甲氧苄啶纳米抗体噬菌体展示文库的构建及初步筛选

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作者 刘翔宇 尹永康 +4 位作者 张红 宋茜 王玲 张启迪 梁晓 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5074-5085,共12页

【目的】构建甲氧苄啶(trimethoprim,TMP)纳米抗体(nanobody,Nb)噬菌体展示文库,制备TMP高亲和力纳米抗体,为TMP免疫分析方法的建立提供新型抗体材料。【方法】通过活性酯酶法将TMP半抗原Hapten B与牛血清白蛋白(BSA)、钥孔血蓝蛋白(KLH... 【目的】构建甲氧苄啶(trimethoprim,TMP)纳米抗体(nanobody,Nb)噬菌体展示文库,制备TMP高亲和力纳米抗体,为TMP免疫分析方法的建立提供新型抗体材料。【方法】通过活性酯酶法将TMP半抗原Hapten B与牛血清白蛋白(BSA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联制备2种免疫原,Hapten A和Hapten B与卵清白蛋白(OVA)偶联制备2种包被原。采用磺胺增效剂类药物单克隆抗体5C4,通过间接ELISA方法验证免疫原和包被原偶联效果。将免疫原与弗氏佐剂混合,先后对羊驼进行基础免疫和加强免疫,监测每次免疫后羊驼抗血清效价及对TMP的亲和力,选取效价及TMP亲和力最高的外周血作为纳米抗体基因来源,构建噬菌体展示文库。分离羊驼外周血总淋巴细胞,扩增重链抗体可变区纳米抗体基因(VHH),插入噬菌粒,电击转化大肠杆菌XL1-Blue感受态细胞构建初始噬菌体纳米抗体展示文库。经辅助噬菌体救援,采用同源包被原浓度梯度递减包被、酸洗脱、TMP浓度梯度递减洗脱筛选策略筛选TMP高亲和力噬菌体并测序,原核表达纳米抗体,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定纳米抗体融合蛋白。【结果】间接ELISA检测结果显示,2种免疫原与2种包被原在稀释18000倍时D 450 nm值仍高于1.25。免疫原Hapten B-BSA 5次免疫后羊驼抗血清效价为1∶88000,对TMP的半数抑制浓度(IC 50)为12.21μg/L,但Hapten B-KLH 4次免疫后羊驼抗血清效价为1∶11000,对TMP的IC 50为30.56μg/L。以Hapten B-BSA五免后羊驼外周血为纳米抗体基因来源构建噬菌体展示文库,初始库容量为6.08×10^(7) CFU/mL,目的片段插入率为96%,噬菌体展示文库多样性良好。经4轮筛选后,获得3株TMP高亲和力噬菌体,测序分析后获得1株TMP高亲和力纳米抗体及序列。SDS-PAGE和Western blotting鉴定融合蛋白大小约为17 ku,蛋白含量80%以上。【结论】本研究成功构建TMP纳米抗体噬菌体展示文库,获得1株TMP高亲和力纳米抗体。研究结果为磺胺增效剂类药物纳米抗体的制备提供了理论依据和技术支持,为兽药等小分子新型识别材料的制备提供了新的思路。 展开更多

关键词 甲氧苄啶 纳米抗体 噬菌体展示文库

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沙参多糖对自由基的清除作用 被引量：21

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作者 李建刚 李庆典 《中国酿造》 CAS 北大核心 2011年第3期66-68,共3页

以北沙参为原料,利用微波技术及水提醇沉法提取沙参多糖。利用Feton体系和邻苯三酚自氧化反应,采用比色法测定沙参多糖对羟基及超氧自由基的清除作用,沙参粗多糖对OH·的半抑制率IC_(50)为0.22mg/mL;对超氧自由基的半抑制率IC_(50)... 以北沙参为原料,利用微波技术及水提醇沉法提取沙参多糖。利用Feton体系和邻苯三酚自氧化反应,采用比色法测定沙参多糖对羟基及超氧自由基的清除作用,沙参粗多糖对OH·的半抑制率IC_(50)为0.22mg/mL;对超氧自由基的半抑制率IC_(50)为0.25mg/mL。结果表明,沙参多糖对羟基自由基和超氧自由基均有清除作用,对羟基自由基的清除能力更强。 展开更多

