛋白(C-phycocyanin,C-PC)联合用药对人宫颈癌HeLa细胞繁殖和凋亡的影响及其诱导细胞凋亡可能的分子机制。方法:实验分4组:对照组,C-PC组,ATRA组,C-PC+ATRA联合用药组。MTT法检测ATRA和C-PC单独及联合用药对HeLa细胞增殖的影响并计算它们的IC50,TUNEL法检测单独及联合用药后HeLa细胞凋亡情况,免疫组化法检测Bcl-2的表达,Westren blotting法检测Caspase-3的表达。结果:ATRA和C-PC均具有抑制HeLa细胞增殖的作用,IC50分别为(0.158±0.036)mmol/L和(192.75±5.79)μg/L。采用不同浓度的ATRA分别联合40或80μg/L C-PC处理HeLa细胞,ATRA的IC50分别为(0.095±0.007)mmol/L和(0.062±0.004)mmol/L,明显低于ATRA单独用药时的IC50值;当达到相同的抑制率时,联合C-PC用药可以显著降低ATRA的使用剂量。与对照组相比,两种药物单独用药增加了HeLa细胞凋亡水平(IODC-PC=63.12,IODATRA=59.98,P<0.05);当两种药物联合用药时,凋亡水平增加更加显著(IOD=89.52,P<0.01)。两药联合使用后HeLa细胞显著下调Bcl-2和上调Caspase-3的表达水平(均P<0.01)。结论:ATRA和C-PC联合用药可抑制HeLa细胞增殖和诱导其凋亡,其分子机制可能是通过抑制Bcl-2表达、促进Caspase-3表达来实现的。 展开更多

关键词 全反式维甲酸 藻蓝蛋白 宫颈癌 HELA细胞 凋亡 增殖抑制

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四种中药单体作为肿瘤细胞疫苗佐剂的体外筛选研究 被引量：2

9

作者 张丽娜 王爽 +4 位作者 刘泽媛 张丽 李玲 胡明 王斌 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期504-508,共5页

目的:初步从细胞水平检测原花青素、天麻素、黄芩素、芹菜素四种中药单体对抗原提呈细胞RAW264.7和DC2.4的免疫刺激活性,为肿瘤细胞疫苗佐剂筛选和应用提供理论基础。方法:以LPS作为阳性对照,不同种类、不同浓度的中药单体分别刺激RAW26... 目的:初步从细胞水平检测原花青素、天麻素、黄芩素、芹菜素四种中药单体对抗原提呈细胞RAW264.7和DC2.4的免疫刺激活性,为肿瘤细胞疫苗佐剂筛选和应用提供理论基础。方法:以LPS作为阳性对照,不同种类、不同浓度的中药单体分别刺激RAW264.7和DC2.4细胞系,48 h后用抗体染色,通过流式细胞仪检测两种细胞表面CD80、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ分子的表达量。结果:实验结果显示不同种类、不同浓度的中药单体分别刺激RAW264.7和DC2.4细胞后,细胞表面CD80、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ分子不同程度表达上调,原花青素和黄芩素在细胞水平具有较强的免疫刺激活性。结论:原花青素、黄芩素是两种具有潜在应用价值的肿瘤细胞疫苗佐剂。 展开更多

关键词 中药单体 原花青素 黄芩素 免疫活性 筛选 佐剂

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融合蛋白M-IL-2(^(88)Arg,^(125)Ala)在毕赤酵母中的表达及抗肿瘤活性研究

10

作者 李林 钱冬萌 +4 位作者 邵光灿 闫志勇 宋旭霞 陈豪 王斌 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第2期47-53,共7页

