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MiR-125b-5p通过靶向DRAM2抑制BCG介导的巨噬细胞自噬 被引量:4
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作者 虞秀锋 姬文兰 王启源 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期1564-1568,共5页
目的:本文旨在探讨miR-125b-5p对BCG介导的细胞自噬途径的调控及巨噬细胞内BCG存活的影响及其可能的作用机制。方法:采用卡介苗菌株BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,用RT-PCR检测miR-125b-5p的表达量。Western blot检测DRAM2及自噬相关蛋... 目的:本文旨在探讨miR-125b-5p对BCG介导的细胞自噬途径的调控及巨噬细胞内BCG存活的影响及其可能的作用机制。方法:采用卡介苗菌株BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,用RT-PCR检测miR-125b-5p的表达量。Western blot检测DRAM2及自噬相关蛋白表达水平。菌落形成单位(CFU)计数检测BCG生存率。通过生物信息学软件预测miR-125b-5p的靶基因。利用双萤光素酶报告系统、RT-PCR及Western blot法验证miR-125b-5p与DRAM2的靶向作用关系。结果: BCG感染的巨噬细胞RAW264.7中miR-125b-5p的表达明显上调,且呈时间依赖性。另外,miR-125b-5p过表达明显下调巨噬细胞中LC3-Ⅱ表达量,同时上调p62的表达水平,从而降低细胞的自噬水平。此外,过表达miR-125b-5p通过负性调控自噬过程增加胞内BCG的存活率。生物信息学分析表明DRAM2是miR-125b-5p的靶基因。双荧光素酶报告系统结果验证miR-125b-5p可明显抑制DRAM2的相对荧光素酶活性。RT-PCR及Western blot法证实miR-125b-5p可靶向作用于DRAM2-3′-UTR并抑制其表达。结论: BCG感染巨噬细胞RAW264.7后,可使miR-125b-5p表达明显上调,通过靶向抑制DRAM2的表达,从而参与调控巨噬细胞RAW264.7的自噬途径,继而影响BCG在细胞内的存活,这可能是MTB的潜伏感染的机制之一。 展开更多
关键词 MiR-125b-5p 自噬 DRAM2 结核分枝杆菌
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MiR-506-3p/SOCS-3促进BCG感染巨噬细胞引发的炎症应答反应 被引量:3
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作者 虞秀锋 王启源 +1 位作者 姬文兰 王亚梅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期297-302,共6页
目的探究miR-506-3p在卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染巨噬细胞诱导的炎症应答进程中的作用及其机制。方法制备BCG感染巨噬细胞RAW264.7模型;采用RT-PCR检测miR-506-3p及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS的mRNA表达水... 目的探究miR-506-3p在卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染巨噬细胞诱导的炎症应答进程中的作用及其机制。方法制备BCG感染巨噬细胞RAW264.7模型;采用RT-PCR检测miR-506-3p及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS的mRNA表达水平;利用ELISA方法测定炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平;用Griess法评估NO的分泌情况;CFU计数法评估BCG存活率;应用双荧光素酶报告实验、RT-PCR及Western Blot法验证miR-506-3p与SOCS-3的靶向调控关系。结果BCG感染能够引起RAW264.7细胞中miR-506-3p的表达量显著下调,并且具有时间依赖性。另外,miR-506-3p过表达后可显著增加BCG感染的RAW264.7细胞中炎症细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白水平。同时,miR-506-3p上调能够明显增加BCG感染后RAW264.7中NO的产生及iNOS的表达。此外,过表达miR-506-3p可明显降低胞内BCG的存活率。更为重要的是miR-506-3p能够靶向结合SOCS-3的3′-UTR,并可负调控其表达。结论MiR-506-3p通过抑制靶基因SOCS-3从而促进BCG刺激诱导的巨噬细胞炎症反应进程,从而导致胞内BCG的存活率降低,有望为结核病的临床研究和治疗提供一个新的潜在靶点。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 MiR-506-3p 炎症应答 巨噬细胞