关键词 北沙参 多糖 微波提取 自由基清除

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复合螺旋藻多糖对人乳腺癌231细胞抑制作用的研究 被引量：6

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作者 于蕾妍 郝言芝 +3 位作者 乔明霞 郭春生 张志娟 王清吉 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第3期928-929,931,共3页

[目的]研究复合螺旋藻多糖对人乳腺癌231细胞的抑制作用。[方法]将螺旋藻多糖(PSP)与银杏叶有效成分(GBE)按一定比例复合,观察复合制剂对人乳腺癌231细胞的抑制作用。[结果]与空白对照组相比,PSP与GBE按1:1、1:2和2:1比例的复合制剂组... [目的]研究复合螺旋藻多糖对人乳腺癌231细胞的抑制作用。[方法]将螺旋藻多糖(PSP)与银杏叶有效成分(GBE)按一定比例复合,观察复合制剂对人乳腺癌231细胞的抑制作用。[结果]与空白对照组相比,PSP与GBE按1:1、1:2和2:1比例的复合制剂组对人乳腺癌231细胞的抑瘤率,高剂量时分别提高93.32%、57.83%和44.95%,中剂量时分别提高67.52%、59.93%和41.72%,低剂量时分别提高54.22%、48.56%和40.26%。单一成分的螺旋藻多糖组对人乳腺癌231细胞有较好的抑制作用,但随着剂量地降低其药效也随之降低。[结论]复合螺旋藻多糖对人乳腺癌231细胞有较高地抑制作用,其中,以高剂量组1∶1复合制剂抑制效果最好(93.32%),表明复合螺旋藻多糖在该剂量配比时协同增效作用达到最大。 展开更多

关键词 螺旋藻多糖 银杏叶有效成分 人乳腺癌231细胞 抑瘤率

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复合螺旋藻多糖对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用 被引量：7

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作者 郝言芝 张志娟 +3 位作者 乔明霞 高宗霞 于蕾妍 王清吉 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第8期3367-3368,3408,共3页

[目的]探讨复合螺旋藻多糖对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。[方法]将螺旋藻多糖(PSP)与银杏叶有效成分(GBE)按不同剂量、3种比例(1∶1、1∶2和2∶1)复合,用MTT法研究复合螺旋藻多糖对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用。[结果]PSP与GBE按3种比... [目的]探讨复合螺旋藻多糖对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。[方法]将螺旋藻多糖(PSP)与银杏叶有效成分(GBE)按不同剂量、3种比例(1∶1、1∶2和2∶1)复合,用MTT法研究复合螺旋藻多糖对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用。[结果]PSP与GBE按3种比例复合使用组对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用均明显好于相对应剂量的单一成分组,且同一配比组的抑瘤率与剂量呈正相关。PSP与GBE联合使用能对抑制人宫颈癌HeLa细胞产生协同增效作用。其中PSP与GBE按2∶1比例复合的作用最突出,在高、中和低剂量时抑瘤率分别为67.92%、58.93%和34.86%(P<0.01)。[结论]该研究为人宫颈癌的治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 螺旋藻多糖 银杏 复配 抑制作用

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微波提取山药多糖的研究 被引量：8

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作者 李建刚 李庆典 《中国酿造》 CAS 2012年第10期103-105,共3页

以山药干片为原料,乙醇为多糖的沉淀试剂,微波辅助提取山药多糖。通过正交试验确定提取山药多糖的工艺条件为:微波功率640W,处理时间10min,料液比1∶10,提取次数为3次,在此条件下山药粗多糖含量为8.35%,多糖含量为53.19%。

关键词 微波 山药多糖 提取

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水杨酸苄酯的绿色合成 被引量：2

6

作者 李玉文 马翠丽 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2014年第4期58-60,共3页