构建融合基因蜂毒肽(melittin)与人变构白介素2(M-IL-2(88Arg,125Ala))毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA/M-IL-2(88Arg,125Ala),转化毕赤酵母菌株KM71H,甲醇诱导筛选出的多拷贝阳性菌株表达融合蛋白,纯化融合蛋白,并进行初步的抗肿瘤活... 构建融合基因蜂毒肽(melittin)与人变构白介素2(M-IL-2(88Arg,125Ala))毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA/M-IL-2(88Arg,125Ala),转化毕赤酵母菌株KM71H,甲醇诱导筛选出的多拷贝阳性菌株表达融合蛋白,纯化融合蛋白,并进行初步的抗肿瘤活性研究。经测序及PCR鉴定,M-IL-2(88Arg,125Ala)正确插入pPICZαA中,电转化后,重组载体通过同源重组整合到酵母基因组中,SDS-PAGE检测在26 ku左右有明显目的条带,与理论相符。经Western blot鉴定具有较高抗原性及特异性。BCA法测定甲醇诱导96 h融合蛋白表达量达315.2 mg/L。CCK-8法检测融合蛋白对人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞生长抑制作用,表明纯化的融合蛋白在体外能抑制人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞的生长增殖。该研究为融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)大规模制备和动物实验以及临床前期研究奠定了基础。 展开更多

关键词 M-IL-2(88Arg 125Ala) 毕赤酵母 表达 纯化 抗肿瘤活性

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HCMV基因在人和小鼠胚胎成纤维细胞中表达的差异性研究

11

作者 杨瑞 王斌 +6 位作者 钱冬萌 李玲 周雯 王桐梅 胡明 陈豪 宋旭霞 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2013年第5期25-31,共7页

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)种属特异性机制尚不清楚。研究通过检测HCMV AD169体外感染人胚胎成纤维细胞(Human embryo fibroblast,HEF)和小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)后病毒基因的表达情况,探讨HCM... 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)种属特异性机制尚不清楚。研究通过检测HCMV AD169体外感染人胚胎成纤维细胞(Human embryo fibroblast,HEF)和小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)后病毒基因的表达情况,探讨HCMV种属特异性的可能分子机制。首先用HCMV AD169(MOI=5)分别感染HEF和MEF,相差显微镜逐日观察细胞的形态学变化;RT-PCR检测HCMV即刻早期(IE1、IE2)、早期(UL84)和晚期基因(UL83)的表达情况;Western-blot和免疫荧光检测病毒基因编码蛋白表达的情况。形态学观察发现HEF感染HCMV后逐渐变大变圆并相互融合,第4天可见典型的HCMV特征性病变效应,而MEF则未出现上述的变化;RT-PCR和Western-blot表明HEF组表达即刻早期基因IE1和IE2、早期基因UL84和晚期基因UL83 mRNA以及各基因所编码的蛋白,且相对表达量显著高于模拟感染组(P﹤0.01);而MEF组仅IE1和IE2 mRNA和蛋白相对表达量显著低于HEF组(P﹤0.05),而高于模拟感染组(P﹤0.01)。免疫荧光检测发现HEF感染72 h表达IE和UL83蛋白,而MEF则无明显表达。以上结果表明,HCMV不能在MEF中复制并产生完整子代病毒颗粒,且病毒基因表达阻止在IE2基因表达之后和UL84基因表达之前,其种属特异性可能与即刻早期蛋白低水平的表达量有关。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 人胚胎成纤维细胞 鼠胚胎成纤维细胞 即刻早期基因

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海洋低温溶菌酶对人脐静脉内皮细胞超微结构的影响

12

作者 苏爱 王振华 +1 位作者 刘金成 王春波 《电子显微学报》 CAS CSCD 2008年第2期136-139,共4页

目的:观察海洋低温溶菌酶对体外培养的人脐静脉内皮细胞超微结构的影响,探讨海洋低温溶菌酶抗肿瘤血管形成的机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度的海洋低温溶菌酶处理24h后,利用透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:海... 目的:观察海洋低温溶菌酶对体外培养的人脐静脉内皮细胞超微结构的影响,探讨海洋低温溶菌酶抗肿瘤血管形成的机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度的海洋低温溶菌酶处理24h后,利用透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:海洋低温溶菌酶处理后人脐静脉内皮细胞出现超微结构变化,包括核内染色质浓缩及边集,胞质内细胞器肿胀和空泡化,呈现典型的细胞凋亡改变。这种改变呈剂量依赖性。结论:海洋低温溶菌酶可引起人脐静脉内皮细胞损伤,导致细胞凋亡,从而可能诱发其抗肿瘤血管生成的作用。 展开更多

关键词 海洋低温溶菌酶 人脐静脉内皮细胞 超微结构 抗血管生成 细胞凋亡

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醛固酮合酶CYP11B2(-344C/T)基因多态性与2型糖尿病肾病的相关性

