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一株黏细菌Archangium gephyra的鉴定及其代谢产物抑菌活性的研究 被引量：8
1
作者 王军 闫立昆 +1 位作者 李宏铎 万一 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期437-441,共5页
对筛选获得的一株具抗真菌活性的黏细菌NX0045进行菌种鉴定,并研究其代谢产物的抑菌活性。根据子实体形态及16S rDNA序列分析鉴定NX0045;利用枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和大肠杆菌为测试菌,研究NX0045代谢产物的抗细菌活... 对筛选获得的一株具抗真菌活性的黏细菌NX0045进行菌种鉴定,并研究其代谢产物的抑菌活性。根据子实体形态及16S rDNA序列分析鉴定NX0045;利用枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和大肠杆菌为测试菌,研究NX0045代谢产物的抗细菌活性;利用白色念珠菌及酮康唑致敏的白色念珠菌为测试菌,对NX0045代谢产物的抗真菌活性进行研究。菌种鉴定结果表明NX0045为过渡原囊菌(Archangium gephyra);抑菌实验结果表明,NX0045代谢产物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和大肠杆菌均具有拮抗作用;其代谢产物单独抗真菌作用不明显,但与酮康唑具有明显的互动抗真菌活性。研究结果显示过渡原囊菌NX0045代谢产物对细菌具有较好的拮抗作用,并且具有抗真菌互动药物研究的价值。 展开更多
关键词 过渡原囊菌 鉴定 代谢产物 抑菌活性
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秦岭丹江流域黏细菌的分离及其代谢产物研究 被引量：2
2
作者 王军 李宏铎 +2 位作者 张琨 高磊 万一 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第10期63-70,79,共9页
[目的]分离陕西秦岭丹江流域土壤中的黏细菌,收集其代谢产物,对代谢产物成分和活性进行分析.[方法]采用大肠杆菌诱导法和滤纸片诱导法分离从丹江流域采集的18份土壤样品中的黏细菌,用摇瓶发酵得到其代谢产物,采用枯草芽孢杆菌、金黄色... [目的]分离陕西秦岭丹江流域土壤中的黏细菌,收集其代谢产物,对代谢产物成分和活性进行分析.[方法]采用大肠杆菌诱导法和滤纸片诱导法分离从丹江流域采集的18份土壤样品中的黏细菌,用摇瓶发酵得到其代谢产物,采用枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和大肠杆菌作为指示菌对代谢产物进行平板抑菌试验;对4种指示菌抑制活性明显菌株的代谢产物成分进行HPLC和薄层色谱(TLC)分析,采用细胞凋亡法测试了代谢产物组分对HepG2肝癌细胞的毒性.[结果]共分离纯化出23株黏细菌,包括黏球菌属(Myxococcus) 15株,珊瑚球菌属(Corallococcus)3株,孢囊杆菌属(Cystobacter)1株,原囊菌属(Archangium)3株,软骨霉状菌属(Chondromyces)1 株.抑菌试验表明15号菌株的2号代谢产物对4种指示菌均有不同程度的抑制作用.对HPLC得到的15号菌株2号代谢产物的5号组分进行研究,结果表明,其能明显增加HepG2细胞凋亡.[结论]秦岭丹江流域土样中的黏细菌具有一定的多样性,得到1株活性菌株,其代谢产物具有抑菌活性和抗肿瘤细胞活性. 展开更多
关键词 黏细菌 代谢产物 生物活性 丹江流域
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秦巴山区虫生真菌的分离鉴定与多样性分析 被引量：10
3
作者 王军 张琨 +4 位作者 张绪 刘柳 宁硕瀛 陈川 万一 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2021年第6期122-129,共8页
【目的】对陕西境内秦巴山区5个不同地区采集的昆虫进行虫生真菌分离鉴定及多样性分析,为秦巴山区农林作物害虫的生物防治提供菌种资源。【方法】2018-2019年连续2年从陕西境内秦巴山区的留坝县、柞水县、凤县、周至县和鄠邑区5个地区,... 【目的】对陕西境内秦巴山区5个不同地区采集的昆虫进行虫生真菌分离鉴定及多样性分析,为秦巴山区农林作物害虫的生物防治提供菌种资源。【方法】2018-2019年连续2年从陕西境内秦巴山区的留坝县、柞水县、凤县、周至县和鄠邑区5个地区,选择阔叶林、针叶林及低矮灌木等不同生境进行昆虫样本采集。在无菌操作条件下,利用孟加拉红培养基分离虫生真菌,采用形态学和分子生物学方法对虫生真菌进行鉴定,并采用Simpson多样性指数、Shannon-Wiener指数和均匀度指数(Pielou)对秦巴山区虫生真菌的多样性进行分析。【结果】2018-2019年连续2年从陕西境内秦巴山区的留坝县、柞水县、凤县、周至县和鄠邑区共采集昆虫样本243只,归属于8个目。利用孟加拉红培养基从采集的243只昆虫表面和虫体中分离得到虫生真菌187株,经形态学和分子生物学鉴定归属于9目13科22属。优势目为丛梗孢目(Moniliales),共120株虫生真菌(占比64.17%),归属于2科9属,其中棒束孢属(Isaria)占比最大(占总数量的18.72%)。多样性分析结果表明,秦巴山区虫生真菌群落多样性丰富,但物种均匀度偏低,优势种属现象较为明显,有4个地区的优势菌均为棒束孢属(Isaria)。此外,5个昆虫采集地区虫生真菌群落具有一定的多样性,但单一地区物种分布的均匀程度较整体偏高。【结论】秦巴山区虫生真菌种类多、分布广,多样性较为丰富。 展开更多
