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致牛腹泻4种细菌多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用
被引量：
3
1
作者
高睿
徐伟
+4 位作者
罗艳
谢晓刚
李梦磊
张琪
许信刚
《动物医学进展》
北大核心
2023年第6期21-27,共7页
随着规模化和集约化养牛业的不断发展,多种致病菌混合感染造成牛腹泻严重制约了养牛业的快速发展,对腹泻病原进行快速准确鉴别诊断对疫病防控至关重要。根据沙门氏菌的ivnA基因、大肠埃希氏菌的23S rRNA基因、产气荚膜梭菌的plc基因以...
随着规模化和集约化养牛业的不断发展,多种致病菌混合感染造成牛腹泻严重制约了养牛业的快速发展,对腹泻病原进行快速准确鉴别诊断对疫病防控至关重要。根据沙门氏菌的ivnA基因、大肠埃希氏菌的23S rRNA基因、产气荚膜梭菌的plc基因以及志贺氏菌的ipaH基因的保守区域建立了可同时检测这4种细菌的多重荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性和重复性进行了研究。结果显示,建立的标准曲线线性关系良好;优化后的检测方法仅可特异性扩增出4种目标细菌;对大肠埃希氏菌、沙门氏菌、志贺氏菌和产气荚膜梭菌的最低检出限分别为9.4×10~1copies/μL、1.2×10~2copies/μL、9.1×10~1copies/μL和1.4×10~3copies/μL,该方法的灵敏性高于普通单项PCR检测方法10倍;批内、批间差异均小于5%。用此方法检测人工感染病料,每份病料均检测出对应攻毒细菌的荧光信号。以上结果表明,所建立的多重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于致牛腹泻细菌的实验室检测。
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关键词
大肠埃希氏菌
沙门氏菌
志贺氏菌
产气荚膜梭菌
多重荧光定量PCR
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职称材料
4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用
被引量：
3
2
作者
高睿
徐伟
+3 位作者
罗艳
谢晓刚
李梦磊
张琪
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2023年第10期20-28,共9页
【目的】建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛恶性卡他热病毒(MCFV)4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法,为BVDV、BCoV、BRV和MCFV的鉴别诊断提供技术支持。【方法】根据BVDV的5′UTR基因、BCoV的N...
【目的】建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛恶性卡他热病毒(MCFV)4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法,为BVDV、BCoV、BRV和MCFV的鉴别诊断提供技术支持。【方法】根据BVDV的5′UTR基因、BCoV的N基因、BRV的VP6基因和MCFV的ORF9基因的保守区域设计引物,克隆目的基因构建标准阳性重组质粒,建立可同时检测4种致牛腹泻病毒的多重荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。用建立的多重荧光定量PCR检测方法对76份临床样品进行检测,并与常规PCR检测方法的结果进行比较。【结果】建立了BVDV、BCoV、BRV和MCFV多重荧光定量PCR检测方法,该方法建立的标准曲线线性关系良好,仅可特异性扩增出4种目标基因片段;对BVDV、MCFV、BRV和BCoV的最低检出限分别为9.4×10^(1),1.4×10^(3),9.1×10^(1)和1.2×10^(2)拷贝/μL,与普通PCR相比,灵敏性高出10~1000倍;批内、批间差异均小于5%。76份临床样品检测结果显示,多重荧光定量PCR检测结果与普通PCR检测结果的符合率分别为98.7%(BCoV)、97.4%(BRV)、100.0%(BVDV)和100.0%(MCFV)。【结论】建立了BVDV、BCoV、BRV和MCFV多重荧光定量PCR检测方法,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于牛腹泻病毒病原的实验室检测。
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关键词
牛腹泻病
牛病毒性腹泻病毒
牛冠状病毒
牛恶性卡他热病毒
牛轮状病毒
多重荧光定量PCR检测
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职称材料
题名
致牛腹泻4种细菌多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用
被引量：
3
1
作者
高睿
徐伟
罗艳
谢晓刚
李梦磊
张琪
许信刚
机构
杨凌职业技术学院
动物
工程学院/
动物
疫
病防
控
陕西省
高校工程研究
中心
陕西省彬州市动物疫控中心
西北农林科技大学
动物
医学院
出处
《动物医学进展》
北大核心
