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嗜水气单胞菌在欧洲鳗鲡体内的免疫组织化学定位与病理观察被引量：14: 1; 作者郭松林冯建军 +1 位作者熊静关瑞章《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期494-499,共6页; 采用从鳗鲡分离的嗜水气单胞菌进行人工感染试验,以探讨感染后不同时期嗜水气单胞菌在欧洲鳗鲡肝脏、肾脏和肠道内的定位和由此引起的组织病理学变化。将细菌分2次对鳗鲡进行肌肉注射。第1次采用每克体质量10^3-10^7cfu的不同剂量注射... 展开更多; 关键词欧洲鳗鲡嗜水气单胞菌人工感染病理变化免疫组织化学定位; 在线阅读下载PDF 职称材料

欧洲鳗鲡免疫球蛋白轻链基因的克隆及表达分析被引量：2: 2; 作者冯建军郭松林林鹏《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期81-89,共9页; 通过RT-PCR技术克隆欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)Ig轻链基因cDNA全长序列,命名为AaIgL,其全长为1 016bp,开放阅读框为714bp,编码238个氨基酸。将该基因片段与pET-his载体连接构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,其表达产物经SDS... 展开更多; 关键词欧洲鳗鲡免疫球蛋白轻链原核表达荧光定量PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

鳗鲡病原菌外膜蛋白三联表达载体的构建、表达与表达产物的纯化被引量：4: 3; 作者赵金平段丽华郭松林《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期104-110,共7页; 为研制能同时预防鳗鲡3种常见病原菌感染的三联外膜蛋白疫苗,分别选择创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)外膜蛋白的ompU、ompA和omp porinП基因,设计特异性引物... 展开更多; 关键词迟缓爱德华氏菌创伤弧菌嗜水气单胞菌三联外膜蛋白表达与纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

迟钝爱德华氏菌外膜蛋白基因工程表达产物的免疫原性被引量：1: 4; 作者段丽华冯建军 +2 位作者郭松林陈义航阮彩章《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期97-104,共8页; 构建迟钝爱德华氏菌外膜蛋白重组表达载体后,表达纯化获得分子质量约53ku的外膜蛋白。将100尾日本鳗鲡均分为2组,分别腹腔注射牛血清白蛋白(BSA,0.5mg/mL)和迟钝爱德华氏菌外膜蛋白(Omp,0.5mg/mL)0.2mL/尾。于免疫后第7、14和28天采集... 展开更多; 关键词日本鳗鲡迟钝爱德华氏菌外膜蛋白免疫原性相对免疫保护率; 在线阅读下载PDF 职称材料

欧洲鳗鲡T7噬菌体单链抗体库的构建、淘选及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：2: 5; 作者徐元凯林鹏 +2 位作者王艺磊彭欣慰冯建军《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期401-406,共6页; 为构建欧洲鳗鲡噬菌体天然单链抗体(scFv)库,筛选鳗鲡病原菌特异性scFv,本研究采用PCR扩增健康欧洲鳗鲡重链可变区(VH)与轻链可变区(VL)基因,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术扩增完整的scFv基因(VH-Linker-VL)序列,与T7噬菌体载体连接,经... 展开更多; 关键词欧洲鳗鲡 T7噬菌体单链抗体库外膜蛋白原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

