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联合突变对α-L-鼠李糖苷酶性质的影响
1
作者
唐艺玲
刘小琴
+2 位作者
李乐
李利君
倪辉
《食品与生物技术学报》
北大核心
2025年第2期23-32,共10页
【目的】提升α-L-鼠李糖苷酶(EC 3.2.1.40)的催化活性、热稳定性和pH稳定性。【方法】基于已改良的单点突变体,构建了3个联合突变体:K423R-R307Y-D508N、K423R-R307Y-N561D和K389R-R307Y-N561D。【结果】相比于原始酶(wild type,WT),K4...
【目的】提升α-L-鼠李糖苷酶(EC 3.2.1.40)的催化活性、热稳定性和pH稳定性。【方法】基于已改良的单点突变体,构建了3个联合突变体:K423R-R307Y-D508N、K423R-R307Y-N561D和K389R-R307Y-N561D。【结果】相比于原始酶(wild type,WT),K423R-R307Y-D508N在温度为65、70℃时的半衰期均提高了0.24 min,在pH为7.0、8.0时的半衰期分别提高了145.64、4.91 min,但其相对酶活力仅为WT的41.01%;K423RR307Y-N561D在pH为7.0、8.0时的半衰期分别提高了51.42、20.65 min,相对酶活力为WT的63.26%;K389R-R307Y-N561D的相对酶活力是WT的167.20%,在温度为65、70℃时的半衰期分别提高了1.60、1.34 min,但在碱性环境下的pH稳定性未发生明显变化。通过分子对接、分子动力学模拟和MM-PBSA分析发现,K389R-R307Y-N561D的催化结构域Loop区和底部部分α螺旋结构的柔性增大,使酶与底物结合更充分,提升了亲和性;但R307突变引发局部扰动,破坏氢键网络及π-π疏水相互作用,导致结构稳定性下降。【结论】联合突变触发位点补偿机制是α-L-鼠李糖苷酶催化活性与结构稳定性难以协同提升的主要原因。
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关键词
α-L-鼠李糖苷酶
联合突变
位点组合效应
分子动力学模拟
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职称材料
琯溪蜜柚蒸馏酒香气特征及风味成分分析
被引量:
7
2
作者
李睿
倪辉
+4 位作者
李婷
张婷
李利君
杨远帆
李清彪
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期232-236,共5页
研究由琯溪蜜柚汁所制成的蒸馏酒的品质特征,运用感官检验、气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)联用仪、气相色谱火焰离子化检测-嗅闻(gas chromatography-flame ionization detector-olfactory,GC-FID-O)联用...
研究由琯溪蜜柚汁所制成的蒸馏酒的品质特征,运用感官检验、气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)联用仪、气相色谱火焰离子化检测-嗅闻(gas chromatography-flame ionization detector-olfactory,GC-FID-O)联用分析琯溪蜜柚蒸馏酒的主要香气轮廓及风味成分。感官分析结果表明,琯溪蜜柚蒸馏酒的主体香气是果香和柑橘香。GC-MS结果共鉴定出40 种挥发性物质,其中醇类8 种,酯类14 种,萜烯类10 种,其他8 种。通过制定标准曲线进行定量分析,发现含量较多的挥发性成分为癸酸乙酯(744.73 μg/L)、己酸乙酯(524.74 μg/L)和月桂酸乙酯(193.42 μg/L)。GC-FID-O分析显示:戊酸乙酯、D-柠檬烯、己酸乙酯是琯溪蜜柚蒸馏酒香气轮廓的主要贡献成分。本实验可为研究琯溪蜜柚蒸馏酒及其他柑橘果酒的香气质量提供参考依据。
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关键词
蜜柚汁
蒸馏酒
气相色谱-质谱联用仪
嗅闻仪
香气
挥发性成分
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职称材料
山梨醇对黑曲霉源α-L-鼠李糖苷酶(r-Rha1)热稳定性的影响
被引量:
2
3
作者
叶家影
孙江
+3 位作者
李文静
倪辉
李利君
李清彪
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第10期96-103,共8页
提高酶热稳定性是工业酶属性改造的重要目标。山梨醇作为广泛应用于提高酶稳定性的外源添加剂,目前对其影响酶热稳定性的机制仍不明确。因此,作者以黑曲霉源α-L-鼠李糖苷酶(r-Rha1)为研究对象,通过热失活动力学、圆二色谱和荧光光谱的...