采用水杨酸钠和氯化苄为原料,以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂,无相转移催化剂条件下,加热均相反应合成水杨酸苄酯,测定所合成的水杨酸苄酯的红外光谱和折射率并与文献报道值比较,从而确认水杨酸苄酯的结构。考察了反应温度、反应物配比、反... 采用水杨酸钠和氯化苄为原料,以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂,无相转移催化剂条件下,加热均相反应合成水杨酸苄酯,测定所合成的水杨酸苄酯的红外光谱和折射率并与文献报道值比较,从而确认水杨酸苄酯的结构。考察了反应温度、反应物配比、反应时间等对酯化反应收率的影响。确定了反应的最佳条件为:n(水杨酸钠)∶n(氯化苄)=2.5∶1,反应温度100℃,反应时间2.5h,此条件下水杨酸苄酯的收率达98.4%。与现有的水杨酸苄酯合成方法相比,该方法收率高,副产物少,反应时间短,分离方便,溶剂可以回收重复使用,绿色环保,适合于工业化生产。 展开更多

关键词 水杨酸苄酯 水杨酸钠 氯化苄 绿色合成

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反相色谱法检测饲料中的恩诺沙星 被引量：1

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作者 李军德 宋吉英 《粮食与饲料工业》 CAS 北大核心 2014年第8期61-63,共3页

用反相色谱法,在配有紫外检测器的液相色谱仪上建立了检测市售饲料样品中恩诺沙星含量的方法。采用Eclipse XDB-C18色谱柱,乙腈︰柠檬酸(5g/L)︰三乙胺体积比为180︰818︰2溶液作为流动相,柱温为30℃,流速为0.8ml/min,最佳检测波长为28... 用反相色谱法,在配有紫外检测器的液相色谱仪上建立了检测市售饲料样品中恩诺沙星含量的方法。采用Eclipse XDB-C18色谱柱,乙腈︰柠檬酸(5g/L)︰三乙胺体积比为180︰818︰2溶液作为流动相,柱温为30℃,流速为0.8ml/min,最佳检测波长为285nm。其线性范围为0.6～60μg/ml,线性相关系数为0.999 4,平均回收率为98.38%。 展开更多

关键词 反相色谱 恩诺沙星 饲料 检测

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己酸正丁酯的绿色合成 被引量：1

8

作者 马翠丽 李玉文 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2015年第10期62-64,共3页

采用己酸和硼酸三丁酯为原料,在无催化剂、无溶剂条件下加热反应合成葡萄酒香料己酸正丁酯,测定所合成的葡萄酒香料己酸正丁酯的红外光谱及折射率并与文献报道值相比较,从而确证所合成的己酸正丁酯的结构。考察了反应温度、反应物配比... 采用己酸和硼酸三丁酯为原料,在无催化剂、无溶剂条件下加热反应合成葡萄酒香料己酸正丁酯,测定所合成的葡萄酒香料己酸正丁酯的红外光谱及折射率并与文献报道值相比较,从而确证所合成的己酸正丁酯的结构。考察了反应温度、反应物配比、反应时间等对己酸正丁酯收率的影响。确定了最佳反应条件:n(硼酸三丁酯)∶n(己酸)=3∶1,反应温度110℃,反应时间8h,在此条件下酯化率达97.8%,所得己酸正丁酯产品的纯度达到99.5%。此外,该方法收率高,易于纯化,所得副产物硼酸可用于制备硼酸三丁酯,过量的硼酸三丁酯原料可以回收循环使用,整个过程无三废排放,绿色环保,具有工业化前景。 展开更多

关键词 己酸正丁酯 硼酸三丁酯 己酸 绿色合成

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某社区409名健康体检者高血压知识需求的调查分析 被引量：1

9

作者 刘玉萍 于彩云 《中国实用医药》 2011年第31期264-266,共3页

目的了解健康体检人群对高血压病相关知识的掌握及需求情况。方法采用自制的问卷调查表对409名健康受检者就其对高血压相关知识掌握及需求情况进行调查。结果 54.8%的受检者不知道高血压患病率随年龄增长而有增高趋势,高血压并发症累及... 目的了解健康体检人群对高血压病相关知识的掌握及需求情况。方法采用自制的问卷调查表对409名健康受检者就其对高血压相关知识掌握及需求情况进行调查。结果 54.8%的受检者不知道高血压患病率随年龄增长而有增高趋势,高血压并发症累及器官的知晓率不足50.0%;52.1%的受检者不认为戒烟、限酒能预防高血压病的发生和发展。调查显示体检者对高血压病的防治知识需求较强烈。结论健康体检人群对高血压知识掌握情况存在不足,对高血压病的预防认知不够。医护人员应加强高血压病各方面知识的推广和普及,提高人群的健康意识,预防高血压病的发生发展。 展开更多