嗜水气单胞菌与迟顿爱德华氏菌二联外膜蛋白的表达及其初步免疫原性被引量：7: 6; 作者王玉冯建军 +1 位作者郭松林林鹏《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期96-102,共7页; 在构建鳗鲡病原性嗜水气单胞菌与爱德华氏菌二联外膜蛋白重组表达载体的基础上,采用不同的诱导剂(IPTG)浓度、诱导温度、诱导时间和诱导时菌液浓度对重组表达载体的表达条件进行探讨。结果表明,不同诱导剂(IPTG)浓度、诱导温度、诱导时... 展开更多; 关键词二联外膜蛋白嗜水气单细胞菌迟钝爱德华氏菌鳗鲡免疫原性; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名嗜水气单胞菌在欧洲鳗鲡体内的免疫组织化学定位与病理观察被引量：14: 1; 作者郭松林冯建军熊静关瑞章; 机构集美大学水产学院/鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心; 出处《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期494-499,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31001136) 国家公益性行业(农业)科研专项(nyhyzx07-043); 文摘采用从鳗鲡分离的嗜水气单胞菌进行人工感染试验,以探讨感染后不同时期嗜水气单胞菌在欧洲鳗鲡肝脏、肾脏和肠道内的定位和由此引起的组织病理学变化。将细菌分2次对鳗鲡进行肌肉注射。第1次采用每克体质量10^3-10^7cfu的不同剂量注射以确定该菌的半数致死量,结果表明其半数致死量为5×10^4cfu/g。第2次以每尾鱼1×10^7cfu的剂量注射欧洲鳗鲡,此后分别在注射后6、24、48 h采集鳗鲡的肝脏、肾脏、肠道进行组织病理学和免疫组织化学定位研究。结果表明：3个时期的临床症状和病理变化存在一定的差别,鳗鲡早期无明显病理变化,而后期主要表现为败血症症状;鳗鲡肾脏组织的病理变化较其他脏器明显,主要表现为肾小管上皮细胞肿胀和肾小球坏死脱落;鳗鲡肝脏则主要表现为严重充血,肠道偶见肠粘膜脱落。免疫组织化学定位结果表明,感染细菌主要分布在鳗鲡肾脏内,肝脏和肠道也有感染细菌分布。; 关键词欧洲鳗鲡嗜水气单胞菌人工感染病理变化免疫组织化学定位; Keywords Anguilla anguilla Aeromonas hydrophila artificial infection pathological change immunohistochemistry localization; 分类号 Q959.6 [生物学—动物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名欧洲鳗鲡免疫球蛋白轻链基因的克隆及表达分析被引量：2: 2; 作者冯建军郭松林林鹏; 机构集美大学水产学院/鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心/农业部东海海水健康养殖重点实验室; 出处《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期81-89,共9页; 基金国家自然科学基金项目(31272685) 福建省教育厅项目(JA11150) +1 种基金集美大学科研基金项目(C60819); 文摘通过RT-PCR技术克隆欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)Ig轻链基因cDNA全长序列,命名为AaIgL,其全长为1 016bp,开放阅读框为714bp,编码238个氨基酸。将该基因片段与pET-his载体连接构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,其表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析,结果表明新增的27ku蛋白条带与预期值相符,且与兔抗欧洲鳗鲡IgM血清发生特异性显色反应,证实了AaIgL基因能够在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达;实时荧光定量PCR检测结果发现:AaIgL在欧洲鳗鲡各组织中均有表达,其中脾脏的表达量最高,肾脏和心脏中也有较高的表达水平,而肝脏、肌肉、鳃以及肠中的表达量较低;欧洲鳗鲡经山羊IgG肌肉注射后脾脏和肾脏的AaIgL表达水平明显上升,其峰值分别为第7天和第14天,AaIgL在脾脏的表达量显著高于肾脏,但是第21天后均恢复至正常水平。以上结果表明,AaIgL在欧洲鳗鲡机体免疫防御中发挥重要作用,脾脏是AaIgL基因的主要表达器官。; 关键词欧洲鳗鲡免疫球蛋白轻链原核表达荧光定量PCR; Keywords Anguilla anguilla immunoglobulin light chain（IgL） prokaryotic expression realtime PCR; 分类号 S965.223 [农业科学—水产养殖]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鳗鲡病原菌外膜蛋白三联表达载体的构建、表达与表达产物的纯化被引量：4: 3; 作者赵金平段丽华郭松林; 机构集美大学水产学院/鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心; 