关键词 秦巴山区 虫生真菌 生物农药 物种多样性
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金黄色葡萄球菌肠毒素B的原核表达、纯化及鉴定 被引量：3
4
作者 张琨 张月娟 万一 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期69-73,共5页
为高效获取金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)用于SEB的快速检测,通过原核表达方法表达SEB,对其纯化方法进行研究,并通过Western-blot和制备的SEB纳米磁性免疫层析快速检测试纸条检测其抗原性。研究表明:SEB成功克隆入原核表达载体pET22b(+),... 为高效获取金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)用于SEB的快速检测,通过原核表达方法表达SEB,对其纯化方法进行研究,并通过Western-blot和制备的SEB纳米磁性免疫层析快速检测试纸条检测其抗原性。研究表明:SEB成功克隆入原核表达载体pET22b(+),并在E.coil BL21(DE3)中得到有效表达,表达量达65.8%;采用Ni柱亲和层析和DEAE阴离子层析两步纯化得到纯度为95.2%的SEB,Western-blot和SEB免疫层析快速检测试纸条检测显示所纯化的重组SEB具有SEB的抗原性,可用于SEB快速检测试纸的应用研究。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素B 原核表达 纯化 免疫层析快速检测
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黏细菌活性代谢产物的互动筛选 被引量：1
5
作者 王军 王琰 +3 位作者 闫立昆 张琨 张月娟 万一 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第11期196-200,共5页
【目的】研究互动筛选在黏细菌活性代谢产物筛选中的效果,以期为有效地获得高效、低毒的黏细菌活性产物提供支持。【方法】在构建互动筛选抗真菌模型的基础上,对分离自陕西秦巴山区的黏细菌代谢产物进行互动筛选和非互动筛选,比较代谢... 【目的】研究互动筛选在黏细菌活性代谢产物筛选中的效果,以期为有效地获得高效、低毒的黏细菌活性产物提供支持。【方法】在构建互动筛选抗真菌模型的基础上,对分离自陕西秦巴山区的黏细菌代谢产物进行互动筛选和非互动筛选,比较代谢产物初筛、复筛后的阳性率,并对筛选结果进行验证,最后对筛选的黏细菌阳性菌株的16SrDNA序列进行比对和同源性分析。【结果】利用互动筛选模型经初筛和复筛分别获得阳性产物25和19个,阳性率分别为2.23%和1.69%;而非互动筛选模型经初筛和复筛获得的阳性产物分别为20和4个,阳性率分别为1.78%和0.36%。互动筛选试验的重现性为100%,而非互动筛选试验的重观性为50%。对互动筛选出的19个代谢产物的15株黏细菌来源菌株进行鉴定发现,菌株83的16SrDNA序列与亲缘关系最近的Myxococcus virescens strain DSM 494的同源性仅为96%,可能为新菌种。【结论】互动筛选方法能够有效提高黏细菌活性产物筛选的阳性率,且重现性好。本研究所分离菌株83可能为1种新菌种,有望从中发现新的活性产物。 展开更多
关键词 互动筛选 黏细菌 代谢产物 抗真菌活性 互动药物
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基于顺磁微粒的金黄色葡萄球菌肠毒素B免疫层析试纸条的制备 被引量：1
6
作者 张琨 王伟华 +4 位作者 万一 颜真 訾静 王军 高磊 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期403-407,共5页
采用基于顺磁微粒标记抗体的免疫层析法,制备金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）快速定量检测的层析试纸条。利用EDC和NHS交联活化顺磁微粒,对顺磁微粒包被抗体的体系进行优化;根据双抗夹心法原理制备免疫层析试纸条,对制备的SEB免疫层析试... 采用基于顺磁微粒标记抗体的免疫层析法,制备金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）快速定量检测的层析试纸条。利用EDC和NHS交联活化顺磁微粒,对顺磁微粒包被抗体的体系进行优化;根据双抗夹心法原理制备免疫层析试纸条,对制备的SEB免疫层析试纸条进行测试研究。优化的顺磁微粒偶联抗体的缓冲体系为p H 9.0,5mmol/L硼酸,0.05%Tween-20;磁珠包被抗体量为125μg/2mg磁珠,封闭剂为0.25%的脱脂牛奶,磁珠保存液为5mmol/L硼酸、0.05%Tween-20＋0.05%Triton X-100,0.01%Na N3,0.5%BSA,p H9.0;建立的SEB顺磁微粒免疫层析试纸条T线抗体浓度为1mg/m L,最低检测限为1ng/m L,磁信号检测显示,该试纸条在SEB浓度0.1~1 000ng/m L范围内具有很好的线性关系。SEB顺磁微粒免疫层析法具有简单快速、灵敏度高、可定量的特点,可应用于SEB的快速检测。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素B 顺磁微粒 免疫层析