提高酶热稳定性是工业酶属性改造的重要目标。山梨醇作为广泛应用于提高酶稳定性的外源添加剂,目前对其影响酶热稳定性的机制仍不明确。因此,作者以黑曲霉源α-L-鼠李糖苷酶(r-Rha1)为研究对象,通过热失活动力学、圆二色谱和荧光光谱的谱学分析,研究山梨醇对α-L-鼠李糖苷酶热稳定性的影响机制。结果表明,在60~70℃下,加入山梨醇可改善α-L-鼠李糖苷酶的热稳定性;在60、65、70℃条件下,加入1.2 mol/L山梨醇可分别将半衰期提高29、25、10倍;圆二色谱和荧光光谱结果表明山梨醇通过增强α-L-鼠李糖苷酶的表面疏水活性和结构刚性,从而提高其热稳定性。通过探究山梨醇对α-L-鼠李糖苷酶热稳定性的影响,进一步证明山梨醇提高酶热稳定性的普遍适用性,同时为后续α-L-鼠李糖苷酶的工业应用提供了参考。
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关键词
α-L-鼠李糖苷酶
山梨醇
热稳定性
荧光光谱
圆二色谱
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职称材料
浮游植物细胞自噬作用特点及研究方法
被引量:
2
4
作者
卢雪
蔡伟聪
刘静雯
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2020年第4期105-113,共9页
自噬(Autophagy)是真核生物细胞中一类高度保守的、依赖于溶酶体或液泡途径对胞质蛋白和细胞器进行降解的生物学过程。细胞自噬除维持细胞稳态外,在细胞响应各种外界胁迫中也发挥重要作用。近年来,陆续发现浮游植物能够通过细胞自噬应...
自噬(Autophagy)是真核生物细胞中一类高度保守的、依赖于溶酶体或液泡途径对胞质蛋白和细胞器进行降解的生物学过程。细胞自噬除维持细胞稳态外,在细胞响应各种外界胁迫中也发挥重要作用。近年来,陆续发现浮游植物能够通过细胞自噬应答众多环境胁迫,并在浮游植物细胞中鉴定出了类似于哺乳动物细胞中的核心自噬功能单位。自噬作为一种独特的程序性细胞死亡(PCD)形式,对浮游植物遭受胁迫后的个体存活及种群延续具有至关重要的作用。因此,细胞自噬也将成为浮游植物研究领域的一个新的着力点。主要综述了浮游植物细胞中自噬的保守性、诱导因素、调控机制、自噬与凋亡的交互作用以及浮游植物自噬研究方法等研究进展。
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关键词
浮游植物细胞自噬
保守性
诱导因素
自噬调控机制
自噬与凋亡
自噬研究方法
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职称材料
题名
联合突变对α-L-鼠李糖苷酶性质的影响
1
作者
唐艺玲
刘小琴
李乐
李利君
倪辉
机构
集美大学
海洋
食品
与
生物
工程
学院
集美大学福建省食品微生物与酶工程重点实验室
集美大学
厦门市
食品
生物
工程
技术研究中心
厦门海洋职业技术学院海洋
生物
学院
出处
《食品与生物技术学报》
北大核心
2025年第2期23-32,共10页
基金
国家自然科学基金面上项目(32170056)。
文摘
【目的】提升α-L-鼠李糖苷酶(EC 3.2.1.40)的催化活性、热稳定性和pH稳定性。【方法】基于已改良的单点突变体,构建了3个联合突变体:K423R-R307Y-D508N、K423R-R307Y-N561D和K389R-R307Y-N561D。【结果】相比于原始酶(wild type,WT),K423R-R307Y-D508N在温度为65、70℃时的半衰期均提高了0.24 min,在pH为7.0、8.0时的半衰期分别提高了145.64、4.91 min,但其相对酶活力仅为WT的41.01%;K423RR307Y-N561D在pH为7.0、8.0时的半衰期分别提高了51.42、20.65 min,相对酶活力为WT的63.26%;K389R-R307Y-N561D的相对酶活力是WT的167.20%,在温度为65、70℃时的半衰期分别提高了1.60、1.34 min,但在碱性环境下的pH稳定性未发生明显变化。通过分子对接、分子动力学模拟和MM-PBSA分析发现,K389R-R307Y-N561D的催化结构域Loop区和底部部分α螺旋结构的柔性增大,使酶与底物结合更充分,提升了亲和性;但R307突变引发局部扰动,破坏氢键网络及π-π疏水相互作用,导致结构稳定性下降。【结论】联合突变触发位点补偿机制是α-L-鼠李糖苷酶催化活性与结构稳定性难以协同提升的主要原因。
关键词
α-L-鼠李糖苷酶
联合突变
位点组合效应
分子动力学模拟
Keywords
α-L-rhamnosidase
combined mutations
site combination effect
molecular dynamics simulation
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
琯溪蜜柚蒸馏酒香气特征及风味成分分析
被引量:
7
2
作者
李睿
倪辉
李婷
张婷
李利君
杨远帆
李清彪
机构
集美大学
食品
与
生物
工程
学院
集美大学福建省食品微生物与酶工程重点实验室
厦门市
食品
与
生物
工程
技术研究中心
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期232-236,共5页
基金
福建省自然科学基金项目(2017J01448)
文摘
研究由琯溪蜜柚汁所制成的蒸馏酒的品质特征,运用感官检验、气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)联用仪、气相色谱火焰离子化检测-嗅闻(gas chromatography-flame ionization detector-olfactory,GC-FID-O)联用分析琯溪蜜柚蒸馏酒的主要香气轮廓及风味成分。感官分析结果表明,琯溪蜜柚蒸馏酒的主体香气是果香和柑橘香。GC-MS结果共鉴定出40 种挥发性物质,其中醇类8 种,酯类14 种,萜烯类10 种,其他8 种。通过制定标准曲线进行定量分析,发现含量较多的挥发性成分为癸酸乙酯(744.73 μg/L)、己酸乙酯(524.74 μg/L)和月桂酸乙酯(193.42 μg/L)。GC-FID-O分析显示:戊酸乙酯、D-柠檬烯、己酸乙酯是琯溪蜜柚蒸馏酒香气轮廓的主要贡献成分。本实验可为研究琯溪蜜柚蒸馏酒及其他柑橘果酒的香气质量提供参考依据。