13

作者 冯传首 王云英 +1 位作者 王培林 崔玉忠 《中国心血管杂志》 2007年第5期374-376,共3页

目的探讨醛固酮合酶CYP11B2(-344C/T)基因多态性与2型糖尿病肾病的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术检测95例2型糖尿病患者(其中合并肾病患者32例,未发生肾病63例)和175例健康对照组醛固酮合酶CY... 目的探讨醛固酮合酶CYP11B2(-344C/T)基因多态性与2型糖尿病肾病的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术检测95例2型糖尿病患者(其中合并肾病患者32例,未发生肾病63例)和175例健康对照组醛固酮合酶CYP11B2(-344C/T)基因多态性。结果糖尿病肾病组、糖尿病非肾病组和健康对照组两两比较,CYP11B2基因型和等位基因分布均无统计学差异(P>0.05)。与健康对照组比较,糖尿病肾病组和糖尿病非肾病组的血浆醛固酮水平均有极明显增高(P<0.01);糖尿病肾病患者CYP11B2(-344C/T)基因多态性的3种基因型间血浆醛固酮水平比较差异有显著性(P<0.05)。结论醛固酮合酶CYP11B2(-344C/T)基因多态性与2型糖尿病肾病的发生无显著相关性,但可能与血浆醛固酮水平有关。 展开更多

关键词 2型糖尿病 糖尿病肾病 醛固酮合酶 基因多态性

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HCMV感染对恶性胶质瘤U87细胞增殖及ATF5表达的影响 被引量：2

14

作者 王桐梅 钱冬萌 +5 位作者 胡明 李玲 张丽 陈豪 杨瑞 王斌 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第1期17-21,共5页

人巨细胞病毒(HCMV)能够诱导肿瘤细胞的恶性转化,但其分子机制尚有待进一步探索。探讨HCMV是否通过调控转录激活因子5(ATF5)的表达变化促进胶质瘤细胞的增殖。采用HCMV AD169株(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞株,MTT方法观察HCMV感染0、12... 人巨细胞病毒(HCMV)能够诱导肿瘤细胞的恶性转化,但其分子机制尚有待进一步探索。探讨HCMV是否通过调控转录激活因子5(ATF5)的表达变化促进胶质瘤细胞的增殖。采用HCMV AD169株(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞株,MTT方法观察HCMV感染0、12、24、48 h后细胞的增殖活性。Real-time PCR及Western-blot检测HCMV感染U87细胞后ATF5基因及蛋白的表达水平变化。以慢病毒为载体的靶向ATF5小干扰RNA构建载体,敲低ATF5表达水平后感染HCMV,MTT检测病毒感染细胞的增殖活性变化。HCMV感染神经胶质瘤U87细胞后,与未感染组比较,增值活性明显升高(P<0.05),ATF5表达水平上升,表明HCMV感染使胶质瘤细胞增殖活性提高,细胞抗凋亡能力增强。成功构建沉默ATF5细胞系siATF5 U87,HCMV感染siATF5 U87细胞后使细胞增殖活性减弱,抗凋亡能力下降。以上实验结果表明,HCMV感染上调胶质瘤U87细胞ATF5的表达水平,促进细胞的增殖。因此HCMV感染可能通过调控ATF5信号通路增加细胞恶性性状,为治疗胶质瘤提供一个新的思路。 展开更多

关键词 胶质瘤细胞U87 人巨细胞病毒 细胞增殖 转录激活因子5

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藻蓝蛋白/羧甲基壳聚糖纳米球的制备及其对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制 被引量：1