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miR-367-3p靶向SMURF1抑制BCG介导的巨噬细胞凋亡和自噬 被引量:3
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作者 姬文兰 王启源 +2 位作者 虞秀锋 胡萍 王亚梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第18期2195-2199,共5页
目的:本研究旨在探讨miR-367-3p对BCG介导的细胞凋亡和自噬途径的调控的影响及其可能的作用机制。方法:采用卡介苗菌株BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,RT-PCR检测miR-367-3p与SMURF1mRNA的表达;Westernblot检测SMURF1、凋亡相关蛋白及自... 目的:本研究旨在探讨miR-367-3p对BCG介导的细胞凋亡和自噬途径的调控的影响及其可能的作用机制。方法:采用卡介苗菌株BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,RT-PCR检测miR-367-3p与SMURF1mRNA的表达;Westernblot检测SMURF1、凋亡相关蛋白及自噬相关蛋白表达水平;菌落形成单位(CFU)计数检测BCG生存率;运用ELISA技术检测巨噬细胞凋亡率;双荧光素酶报告系统、RT-PCR及Westernblot法验证miR-367-3p与SMURF1之间的靶向调控关系。结果:BCG感染诱导巨噬细胞RAW246.7中miR-367-3p高表达,并呈时间依赖性。此外,下调miR-367-3p明显降低BCG感染的巨噬细胞的存活率,并促进巨噬细胞凋亡,同时下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达且上调促凋亡蛋白Bax的表达水平。另外,抑制miR-367-3p表达明显增加巨噬细胞中LC3-Ⅱ表达水平,同时降低p62的表达量,从而加强细胞的自噬水平。生物信息学分析显示SMURF1是miR-367-3p的靶基因。双荧光素酶报告系统、RT-PCR及Westernblot结果证实miR-367-3p可靶向作用于SMURF1-3′-UTR并负调控其表达。结论:下调miR-367-3p通过靶向调控SMURF1可促进巨噬细胞凋亡和自噬进程,进而介导了BCG的免疫逃逸从而抑制胞内BCG的生存,提示miR-367-3p有望成为结核感染的诊断标志物和治疗性疫苗的靶标,可为结核病的基因诊断和治疗提供参考。 展开更多
关键词 miR-367-3p 自噬 凋亡 SMURF1
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LRRK2/NF-κB信号对BCG诱导巨噬细胞RAW264.7炎症应答的调控 被引量:2
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作者 王启源 徐红艳 姬文兰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期528-532,共5页
目的:探讨富亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)在巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染中的作用机制。方法:用结核分枝杆菌疫苗株卡介苗(BCG)感染巨噬细胞RAW264.7,菌落形成单位(CFU)计数检测结核分枝杆菌生存率;酶联免疫吸附法测定白细胞介素(IL)-1β... 目的:探讨富亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)在巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染中的作用机制。方法:用结核分枝杆菌疫苗株卡介苗(BCG)感染巨噬细胞RAW264.7,菌落形成单位(CFU)计数检测结核分枝杆菌生存率;酶联免疫吸附法测定白细胞介素(IL)-1β、IL-6和干扰素γ(IFN-γ)表达水平;q PCR和Western blot法分别检测相关m RNA和蛋白的表达。结果:BCG感染的巨噬细胞RAW264.7中LRRK2的m RNA和蛋白表达均显著上调,并刺激RAW264.7细胞释放大量细胞因子。此外,沉默LRRK2明显抑制BCG感染巨噬细胞的分枝杆菌存活率;同时,沉默LRRK2降低BCG刺激诱导分泌的促炎细胞因子IL-1β、IL-6和IFN-γ。更为重要的是,LRRK2可能通过正调控NF-κB通路调节BCG诱导的炎症应答进程。结论:LRRK2/NF-κB信号正调控BCG刺激诱导的巨噬细胞炎症应答进程。本研究结果为结核病在基因水平上的诊断和治疗提供了实验依据。 展开更多
关键词 富亮氨酸重复序列激酶2 结核分枝杆菌 巨噬细胞 炎症应答
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