出处《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期104-110,共7页; 基金国家自然科学基金项目(31001136) 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心开放课题(RE201506); 文摘为研制能同时预防鳗鲡3种常见病原菌感染的三联外膜蛋白疫苗,分别选择创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)外膜蛋白的ompU、ompA和omp porinП基因,设计特异性引物后分别扩增基因中表达外膜蛋白膜外区域且抗原决定簇丰富的3个基因片段并通过融合PCR技术进行连接。根据表达载体(pGEX-2T-his)的限制性酶切位点,在连接片段的两端引入BamHⅠ和EcoRⅠ两个酶切位点,将3个外膜蛋白基因片段与质粒连接后成功构建了重组表达载体。重组表达载体成功转化大肠杆菌(E.coli BL21)后,当菌液浓度(D600nm)为0.8时加入0.25mmol/L IPTG,16℃培养过夜后得到了高效表达。表达产物用镍柱进行洗脱纯化后经梯度尿素复性获得了分子质量约85ku的高纯度蛋白。; 关键词迟缓爱德华氏菌创伤弧菌嗜水气单胞菌三联外膜蛋白表达与纯化; Keywords Edwardsiella tarda Vibrio vulnificus Aeromonas hydrophila triple outer membrane protein expression and purification; 分类号 S942.5 [农业科学—水产养殖]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名迟钝爱德华氏菌外膜蛋白基因工程表达产物的免疫原性被引量：1: 4; 作者段丽华冯建军郭松林陈义航阮彩章; 机构集美大学水产学院/鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心; 出处《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期97-104,共8页; 基金福建省自然科学基金项目(2015J01143) 福建省教育厅项目(JA15283); 文摘构建迟钝爱德华氏菌外膜蛋白重组表达载体后,表达纯化获得分子质量约53ku的外膜蛋白。将100尾日本鳗鲡均分为2组,分别腹腔注射牛血清白蛋白(BSA,0.5mg/mL)和迟钝爱德华氏菌外膜蛋白(Omp,0.5mg/mL)0.2mL/尾。于免疫后第7、14和28天采集鳗鲡血液、粘液、肝脏和肾脏,测定各时间点的补体活性、溶菌酶活性、全血细胞转化水平和血清抗体效价。结果发现,外膜蛋白组鳗鲡的补体活性于免疫后第7天极显著高于对照组;其抗体效价于第14天和第28天显著或极显著高于对照组。免疫后第28天以迟钝爱德华氏菌、嗜水气单胞菌和创伤弧菌(1.0×107 cfu)腹腔注射感染鳗鲡。结果发现,外膜蛋白组鳗鲡对迟钝爱德华氏菌、嗜水气单胞菌和创伤弧菌的相对免疫保护率分别为71.4%、50.0%和12.5%。表明鳗鲡注射迟钝爱德华氏菌基因工程表达外膜后显著提高了其对迟钝爱德华氏菌感染的抵抗力,对嗜水气单胞菌的感染也有明显的交叉保护效果,但对创伤弧菌的交叉保护效果较弱。; 关键词日本鳗鲡迟钝爱德华氏菌外膜蛋白免疫原性相对免疫保护率; Keywords Anguilla japonica Edwardsiella tarda outer membrane protein immunogenicity relative percent survival(RPS); 分类号 S941.4 [农业科学—水产养殖]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名欧洲鳗鲡T7噬菌体单链抗体库的构建、淘选及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：2: 5; 作者徐元凯林鹏王艺磊彭欣慰冯建军; 机构集美大学; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期401-406,共6页; 基金福建省自然科学基金项目(2017J01637) 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心开放基金(RE201905) 集美大学自然科学基金(ZP2020017); 文摘为构建欧洲鳗鲡噬菌体天然单链抗体(scFv)库,筛选鳗鲡病原菌特异性scFv,本研究采用PCR扩增健康欧洲鳗鲡重链可变区(VH)与轻链可变区(VL)基因,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术扩增完整的scFv基因(VH-Linker-VL)序列,与T7噬菌体载体连接,经体外包装后接种于宿主菌BLT5403,增殖后经PCR扩增获得噬菌体scFv库。