关键词 高血压 体格检查 需求 预防 知识

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磺化硅胶催化合成葡萄酒香料己酸正丁酯

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作者 马翠丽 李玉文 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2014年第1期73-76,共4页

采用己酸和正丁醇为原料,磺化硅胶为催化剂,非均相酯化反应合成葡萄酒香料己酸正丁酯,考察了原料配比、反应时间及催化剂用量等对酯化反应的影响。实验结果表明,磺化硅胶具有较高的催化活性,其最佳工艺条件为:n(正丁醇)∶n(己酸)=3∶1,... 采用己酸和正丁醇为原料,磺化硅胶为催化剂,非均相酯化反应合成葡萄酒香料己酸正丁酯,考察了原料配比、反应时间及催化剂用量等对酯化反应的影响。实验结果表明,磺化硅胶具有较高的催化活性,其最佳工艺条件为:n(正丁醇)∶n(己酸)=3∶1,催化剂用量为己酸质量的1.5%,回流反应3h,酯化率达96.1%;而且磺化硅胶具有较好的重复使用性能,使用5次后,酯化率仍达91.2%,磺化硅胶易于和产物分离,回收使用效果好,对设备腐蚀和环境污染都较轻。 展开更多

关键词 己酸正丁酯 磺化硅胶 己酸 催化酯化

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产黄青霉发酵鸭肉制品食用品质、微观结构及物理化学特性变化 被引量：9

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作者 蓝天婵 于冰 +6 位作者 孙京新 王淑玲 郭丽萍 王宝维 黄明 郝小静 乔昌明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第21期36-43,共8页

为探讨产黄青霉(Penicillium chrysogenum)发酵鸭肉制品的食用品质、微观结构及物理化学特性变化,将产黄青霉接入高温灭菌后的鸭肉中,(27±1)℃下前发酵7 d、30℃下后发酵14 d得到发酵鸭肉制品。采用质构仪、扫描电子显微镜、透射... 为探讨产黄青霉(Penicillium chrysogenum)发酵鸭肉制品的食用品质、微观结构及物理化学特性变化,将产黄青霉接入高温灭菌后的鸭肉中,(27±1)℃下前发酵7 d、30℃下后发酵14 d得到发酵鸭肉制品。采用质构仪、扫描电子显微镜、透射电子显微镜、拉曼光谱仪、低场核磁共振仪和气相色谱(gas chromatography,GC)-质谱(mass spectrometry,MS)联用仪分别分析产黄青霉发酵鸭肉制品的质地、微观结构、蛋白质构象、水分分布和挥发性物质的变化情况。结果表明,产黄青霉发酵鸭肉的硬度和弹性明显降低,黏性明显增加。扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察到经产黄青霉发酵的鸭肉无完整肌原纤维,呈无序排列并黏连的颗粒状。拉曼光谱表明,产黄青霉发酵鸭肉蛋白质二级结构中α-螺旋相对含量减少,β-折叠相对含量增加,β-转角和无规卷曲相对含量变化不明显;色氨酸、酪氨酸残基微环境疏水性显著增强(P<0.05)。低场核磁共振研究发现结合水和不易流动水相对含量显著降低(P<0.05)。GC-MS分析表明未发酵鸭肉制品挥发性物质为29种,而产黄青霉发酵鸭肉制品挥发性物质为48种,其中酮类、酯类和酸类是新产生的挥发性物质。产黄青霉可用于生产特定风味和质地的发酵肉制品,为开发可安全食用的发酵鸭肉制品提供了一种新思路。 展开更多

关键词 产黄青霉 发酵鸭肉 质地 拉曼光谱 低场核磁共振 挥发性物质

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