15

作者 吕丛仪 李冰 杨鹏 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期34-40,共7页

目的:制备新型负载藻蓝蛋白(C-phycocyanin,C-PC)的羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMC)纳米微球(nanoparticle,NP),探讨藻蓝蛋白羧甲基壳聚糖纳米微球(C-PC/CMCNP)对人宫颈癌He La细胞生长的影响及其分子机制。方法:采用正交分... 目的:制备新型负载藻蓝蛋白(C-phycocyanin,C-PC)的羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMC)纳米微球(nanoparticle,NP),探讨藻蓝蛋白羧甲基壳聚糖纳米微球(C-PC/CMCNP)对人宫颈癌He La细胞生长的影响及其分子机制。方法:采用正交分析方法,以CMC和C-PC的质量比、CMC浓度、Ca Cl2浓度为考察因素,通过检测C-PC/CMCNP的粒径和CMC的包封率,优选制备C-PC/CMCNP的最佳条件,并制备C-PC/CMCNP。CCK-8法检测C-PC、CMC和C-PC/CMCNP对He La细胞增殖的影响,流式细胞术检测He La细胞凋亡情况,Westren blotting检测He La细胞中caspase-3蛋白的表达。结果:CMC与C-PC的质量比为1∶2、CMC质量浓度为1 mg/ml,Ca Cl2质量浓度为1 mg/ml为最佳制备条件,最终制备的C-PC/CMCNP的平均粒径为(118.4±2.07)nm,并具有较高的包封率(63.2%),其缓释12 h的累积缓释率超过60%。C-PC、CMC和C-PC/CMCNP均能抑制He La细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并促进caspase-3蛋白的表达,但C-PC/CMCNP的作用效果最为显著。结论:优化制备条件得到具有高效缓释性能的C-PC/CMCNP,其对He La细胞显著的抑制作用可能是通过促进caspase-3蛋白的表达进而诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。 展开更多

关键词 藻蓝蛋白 纳米微粒 羧甲基壳聚糖 人宫颈癌HELA细胞 增殖

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HCMV IE86对恶性胶质瘤细胞凋亡及p53表达活性的影响 被引量：1

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作者 刘婷 钱冬萌 +5 位作者 胡明 于淼 张现娟 秦子英 刘小可 王斌 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期44-49,共6页

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)能诱导肿瘤细胞恶性转化且抑制肿瘤细胞凋亡,但HCMV编码的主要即刻早期调控蛋白IE86在这一过程中是否发挥关键作用仍然未知。为探究IE86对基因修饰荷胶质瘤小鼠p53表达水平及恶性胶质瘤细胞凋... 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)能诱导肿瘤细胞恶性转化且抑制肿瘤细胞凋亡,但HCMV编码的主要即刻早期调控蛋白IE86在这一过程中是否发挥关键作用仍然未知。为探究IE86对基因修饰荷胶质瘤小鼠p53表达水平及恶性胶质瘤细胞凋亡情况的影响,本研究通过PCR技术鉴定基因修饰小鼠IE86表达情况;实时定量PCR技术检测IE86和p53mRNA表达水平变化;免疫组织化学方法检测p53和p21蛋白的表达水平;TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况。结果显示,成功构建了IE86基因修饰小鼠模型;与IE86阴性组相比IE86阳性组p53表达水平上升(P<0.05),但p21表达水平下降(P<0.05);IE86阳性组细胞抗凋亡能力增强(P<0.05)。以上结果表明,在基因修饰的小鼠中IE86持续表达但p53转录活性的指示标志p21下调,且IE86可提高恶性胶质瘤细胞抗凋亡能力。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 胶质瘤细胞UL261 IE86基因修饰小鼠 IE86 P53 p21 凋亡

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真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(^(88)Arg,^(125)Ala)的构建表达及对神经胶质瘤细胞U87的影响

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作者 邵光灿 钱冬萌 +4 位作者 胡明 张丽娜 宋旭霞 付加朕 王斌 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1647-1651,1657,共6页

目的:以pEGFP-N3为载体,构建融合基因M-IL-2(88Arg,125Ala)的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala),检测融合基因在神经胶质瘤细胞U87中的表达以及重组蛋白对U87细胞的影响,为癌症的基因治疗提供实验基础。方法:通过PCR获得实验... 目的:以pEGFP-N3为载体,构建融合基因M-IL-2(88Arg,125Ala)的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala),检测融合基因在神经胶质瘤细胞U87中的表达以及重组蛋白对U87细胞的影响,为癌症的基因治疗提供实验基础。方法:通过PCR获得实验所需要的M-IL-2(88Arg,125Ala)基因片段,酶切后克隆入载体pEGFP-N3,构建M-IL-2(88Arg,125Ala)融合基因的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)。重组质粒经PCR、限制性内切酶分析及DNA序列测定证实构建成功后,用脂质体LipofectamineTM2000转染神经胶质瘤细胞U87,使用荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR及Western blot检测M-IL-2(88Arg,125Ala)融合蛋白在U87细胞中的表达,CCK-8方法检测融合蛋白对U87细胞的影响并观察细胞形态变化。结果:经PCR、限制性内切酶酶切分析及DNA序列测定证实,重组真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)构建成功,经RT-PCR及Western blot检测证实重组基因可在U87细胞中表达,CCK-8方法检测到融合蛋白对U87细胞增殖有一定的影响。结论:真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)构建成功,融合基因M-IL-2(88Arg,125Ala)可在U87细胞中表达且融合蛋白对肿瘤细胞的增殖有一定影响,为融合毒素M-IL-2(88Arg,125Ala)基因的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 白细胞介素2 蜂毒肽 真核表达 神经胶质瘤细胞