2023年第6期21-27,共7页
基金
陕西省重点研发计划项目(2022NY-098)。
文摘
随着规模化和集约化养牛业的不断发展,多种致病菌混合感染造成牛腹泻严重制约了养牛业的快速发展,对腹泻病原进行快速准确鉴别诊断对疫病防控至关重要。根据沙门氏菌的ivnA基因、大肠埃希氏菌的23S rRNA基因、产气荚膜梭菌的plc基因以及志贺氏菌的ipaH基因的保守区域建立了可同时检测这4种细菌的多重荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性和重复性进行了研究。结果显示,建立的标准曲线线性关系良好;优化后的检测方法仅可特异性扩增出4种目标细菌;对大肠埃希氏菌、沙门氏菌、志贺氏菌和产气荚膜梭菌的最低检出限分别为9.4×10~1copies/μL、1.2×10~2copies/μL、9.1×10~1copies/μL和1.4×10~3copies/μL,该方法的灵敏性高于普通单项PCR检测方法10倍;批内、批间差异均小于5%。用此方法检测人工感染病料,每份病料均检测出对应攻毒细菌的荧光信号。以上结果表明,所建立的多重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于致牛腹泻细菌的实验室检测。
关键词
大肠埃希氏菌
沙门氏菌
志贺氏菌
产气荚膜梭菌
多重荧光定量PCR
Keywords
Escherichia coli
Salmonella
Shigella
Clostridium perfringens
Multiple real-time fluorescence quantitative PCR
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
S858.23 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用
被引量：
3
2
作者
高睿
徐伟
罗艳
谢晓刚
李梦磊
张琪
机构
杨凌职业技术学院
动物
工程分院/
动物
疫
病防
控
陕西省
高校工程研究
中心
陕西省彬州市动物疫控中心
西北农林科技大学
动物
医学院
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2023年第10期20-28,共9页
基金
陕西省重点研发计划一般项目(2022NY-098)。
文摘
【目的】建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛恶性卡他热病毒(MCFV)4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法,为BVDV、BCoV、BRV和MCFV的鉴别诊断提供技术支持。【方法】根据BVDV的5′UTR基因、BCoV的N基因、BRV的VP6基因和MCFV的ORF9基因的保守区域设计引物,克隆目的基因构建标准阳性重组质粒,建立可同时检测4种致牛腹泻病毒的多重荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。用建立的多重荧光定量PCR检测方法对76份临床样品进行检测,并与常规PCR检测方法的结果进行比较。【结果】建立了BVDV、BCoV、BRV和MCFV多重荧光定量PCR检测方法,该方法建立的标准曲线线性关系良好,仅可特异性扩增出4种目标基因片段;对BVDV、MCFV、BRV和BCoV的最低检出限分别为9.4×10^(1),1.4×10^(3),9.1×10^(1)和1.2×10^(2)拷贝/μL,与普通PCR相比,灵敏性高出10~1000倍;批内、批间差异均小于5%。76份临床样品检测结果显示,多重荧光定量PCR检测结果与普通PCR检测结果的符合率分别为98.7%(BCoV)、97.4%(BRV)、100.0%(BVDV)和100.0%(MCFV)。【结论】建立了BVDV、BCoV、BRV和MCFV多重荧光定量PCR检测方法,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于牛腹泻病毒病原的实验室检测。
关键词
牛腹泻病
牛病毒性腹泻病毒
牛冠状病毒
牛恶性卡他热病毒
牛轮状病毒
多重荧光定量PCR检测
Keywords
bovine diarrheal disease
bovine viral diarrhea virus
bovine coronavirus
bovine malignant catarrhal fever virus
bovine rotavirus
multiple fluorescence quantification PCR
分类号
S852.653 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
致牛腹泻4种细菌多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用
高睿
徐伟
罗艳
谢晓刚
李梦磊
张琪
许信刚
《动物医学进展》
北大核心
2023
3
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职称材料
2
4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用
高睿
徐伟
罗艳
谢晓刚
李梦磊
张琪
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2023
3
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