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PRRSV陕西分离株ORF3基因的克隆、序列分析及原核表达载体的构建 被引量:1
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作者 张琦 王菡 +2 位作者 黎径 梁靓 许信刚 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期21-26,共6页
根据GenBank公布的PRRSVORF3基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增PRRSV陕西分离株ORF3基因,将其克隆入pGEM-T载体中,测序并进行序列分析。再将ORF3基因亚克隆入pET-32a中,构建原核表达载体。结果扩增到765 bp的... 根据GenBank公布的PRRSVORF3基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增PRRSV陕西分离株ORF3基因,将其克隆入pGEM-T载体中,测序并进行序列分析。再将ORF3基因亚克隆入pET-32a中,构建原核表达载体。结果扩增到765 bp的PRRSV全长ORF3基因,序列分析结果表明,分离株与SY0608亲缘关系较近,而与CH-2、HB-2关系较远。重组原核表达质粒经酶切鉴定正确后命名为pET-GP3,为进一步研究GP3蛋白的原核表达、免疫特性、结构与功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 陕西分离株 ORF3基因 序列分析 原核表达载体
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采用新型固相萃取柱快速测定食用植物油中苯并[a]芘 被引量:14
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作者 何强 孔祥虹 +2 位作者 李建华 赵洁 张莹 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期710-714,共5页
研究了Bond Elut ENV新型固相萃取柱在食用植物油中苯并[a]芘快速检测中的应用,建立了快速测定食用植物油样品中苯并[a]芘残留量的固相萃取/液相色谱/荧光检测法。样品用正己烷溶解,固相萃取净化,SUPELCOSILTMLC-PAH(25 cm×4.6 mm,... 研究了Bond Elut ENV新型固相萃取柱在食用植物油中苯并[a]芘快速检测中的应用,建立了快速测定食用植物油样品中苯并[a]芘残留量的固相萃取/液相色谱/荧光检测法。样品用正己烷溶解,固相萃取净化,SUPELCOSILTMLC-PAH(25 cm×4.6 mm,5μm)色谱柱分离,以乙腈-水(95∶5)为流动相,荧光检测(λex=297 nm,λem=408 nm),外标法定量。苯并[a]芘的检出限为0.3μg/kg,在1.0~50.0μg/L范围内线性关系良好,相关系数为0.999 6,方法的回收率为79%~102%,相对标准偏差不高于9.4%。该方法准确、实用、简便、快速,在食用植物油的苯并[a]芘残留量检测方面有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 BOND Elut ENV固相萃取柱 食用植物油 苯并[A]芘 硅胶固相萃取柱 液相色谱/荧光检测
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固相萃取-超高效液相色谱法测定浓缩石榴汁中羟甲基糠醛含量 被引量:4
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作者 刘学芝 何强 +1 位作者 孔祥虹 杜宝中 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期62-64,共3页
建立了浓缩石榴汁中羟甲基糠醛(HMF)的超高效液相色谱(UPLC)检测方法。样品用水溶解后,用BondElutENV固相萃取柱净化,UPLCHSST3色谱柱分离,乙腈-水(8+92,V/V)为流动相,检测波长285nm,外标法定量。羟甲基糠醛的检出限为0.02mg/L,在0.1~1... 建立了浓缩石榴汁中羟甲基糠醛(HMF)的超高效液相色谱(UPLC)检测方法。样品用水溶解后,用BondElutENV固相萃取柱净化,UPLCHSST3色谱柱分离,乙腈-水(8+92,V/V)为流动相,检测波长285nm,外标法定量。羟甲基糠醛的检出限为0.02mg/L,在0.1~10.0mg/L的浓度范围内标准溶液的浓度与峰面积线性关系良好,在10、20、50mg/kg三个添加水平下,回收率为80.8%~110.8%,相对标准偏差(RSD)低于8.1%。该方法简便、快速、准确,可用于浓缩石榴汁中羟甲基糠醛的检测。 展开更多
关键词 固相萃取 超高效液相色谱法 浓缩石榴汁 羟甲基糠醛
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超高效液相色谱-串联质谱法同时测定浓缩苹果汁中的4种链格孢霉毒素 被引量:29
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作者 何强 李建华 +2 位作者 孔祥虹 乐爱山 吴双民 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1128-1131,共4页
建立了浓缩苹果汁中链格孢霉素、链格孢酚、腾毒素、链格孢酚甲醚4种毒素残留量的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品用水稀释后,用PS DVB固相萃取柱净化,外标法定量。测定时用BEH C18色谱柱(50mm×2.1mm,1.7μm)分离... 建立了浓缩苹果汁中链格孢霉素、链格孢酚、腾毒素、链格孢酚甲醚4种毒素残留量的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品用水稀释后,用PS DVB固相萃取柱净化,外标法定量。测定时用BEH C18色谱柱(50mm×2.1mm,1.7μm)分离,乙腈和水梯度洗脱,质谱测定采用多反应监测(MRM)模式。4种链格孢霉毒素的测定低限在1.0~5.0μg/L范围内,加标回收率为77.8%~117.2%,相对标准偏差均低于9.7%。该方法灵敏、稳定、可靠,可用于浓缩苹果汁样品中4种链格孢霉毒素的检测和确证。 展开更多
关键词 超高效液相色谱-串联质谱法 链格孢霉素 链格孢酚 腾毒素 链格孢酚甲醚 浓缩苹果汁
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浓缩石榴汁中熊果苷的超高效液相-串联质谱检测方法研究 被引量:3
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作者 何强 孔祥虹 +2 位作者 李建华 乐爱山 吴双民 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期62-65,共4页
建立了浓缩石榴汁样品中熊果苷含量测定的固相萃取-超高效液相-串联质谱测定方法。样品用水稀释,HLB和氨基固相萃取柱净化,采用BEHAmide色谱柱(100mm×2.1mm,1.7μm)分离,以乙腈和水梯度洗脱,多反应监测模式测定,定量离子对为m/z271... 建立了浓缩石榴汁样品中熊果苷含量测定的固相萃取-超高效液相-串联质谱测定方法。样品用水稀释,HLB和氨基固相萃取柱净化,采用BEHAmide色谱柱(100mm×2.1mm,1.7μm)分离,以乙腈和水梯度洗脱,多反应监测模式测定,定量离子对为m/z271.2>108.0,定性离子对为m/z271.2>160.9,外标法定量。熊果苷的检测限为0.006mg/kg,在0.004~0.2mg/L浓度范围内,熊果苷的线性相关系数为0.9994,熊果苷的加标回收率均在80.6%~108.1%范围内,相对标准偏差均低于8.3%。该方法样品净化效果良好,检测简便、快速、准确,能够满足浓缩石榴汁中熊果苷含量测定和定性确证的要求。 展开更多
关键词 浓缩石榴汁 熊果苷 固相萃取 超高效液相-串联质谱
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