关键词
蜜柚汁
蒸馏酒
气相色谱-质谱联用仪
嗅闻仪
香气
挥发性成分
Keywords
pomelo juice
liquor
gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS)
olfactory
aroma
volatile components
分类号
TS207.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
山梨醇对黑曲霉源α-L-鼠李糖苷酶(r-Rha1)热稳定性的影响
被引量:
2
3
作者
叶家影
孙江
李文静
倪辉
李利君
李清彪
机构
集美大学
海洋
食品
与
生物
工程
学院
集美大学福建省食品微生物与酶工程重点实验室
集美大学
厦门市
食品
生物
工程
技术研究中心
出处
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第10期96-103,共8页
基金
国家自然科学基金项目(U1805235)
厦门市科技局项目(3502Z20203058)
福建省平和县现代农业产业园中央财政奖补资金项目(PH2020)。
文摘
提高酶热稳定性是工业酶属性改造的重要目标。山梨醇作为广泛应用于提高酶稳定性的外源添加剂,目前对其影响酶热稳定性的机制仍不明确。因此,作者以黑曲霉源α-L-鼠李糖苷酶(r-Rha1)为研究对象,通过热失活动力学、圆二色谱和荧光光谱的谱学分析,研究山梨醇对α-L-鼠李糖苷酶热稳定性的影响机制。结果表明,在60~70℃下,加入山梨醇可改善α-L-鼠李糖苷酶的热稳定性;在60、65、70℃条件下,加入1.2 mol/L山梨醇可分别将半衰期提高29、25、10倍;圆二色谱和荧光光谱结果表明山梨醇通过增强α-L-鼠李糖苷酶的表面疏水活性和结构刚性,从而提高其热稳定性。通过探究山梨醇对α-L-鼠李糖苷酶热稳定性的影响,进一步证明山梨醇提高酶热稳定性的普遍适用性,同时为后续α-L-鼠李糖苷酶的工业应用提供了参考。
关键词
α-L-鼠李糖苷酶
山梨醇
热稳定性
荧光光谱
圆二色谱
Keywords
α-L-rhamnosidase
sorbitol
thermal stability
fluorescence chromatogram
circular dichroism spectrum
分类号
Q [生物学]
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职称材料
题名
浮游植物细胞自噬作用特点及研究方法
被引量:
2
4
作者
卢雪
蔡伟聪
刘静雯
机构
集美大学
食品
与
生物
工程
学院
集美大学福建省食品微生物与酶工程重点实验室
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2020年第4期105-113,共9页
基金
国家自然科学基金项目(41576166)
福建省自然科学基金项目(2019J01696)
福建省食品微生物与酶工程重点实验室开放基金项目(B18097-1)。
文摘
自噬(Autophagy)是真核生物细胞中一类高度保守的、依赖于溶酶体或液泡途径对胞质蛋白和细胞器进行降解的生物学过程。细胞自噬除维持细胞稳态外,在细胞响应各种外界胁迫中也发挥重要作用。近年来,陆续发现浮游植物能够通过细胞自噬应答众多环境胁迫,并在浮游植物细胞中鉴定出了类似于哺乳动物细胞中的核心自噬功能单位。自噬作为一种独特的程序性细胞死亡(PCD)形式,对浮游植物遭受胁迫后的个体存活及种群延续具有至关重要的作用。因此,细胞自噬也将成为浮游植物研究领域的一个新的着力点。主要综述了浮游植物细胞中自噬的保守性、诱导因素、调控机制、自噬与凋亡的交互作用以及浮游植物自噬研究方法等研究进展。
关键词
浮游植物细胞自噬
保守性
诱导因素
自噬调控机制
自噬与凋亡
自噬研究方法
Keywords
phytoplankton autophagy
conservativity
induction factors
autophagy mechanism
autophagy and apoptosis
autophagy research methods
分类号
Q938.8 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
联合突变对α-L-鼠李糖苷酶性质的影响
唐艺玲
刘小琴
李乐
李利君
倪辉
《食品与生物技术学报》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
琯溪蜜柚蒸馏酒香气特征及风味成分分析
李睿
倪辉
李婷
张婷
李利君
杨远帆
李清彪
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019
7
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职称材料
3
山梨醇对黑曲霉源α-L-鼠李糖苷酶(r-Rha1)热稳定性的影响
叶家影
孙江
李文静
倪辉
李利君
李清彪
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
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职称材料
4
浮游植物细胞自噬作用特点及研究方法
卢雪
蔡伟聪
刘静雯
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2020
2
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职称材料
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