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动物源A型产气荚膜梭菌流行情况调查及α毒素基因分析 被引量:6
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作者 王潘龙 程佳佳 +9 位作者 尹月 刘锡武 王森 栾庆东 原昆鹏 曲雪婷 张晓轩 倪宏波 王建琳 尹燕博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期47-53,共7页
产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患病原菌,在一定条件下可引起多种严重疾病。为了调查不同动物A型产气荚膜梭菌流行情况及α毒素基因同源性,本试验从不同地区共采集病料307份,其中鸡133份(包括肉鸡112份、蛋鸡21份)、鸭65份、犬31份、... 产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患病原菌,在一定条件下可引起多种严重疾病。为了调查不同动物A型产气荚膜梭菌流行情况及α毒素基因同源性,本试验从不同地区共采集病料307份,其中鸡133份(包括肉鸡112份、蛋鸡21份)、鸭65份、犬31份、猪14份、兔子20份、小鼠9份、牛粪便18份、鸵鸟粪便17份。取肠道内容物和粪便进行产气荚膜梭菌分离鉴定和毒素基因分型,并检测cpe、β2毒素基因携带率;从不同地区、不同动物源A型产气荚膜梭菌分离株挑选18株进行α毒素基因扩增,将所得基因序列进行同源性比较。结果显示,307份样品中68份(22.1%)呈产气荚膜梭菌阳性,不同动物源产气荚膜梭菌阳性率介于5.9%~44.4%;68株产气荚膜梭菌分离株α毒素基因阳性率为100%,所有分离株毒素基因分型均为A型,未检测到cpe毒素基因,β2毒素基因总阳性率为63.2%;分离株与NCBI参考菌株α毒素基因相似性介于97.8%~100%。结果表明,不同动物α毒素具有很高的同源性,本调查为研发A型产气荚膜梭菌α毒素通用疫苗提供数据支持。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 基因型 Α毒素 多种动物源
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鸡传染性支气管炎的免疫防控研究进展 被引量:11
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作者 龚振华 金国栋 +6 位作者 王丽萍 栾庆东 路平 刘坤 张云香 王晓颖 牟瑞营 《动物医学进展》 北大核心 2021年第11期85-89,共5页
鸡传染性支气管炎病毒是一种单股正链RNA病毒,病毒基因组易于变异,病毒对于鸡群具有高度致病性和极强的传播性。近年来的研究表明,鸡传染性支气管炎病毒流行株的血清型和基因型具有多样性,所引起的临床症状和病理变化也具有多样性。鸡... 鸡传染性支气管炎病毒是一种单股正链RNA病毒,病毒基因组易于变异,病毒对于鸡群具有高度致病性和极强的传播性。近年来的研究表明,鸡传染性支气管炎病毒流行株的血清型和基因型具有多样性,所引起的临床症状和病理变化也具有多样性。鸡传染性支气管炎严重危害国内养鸡业,表现为多种鸡传染性支气管炎病毒流行株在国内严重流行。因弱毒疫苗使用不当,不能对流行株提供足够的保护,引起病毒变异。当前国内必须高度重视鸡传染性支气管炎的防控,要通过加强该病的流行病学监测,提高疫苗免疫的针对性,筛选适合特定地区的疫苗,从而有效控制鸡传染性支气管炎病毒的流行。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 防控 免疫
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我国主要流行的4种血清型禽腺病毒-Ⅰ群Fiber蛋白的交叉中和研究 被引量:4
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作者 栾庆东 孙举 +3 位作者 刘均华 张本清 尹燕博 王建琳 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第5期214-219,共6页
为确定FAdV-4、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-11这4个血清型FAdV间存在的交叉保护是否与病毒的纤维蛋白(Fiber)有关,制备4个血清型FAdV Fiber蛋白抗血清,在细胞水平研究其对本血清型和其他3种血清型病毒感染的中和作用。针对4个血清型FAdV的F... 为确定FAdV-4、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-11这4个血清型FAdV间存在的交叉保护是否与病毒的纤维蛋白(Fiber)有关,制备4个血清型FAdV Fiber蛋白抗血清,在细胞水平研究其对本血清型和其他3种血清型病毒感染的中和作用。针对4个血清型FAdV的Fiber基因设计引物,进行PCR扩增,构建pCold-FAdV-Fiber重组质粒,分别转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western Blot鉴定表达产物;表达产物纯化后免疫SPF鸡,采集抗血清,通过LMH细胞研究不同血清型Fiber蛋白血清对各血清型FAdV感染的中和作用。