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高糖条件下高表达ARNO对人肾小球内皮细胞通透性的影响及其作用机制 被引量：4
1
作者 王小龙 胡成芳 +3 位作者 唐璐瑶 李艺 官涛 黄云剑 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期55-61,共7页
目的探讨高糖条件下高表达ARNO对人肾小球内皮细胞(HRGEC)通透性的影响及其作用机制。方法体外培养HRGEC,分别观察不同时间梯度(15、30、45和60 min)和浓度梯度(10、20、30和40 mmol/L)高糖作用对ARNO蛋白表达和内皮细胞通透性的影响。... 目的探讨高糖条件下高表达ARNO对人肾小球内皮细胞(HRGEC)通透性的影响及其作用机制。方法体外培养HRGEC,分别观察不同时间梯度(15、30、45和60 min)和浓度梯度(10、20、30和40 mmol/L)高糖作用对ARNO蛋白表达和内皮细胞通透性的影响。分别采用ARNOsiRNA和Arf6siRNA重组慢病毒载体感染HRGEC,获得沉默ARNO和Arf6的HRGEC细胞株,观察ARNO和Arf6基因沉默对内皮细胞通透性的影响。结果时间梯度实验中,与高糖对照组相比,高糖15、30、45、60 min组HRGEC ARNO表达明显升高(分别为0.670±0.051、0.960±0.106、0.716±0.026、0.531±0.030vs.0.242±0.029),差异有统计学意义(P<0.05),与高糖15 min组相比,高糖30 min组ARNO表达升高(P<0.05),与高糖30min组相比,高糖45 min组ARNO表达回落(P<0.05),与高糖45 min组相比,高糖60 min组ARNO表达降低(P<0.05)。与高糖对照组相比,高糖15、30、45、60 min组内皮细胞通透性明显增加(分别为1.196±0.004、1.399±0.012、1.301±0.052、1.184±0.030vs.1.000),差异有统计学意义(P<0.05),与高糖15 min组相比,高糖30 min组通透性增加(P<0.05),与高糖30 min组相比,高糖45 min组通透性下降(P<0.05),与高糖45 min组相比,高糖60 min组通透性下降(P<0.05)。浓度梯度实验中,与正常糖组相比,高糖20、30、40 mmol/L组HRGEC ARNO表达明显升高(分别为0.632±0.031、0.927±0.041、1.183±0.098 vs. 0.169±0.033),差异有统计学意义(P<0.05),且随高糖浓度增加,ARNO表达呈递增趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常糖组相比,高糖10、20、30、40 mmol/L组内皮细胞通透性明显增加(分别为1.147±0.015、1.237±0.023、1.351±0.015、1.444±0.019 vs. 1.000),差异有统计学意义(P<0.05),且随高糖浓度增加,内皮细胞通透性呈递增趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。转染慢病毒后,与正常糖未转染组及正常糖空载体组相比,正常糖ARNO siRNA组ARNO mRNA转录明显降低(0.255±0.056 vs.1.000、1.183±0.297),ARNO蛋白表达明显降低(0.088±0.005vs.0.246±0.011、0.237±0.009);正常糖Arf6siRNA组Arf6 mRNA转录明显降低(0.314±0.090 vs. 1.000、1.140±0.236),Arf6蛋白表达明显降低(0.690±0.012 vs. 0.917±0.009、0.919±0.009),差异均有统计学意义(P<0.05)。沉默内皮ARNO后,与高糖未转染组及高糖空载体组相比,高糖ARNO siRNA组ARNO蛋白表达明显降低(0.572±0.021vs.0.915±0.005、0.916±0.012),Arf6活性明显降低(0.263±0.007vs.0.484±0.014、0.490±0.008),细胞通透性也明显降低(0.718±0.017vs.1.000、0.978±0.040),差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,沉默内皮Arf6后,与高糖未转染组及高糖空载体组相比,高糖Arf6siRNA组Arf6蛋白表达明显降低(0.673±0.015 vs. 0.932±0.020、0.899±0.022),内皮细胞通透性也明显降低(0.768±0.050 vs. 1.000、0.978±0.040),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高糖诱导的HRGEC高通透性与ARNO/Arf6信号活化有关,抑制ARNO的表达及Arf6活性可抑制糖尿病肾病肾小球内皮的高通透性。 展开更多
关键词 ARNO Arf6 高糖 人肾小球内皮细胞 通透性
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Slit2对高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化的作用及机制 被引量：2
2
作者 胡成芳 李艺 +4 位作者 刘军辉 王小龙 侯世会 官涛 黄云剑 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期652-658,共7页
