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人巨细胞病毒诱导分化中的神经干细胞分泌神经生长因子前体 被引量：4
1
作者 李玲 王斌 +8 位作者 白志强 李鹏 王海涛 刘海燕 姜光域 宋旭霞 钱冬萌 闫志勇 丁守怡 《医学研究生学报》 CAS 2010年第9期904-909,共6页
目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对人神经干细胞(neural stem cells,NSC)向星形胶质细胞分化过程中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体p75NTR、trkA表达的影响,为阐明HCMV感染致NSC损伤的分子机制提... 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对人神经干细胞(neural stem cells,NSC)向星形胶质细胞分化过程中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体p75NTR、trkA表达的影响,为阐明HCMV感染致NSC损伤的分子机制提供理论依据。方法体外培养人海马NSC,感染组以感染复数(multiplicity of infectin,MOI)为5的HCMVAD169株感染NSC,对照组只加入与病毒悬液等体积的培养液,在感染病毒的同时,诱导感染组和对照组NSC向星形胶质细胞分化,分别在感染后0、1、3、5、7、9 d收获细胞,用RT-PCR、免疫荧光和Western blot方法检测细胞内NGF及其受体p75NTR、trkA的转录水平和蛋白表达水平。结果对照组NSC不表达NGF及其受体P75NTR和trkA。感染组细胞在第3天开始出现NGFmRNA的表达,第5天出现P75NTRmRNA的表达,且其表达强度随时间增强;第5天出现相对分子质量为40000和100000NGF前体蛋白(ProNGF)和P75NTR蛋白,随时间延长,表达强度升高。免疫荧光检测显示,NGF前体蛋白位于细胞的细胞质;整个感染过程中未检测到trkA的表达。结论 HCMV感染可诱导向星形胶质细胞分化的海马NSC分泌NGF前体蛋白及其受体p75NTR。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 神经干细胞 神经生长因子 神经生长因子前体蛋白 P75NTR 细胞凋亡
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人巨细胞病毒感染及其IE86蛋白对ARPE-19细胞周期的影响 被引量：2
2
作者 刘海燕 王斌 +8 位作者 李玲 白志强 姜光域 王海涛 钱冬萌 赵巍 闫志勇 丁守怡 宋旭霞 《医学研究生学报》 CAS 2010年第5期452-455,共4页
目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染ARPE-19细胞后对其细胞周期的影响,观察这种变化与HCMVIE2基因的关系,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的ARPE-19作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。于感染后第1... 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染ARPE-19细胞后对其细胞周期的影响,观察这种变化与HCMVIE2基因的关系,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的ARPE-19作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。于感染后第1、2、3、4、5天收获细胞,RT-PCR方法检测HCMV IE mRNA的表达水平,用免疫荧光法检测细胞核内HCMV IE蛋白的表达,Western blot法检测HCMV早期蛋白IE和晚期蛋白pp65的表达。采用PCR方法从质粒pIEP86AD169扩增出IE2片段,构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,脂质体介导瞬时转染ARPE-19细胞,RT-PCR、免疫荧光法分析IE2基因的表达。流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 HCMV IE72、IE86和pp65可分别在病毒感染ARPE-19细胞后第2、3和5天时检测到表达,流式细胞术示感染组在感染第3、4、5天细胞周期的S期细胞比例显著增高,与对照组比较差异均有显著性统计学意义,P(0.05。瞬时转染质粒pEGFP-N3-IE2后细胞周期表现为S期细胞比例显著增高。结论 ARPE-19是HCMV的允许细胞,HCMV可引起ARPE-19细胞周期的改变,这种变化与IE2基因的表达有一定的关系。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 ARPE-19 IE2基因 细胞周期
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染料木黄酮抑制由单纯疱疹病毒1型感染导致的人胶质瘤细胞增殖和凋亡异常 被引量：1
3
作者 王倩 李玲 +6 位作者 王斌 于向民 宋旭霞 钱冬萌 侯云 姜光域 胡明 《医学研究生学报》 CAS 2011年第3期231-236,共6页
目的染料木黄酮(Genistein,GST)已被证实具有抗广谱病毒的作用,但有关其抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpessimplex virus-1,HSV-1)感染人星形胶质细胞的研究鲜有报道。研究GST对由HSV感染所致人胶质瘤细胞(U251)增殖和凋亡异常的抑制作用。... 目的染料木黄酮(Genistein,GST)已被证实具有抗广谱病毒的作用,但有关其抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpessimplex virus-1,HSV-1)感染人星形胶质细胞的研究鲜有报道。研究GST对由HSV感染所致人胶质瘤细胞(U251)增殖和凋亡异常的抑制作用。方法设立GST组、GST+HSV-1组、HSV-1组和对照组,以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5的HSV-1感染U251细胞,通过噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术和RT-PCR检测GST对HSV-1感染致U251细胞增殖和凋亡异常的抑制作用。结果①MTT法显示不同处理组之间的差别具有高度统计学意义(P<0.05),并有非常明显的时间效应(P<0.05)。其中30μg/ml GST组和HSV-1组MTT值低于对照组(P<0.05);15μg/ml GST+HSV-1组MTT均值高于HSV-1组均值(P<0.05),3.75和30μg/ml GST+HSV-1组MTT值均低于HSV-1组(P<0.05)。②形态学观察HSV-1组细胞感染12 h后出现融合,36 h后出现细胞病变效应,15μg/ml GST+HSV-1组细胞感染24 h后开始出现少量融合,36 h后融合增多,但大部分细胞为正常形态;流式细胞术显示,15μg/ml GST+HSV-1组凋亡率低于HSV-1组(P<0.05)。③RT-PCR检测显示HSV-1组感染6 h后开始检测到gD基因的表达;15μg/ml GST+HSV-1组在感染12 h内gD基因表达受到抑制,24 h后gD基因才开始表达。结论 15μg/ml浓度的GST能抑制HSV-1感染所致细胞增殖和凋亡的异常,同时抑制病毒gD基因的表达。 展开更多
关键词 染料木黄酮 单纯疱疹病毒1型 U251 增殖 凋亡
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