PCR扩增结果显示,FAdV-4、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-11 Fiber基因产物大小分别为1440,1575,1566,1719 bp;重组菌在16℃培养条件下,1.0 mmol/L的IPTG诱导24 h可溶性重组蛋白的表达量最高;SDS-PAGE和Western Blot结果显示,FAdV-4、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-11表达的蛋白分子量大小分别为102,107,107,112 ku;中和结果显示,FAdV-4、FAdV-8b和FAdV-11 Fiber蛋白抗血清能中和自身血清型FAdV对细胞的感染,不能中和其他血清型FAdV的感染,而FAdV-8a Fiber蛋白抗血清不能中和这4种血清型中的任何一种血清型FAdV的感染。综上,Fiber蛋白与4个血清型FAdV全病毒之间存在的交叉保护无直接关系。 展开更多
关键词 FAdV Fiber蛋白 原核表达 交叉中和
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血清1型Ⅰ群禽腺病毒Fiber-2蛋白的表达及其中和作用研究 被引量:2
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作者 高永娟 栾庆东 +6 位作者 曲雪婷 原昆鹏 王潘龙 赵梓靓 卢艳敬 尹燕博 王建琳 《中国家禽》 北大核心 2022年第8期35-41,共7页
为研究血清1型Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-1)的Fiber-2蛋白对FAdV-1在细胞水平上的中和作用,研究根据FAdV-1亚型Fiber-2基因序列设计引物,进行Fiber-2全基因序列PCR扩增并构建重组质粒,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,表达产物纯化后免... 为研究血清1型Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-1)的Fiber-2蛋白对FAdV-1在细胞水平上的中和作用,研究根据FAdV-1亚型Fiber-2基因序列设计引物,进行Fiber-2全基因序列PCR扩增并构建重组质粒,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,表达产物纯化后免疫SPF鸡制备抗血清,通过鸡LMH细胞研究Fiber-2蛋白抗血清对FAdV-1感染的中和作用。结果显示,FAdV-1 Fiber-2基因扩增产物大小为1 233 bp,构建了pCold-FAdV-1-Fiber-2重组质粒,表达的FAdV-1 Fiber-2蛋白分子量大小为105 ku;FAdV-1 Fiber-2蛋白的抗血清孵育LMH细胞后,与阳性对照组相同第4天细胞出现病变,而阴性对照组细胞均无病变。结果表明,FAdV-1 Fiber-2蛋白抗血清在体外试验中不能中和本血清型病毒的感染,FAdV-1 Fiber-2蛋白作为亚单位疫苗的研究存在风险。 展开更多
关键词 血清1型Ⅰ群禽腺病毒 Fiber-2蛋白 LMH细胞 中和作用
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鸵鸟胚原代组织细胞的培养及鉴定
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作者 赵梓靓 原昆鹏 +8 位作者 王保俊 栾庆东 曲雪婷 高永娟 王潘龙 赵悦 卢艳敬 尹燕博 王建琳 《中国家禽》 北大核心 2022年第9期39-46,共8页
为研究鸵鸟胚成纤维、肝、肾、脑组织原代细胞的体外分离培养方法,试验选择28胚龄的鸵鸟胚组织,通过胰蛋白酶消化法与组织块贴壁培养法分离培养原代细胞。通过细胞HE染色形态观察、细胞活性与生长曲线测定、RT-qPCR测定细胞基因标志物... 为研究鸵鸟胚成纤维、肝、肾、脑组织原代细胞的体外分离培养方法,试验选择28胚龄的鸵鸟胚组织,通过胰蛋白酶消化法与组织块贴壁培养法分离培养原代细胞。通过细胞HE染色形态观察、细胞活性与生长曲线测定、RT-qPCR测定细胞基因标志物对细胞类型进行鉴定。结果显示:组织块贴壁法培养的细胞12 h后开始生长,胰酶消化法分离培养的细胞,4 h后开始贴壁生长,且采用胰酶消化法获得的细胞传代后状态良好,生长变快;HE染色显示成纤维细胞、肝细胞与肾细胞为多角形或长梭形,脑细胞多呈星状与三角形;RT-qPCR结果显示,与原代细胞相比次代细胞的标志物基因ALB、CD105、CD90、CD73、WT-1、Emx-2、Wnt-4、CD133 mRNA表达水平均明显升高。研究表明,利用胰酶消化法与组织块贴壁培养法均可分离出鸵鸟胚原代细胞,但胰酶消化法分离的细胞更适合后期深入研究细胞功能,为进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 鸵鸟胚原代细胞 细胞培养 细胞鉴定 相对表达量 生长曲线
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