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题名昆明小鼠胚胎成纤维细胞体外培养条件初步研究
被引量：4
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作者
曹俊新
宋学雄
孙旺吾
唐元凤
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机构
青岛农业大学基础兽医学室
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出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011年第10期39-44,共6页
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基金
国家转基因重大专项课题(2009ZX08006-007B)
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文摘
本研究旨在探索影响小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)分离培养的因素,建立有效的胚胎成纤维细胞培养体系,为构建饲养层细胞与体细胞核移植技术的细胞核供体建立平台。本研究用组织细胞培养液DMEM作为基础培养液,观察了不同胎龄、不同血清浓度及不同胰蛋白酶作用时间等因素对MEF分离培养的影响。结果显示,在所进行的4个胎龄8.5、10.5、12.5、14.5d的比较试验中,原代成纤维细胞分离培养的最适胎龄为12.5d,细胞贴壁迅速,12h已完全贴壁,增殖速度快;在所进行的不同时间5、10、15、30min的胰蛋白酶消化中,最佳时间为5～10min;在所进行的5个血清浓度7%、9%、10%、11%、13%的比较试验中,添加11%胎牛血清浓度培养效果最佳,从3～5代增殖倍数稳定在1.35左右,传代时间也相对较长。以上结果表明,采用12.5d胎鼠,胰蛋白酶消化5～10min,在含有11%血清的DMEM培养液中培养MEF细胞时,原代和传代效果最好,传代至第3～5代时细胞生长增殖最旺盛,处于对数分裂期,适宜作为饲养层细胞与体细胞核移植细胞核供体。
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关键词
小鼠
胚胎成纤维细胞
分离培养
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Keywords
mouse
embryonic fibroblast
isolation and culture
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分类号
S813.11
[农业科学—畜牧学]
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