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秦岭地区羊肚菌根系土样黏细菌的分离
7
作者 王军 高磊 +1 位作者 张琨 万一 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第5期81-86,共6页
通过分离陕西秦岭地区羊肚菌根系土样中的黏细菌,建立黏细菌的分离方法,分析羊肚菌根系土样中黏细菌的多样性。采集自陕西商洛地区种植羊肚菌根系土样,采用不同诱导方法分离土样中的黏细菌,比较不同方法的出菌率,通过菌落形态、显微照... 通过分离陕西秦岭地区羊肚菌根系土样中的黏细菌,建立黏细菌的分离方法,分析羊肚菌根系土样中黏细菌的多样性。采集自陕西商洛地区种植羊肚菌根系土样,采用不同诱导方法分离土样中的黏细菌,比较不同方法的出菌率,通过菌落形态、显微照片对黏细菌进行观察,并结合16S rRNA序列,分析得到的黏细菌种类。采用活的大肠埃希菌作为诱导底物分离出的黏细菌数量最多,本次实验从羊肚菌根系土样中共分离纯化出17株黏细菌,包括5个属,其中黏球菌属(Myxococcus)12株,珊瑚球菌属(Corallococcus)2株,孢囊杆菌属(Cystobacter)1株,原囊菌属(Archangium)1株,标桩菌属(Stigmatella)1株。结果显示羊肚菌根系土壤有黏细菌存在,其中以黏球菌属居多,为后续探讨黏细菌与羊肚菌之间是否存在互生关系提供参考。 展开更多
关键词 羊肚菌 黏细菌 秦岭地区 分离纯化
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金黄色葡萄球菌肠毒素A的原核表达及鉴定
8
作者 张琨 王军 万一 《陕西农业科学》 2016年第8期27-30,共4页
[目的]高效制备金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)用于SEA快速检测相关产品的研究。[方法]通过原核表达的方法表达SEA,对其纯化方法进行研究,通过Western-blot和制备的SEA顺磁微粒免疫层析快速检测试纸条检测其免疫原性。[结果]SEA成功克隆入... [目的]高效制备金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)用于SEA快速检测相关产品的研究。[方法]通过原核表达的方法表达SEA,对其纯化方法进行研究,通过Western-blot和制备的SEA顺磁微粒免疫层析快速检测试纸条检测其免疫原性。[结果]SEA成功克隆入原核表达载体p ET22b(+),并在E.coil BL21(DE3)中得到有效表达,表达量达63.8%;采用低温诱导可获得可溶性的SEA,其表达量占总SEA的56.3%;可溶性SEA经Ni柱亲和层析一步纯化可得到纯度在95%左右的SEA,Western-blot检测显示所纯化的重组SEA具有SEA的免疫原性。[结论]研究构建的SEA表达载体能够高效、经济、简单的制备SEA,纯化的SEA可用于食物中毒中SEA快速检测相关产品的开发,具有一定的应用价值。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素A 原核表达 纯化 鉴定
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一种快速高效获取丝状真菌PCR反应模板的方法 被引量：4
9
作者 刘柳 张琨 +1 位作者 邓百万 万一 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2020年第3期98-103,共6页
建立一种快速高效获取丝状真菌PCR反应模板的方法,提高丝状真菌PCR鉴定效率。通过单因素法对机械破壁联合微波法进行条件优化,利用优化后的方法获取13株不同种属丝状真菌的PCR反应模板,同时与Chelex-100法、机械破壁法作对比,以试剂盒... 建立一种快速高效获取丝状真菌PCR反应模板的方法,提高丝状真菌PCR鉴定效率。通过单因素法对机械破壁联合微波法进行条件优化,利用优化后的方法获取13株不同种属丝状真菌的PCR反应模板,同时与Chelex-100法、机械破壁法作对比,以试剂盒抽提法作为阳性对照,进行ITS序列扩增,琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。机械破壁联合微波法获取丝状真菌PCR反应模板的最佳条件为40 Hz机械破壁1 min、微波700 W高温裂解3 min,采取该法与试剂盒抽提法获得的模板均成功扩增13株不同种属丝状真菌ITS序列,且PCR鉴定结果一致;Chelex-100法获得的模板成功扩增6株丝状真菌ITS序列;机械破壁法获得的模板虽成功扩增9株丝状真菌ITS序列,但扩增效果欠佳。机械破壁联合微波法能够有效获取丝状真菌PCR反应模板,与试剂盒抽提法相比具有操作简便、快速高效的优点,提高丝状真菌PCR鉴定效率。 展开更多
关键词 丝状真菌 细胞裂解 PCR 快速鉴定
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