进而以嗜水气单胞菌重组外膜蛋白为抗原,对噬菌体scFv库进行4轮生物淘洗,采用阻断ELISA选取抗体活性最高的scFv,构建pGEX-4T-2-OMP-scFv重组表达载体,转化大肠杆菌BL21进行原核表达。结果显示:本研究得到了完整的scFv基因序列,并以此构建的噬菌体scFv原始库容为1.26×10~6pfu,经扩增后初级库滴度为2.8×10~9pfu/mL;淘洗获得的嗜水气单胞菌重组外膜蛋白scFv抑制率最高达到81.7%,并实现了该scFv在大肠杆菌中的表达,SDS-PAGE检测其蛋白分子量约为53 ku。本研究构建的欧洲鳗鲡噬菌体天然scFv库及淘选获得的特异性嗜水气单胞菌scFv,为养殖鳗鲡病原菌的检测与免疫防治奠定了基础。; 关键词欧洲鳗鲡 T7噬菌体单链抗体库外膜蛋白原核表达; Keywords Anguilla anguilla T7 phage scFv library outer membrane protein(OMP) prokaryotic expression; 分类号 S943 [农业科学—水产养殖]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名嗜水气单胞菌与迟顿爱德华氏菌二联外膜蛋白的表达及其初步免疫原性被引量：7: 6; 作者王玉冯建军郭松林林鹏; 机构集美大学水产学院/鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心; 出处《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期96-102,共7页; 基金国家自然科学基金项目(31001136) 福建省海洋与渔业厅项目(201212140006); 文摘在构建鳗鲡病原性嗜水气单胞菌与爱德华氏菌二联外膜蛋白重组表达载体的基础上,采用不同的诱导剂(IPTG)浓度、诱导温度、诱导时间和诱导时菌液浓度对重组表达载体的表达条件进行探讨。结果表明,不同诱导剂(IPTG)浓度、诱导温度、诱导时间和诱导时菌液浓度对该载体的表达无明显影响。在菌液浓度D600nm=0.8时,采用0.25mmol/L的IPTG经16℃诱导培养过夜后表达。表达产物采用KTApurifier-100蛋白质纯化仪,结合His标签柱亲和层析后获得分子质量87.1ku的高纯度蛋白。蛋白经透析复性后免疫鳗鲡以初步研究其免疫原性。结果表明,免疫后第28天,重组蛋白不同剂量注射组的鳗鲡血清中抗体效价均显著高于PBS注射对照组,初步表明该重组表达蛋白具有良好的免疫原性。; 关键词二联外膜蛋白嗜水气单细胞菌迟钝爱德华氏菌鳗鲡免疫原性; Keywords bivalent OMP Aeromonas hydrophila Edwardsiella tarda Anguilla rostrata immunogenicity; 分类号 S942.5 [农业科学—水产养殖]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	嗜水气单胞菌在欧洲鳗鲡体内的免疫组织化学定位与病理观察	郭松林冯建军熊静关瑞章	《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	14	在线阅读下载PDF 职称材料
2	欧洲鳗鲡免疫球蛋白轻链基因的克隆及表达分析	冯建军郭松林林鹏	《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2015	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	鳗鲡病原菌外膜蛋白三联表达载体的构建、表达与表达产物的纯化	赵金平段丽华郭松林	《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2015	4	在线阅读下载PDF 职称材料
4	迟钝爱德华氏菌外膜蛋白基因工程表达产物的免疫原性	段丽华冯建军郭松林陈义航阮彩章	《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2016	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	欧洲鳗鲡T7噬菌体单链抗体库的构建、淘选及其在大肠杆菌中的高效表达	徐元凯林鹏王艺磊彭欣慰冯建军	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2020	2	在线阅读下载PDF 职称材料
6	嗜水气单胞菌与迟顿爱德华氏菌二联外膜蛋白的表达及其初步免疫原性	王玉冯建军郭松林林鹏	《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2015	7	在线阅读下载PDF 职称材料