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神经胶质瘤细胞ATF5表达水平对HCMV复制的影响

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作者 张雪 钱冬萌 +5 位作者 胡明 陈豪 李玲 张丽 宋旭霞 王斌 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第2期25-32,共8页

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在神经胶质瘤细胞中的复制水平不一,其机制尚不清楚。本研究通过下调转录激活因子5(ATF5)在神经胶质瘤细胞中的表达,检测HCMV感染神经胶质瘤细胞后病毒复制水平的变化。首先用HCMV AD169(MOI=5... 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在神经胶质瘤细胞中的复制水平不一,其机制尚不清楚。本研究通过下调转录激活因子5(ATF5)在神经胶质瘤细胞中的表达,检测HCMV感染神经胶质瘤细胞后病毒复制水平的变化。首先用HCMV AD169(MOI=5)分别感染U87、SY5Y及A172细胞,观察细胞形态变化,分别在24、48、72、96、120 h取各时间点上清液检测病毒滴度;Real-time PCR检测HCMV即刻早期基因(IE2)、早期基因(UL44)、晚期基因(UL99)及ATF5的表达情况;Western-blot检测病毒基因编码蛋白及ATF5表达的情况。结果显示HCMV在U87、SY5Y细胞中复制水平与病毒在A172细胞中复制水平相比,U87、SY5Y细胞组明显高于A172细胞组(P<0.05),ATF5表达在U87、SY5Y细胞组与A172细胞组相比,U87、SY5Y细胞组ATF5表达明显高于A172组(P<0.05);利用慢病毒介导的RNA干扰技术下调ATF5在U87、SY5Y细胞的表达,用HCMV感染细胞检测病毒基因及蛋白的表达,结果ATF5表达下调可抑制HCMV的复制(P<0.05)。以上结果表明,在胶质瘤细胞中下调ATF5表达水平可以抑制HCMV的复制水平。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 转录激活因子5 复制 人胶质瘤细胞 病毒基因

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HCMV感染对胶质瘤细胞U87自噬的影响

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作者 宋静宜 钱冬萌 +6 位作者 王斌 黄睿 胡明 华晓敏 朱秀丽 陈豪 宋旭霞 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第1期40-45,共6页

研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对神经胶质瘤U87细胞自噬的影响。通过观察微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬相关基因Beclin1及其蛋白表达的变化,从而探讨HCMV与神经胶质瘤发生、发展的关系及意义。用HCMV AD169(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞... 研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对神经胶质瘤U87细胞自噬的影响。通过观察微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬相关基因Beclin1及其蛋白表达的变化,从而探讨HCMV与神经胶质瘤发生、发展的关系及意义。用HCMV AD169(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞,同时将未感染HCMV的U87细胞作为对照组。分别在6、12、24、48 h用RT-PCR检测Beclin1的表达,Western-blot和免疫荧光检测Beclin1和LC3编码蛋白的表达,最后用CCK-8检测细胞的增殖活性。结果显示,HCMV感染的U87细胞LC3-II蛋白表达水平逐渐下降(P<0.05);同时,HCMV感染的U87细胞Beclin1基因及蛋白的表达水平也逐渐下降(P<0.01),且HCMV感染U87细胞增殖显著(P<0.01)。以上结果表明,HCMV感染抑制胶质瘤U87细胞自噬,并会引起Beclin1表达水平下调,进而导致胶质瘤细胞增殖。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 自噬 神经胶质瘤U87细胞 细胞增殖

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