目的探讨Slit2/ROBO1信号通路在高糖诱导肾小管上皮细胞上皮间质细胞转分化(EMT)中的作用及机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,进行高糖浓度梯度实验,随机分为正常组、对照组1、对照组2和高糖组1、高糖组2;同时进行高糖时间梯度实... 目的探讨Slit2/ROBO1信号通路在高糖诱导肾小管上皮细胞上皮间质细胞转分化(EMT)中的作用及机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,进行高糖浓度梯度实验,随机分为正常组、对照组1、对照组2和高糖组1、高糖组2;同时进行高糖时间梯度实验,随机分为正常组、对照组、高糖24h组、高糖36h组和高糖48h组,采用Western blotting检测HK-2细胞中Slit2、ROBO1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白的表达变化,筛选出最佳高糖刺激浓度和时间。采用Slit2过表达质粒及阴性对照质粒转染HK-2细胞,验证转染成功后,随机分为正常组、对照组、高糖组、高糖+空载组及高糖+Slit2组,经最佳高糖浓度及时间刺激后提取总蛋白,Western blotting检测纤维连接蛋白及α-SMA的表达变化。结果在高糖浓度梯度实验中,与正常组相比,高糖组1、高糖组2的Slit2表达明显下降(分别为0.647±0.048、0.210±0.023vs.1.000±0.050),ROBO1表达明显下降(分别为0.703±0.041、0.303±0.022vs.1.000±0.057),纤维连接蛋白表达明显增加(分别为1.953±0.042、2.997±0.078vs.0.990±0.059),α-SMA表达明显增加(分别为1.767±0.012、2.427±0.059vs.1.033±0.067),差异均有统计学意义(P<0.05)。与高糖组1相比,高糖组2的Slit2、ROBO1表达下降,纤维连接蛋白和α-SMA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。在高糖时间梯度实验中,与正常组相比,高糖36h组、高糖48h组的Slit2表达明显下降(分别为0.557±0.020、0.450±0.055vs.0.943±0.032),ROBO1表达下降(分别为0.600±0.023、0.227±0.028vs.1.000±0.058),高糖24h组、高糖36h组、高糖48h组纤维连接蛋白表达增加(分别为1.247±0.052、1.733±0.084、2.780±0.090vs.0.970±0.040),α-SMA表达增加(分别为1.277±0.041、1.767±0.120、2.537±0.078vs.1.033±0.067),差异均有统计学意义(P<0.05)。与高糖24h组相比,高糖36h组、高糖48h组的Slit2表达下降(分别为0.557±0.020、0.450±0.055vs.0.893±0.034),ROBO1表达下降(分别为0.600±0.023、0.227±0.028vs.0.930±0.025),纤维连接蛋白及α-SMA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与高糖36h组相比,高糖48h组的Slit2和ROBO1表达下降,纤维连接蛋白和α-SMA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。在高糖环境下,Slit2过表达及阴性对照质粒转染成功后,观察Slit2过表达对肾小管EMT的影响发现,与正常组相比,高糖组、高糖+空载组、高糖+Slit2组的纤维连接蛋白表达增加(分别为2.760±0.012、2.667±0.027、1.460±0.034vs.1.000±0.058),α-SMA表达水平增加(分别为2.487±0.048、2.557±0.037、1.270±0.017vs.1.000±0.050),差异有统计学意义(P<0.05)。与高糖+空载组相比,高糖+Slit2组的纤维连接蛋白和α-SMA表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Slit2和ROBO1的表达下降参与了高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT过程,过表达Slit2可显著抑制高糖诱导的EMT。 展开更多
关键词 SLIT2 ROBO1 上皮间质转分化 高糖 HK-2细胞
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紫癜性肾炎肾小球血管病变病理分级的初步探讨 被引量：2
3
作者 祝旭飞 官涛 +6 位作者 刘军辉 侯世会 胡成芳 李艺 唐璐瑶 张均 黄云剑 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期451-458,共8页
目的探讨采用紫癜性肾炎(HSPN)肾小球血管病变百分比评分(GVLPS)系统分级评估HSPN血管炎性病变的可靠性。方法收集陆军军医大学附属新桥医院2012年1月-2015年8月确诊的140例HSPN患者肾活检标本和临床资料进行回顾性分析,按GVLPS分级标... 目的探讨采用紫癜性肾炎(HSPN)肾小球血管病变百分比评分(GVLPS)系统分级评估HSPN血管炎性病变的可靠性。方法收集陆军军医大学附属新桥医院2012年1月-2015年8月确诊的140例HSPN患者肾活检标本和临床资料进行回顾性分析,按GVLPS分级标准分析每例肾活检标本。GVLPS计算公式为:血管内皮细胞增殖、血管玻璃样变、血管纤维素样坏死、内皮下嗜复红物沉积、细胞新月体、纤维新月体、节段性硬化或球性硬化症的肾小球数量/全部被观察的肾小球数量×100%。按GVLPS值分为HG1至HG4共4个等级:GVLPS<25%为HG1,25%≤GVLPS<50%为HG2,50%≤GVLPS<75%为HG3,GVLPS≥75%为HG4。以20例正常肾组织标本作为对照。分析GVLPS与ISKDC分级、肾小球浸润的CD2^+和CD68^+炎性细胞数、24h尿蛋白、肾小球滤过率(eGFR)、尿红细胞数和血清白蛋白(ALB)的相关性。结果根据GVLPS分级标准,140例患者的肾活检标本中,HG1 37例(26.4%),HG2 46例(32.9%),HG3 40例(28.6%),HG4 17例(12.1%)。GVLPS系统分级较ISKDC分级更能反映血管早期病变的严重程度。GVLPS与ISKDC分级、24h尿蛋白、尿红细胞数和肾小球浸润的炎性细胞数呈明显正相关,与eGFR、ALB呈负相关。结论 GVLPS评分能较准确地反映HPSN血管损伤,弥补了ISKDC分级的不足,为今后大样本研究HSPN提供了数据支持。 展开更多
关键词 血管病变 紫癜性肾炎 炎症细胞 ISKDC分级
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