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丙戊酸钠通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路抑制SH-SY5Y细胞自噬
被引量：
1
1
作者
戴旭芳
闫小晶
+1 位作者
谢鹏
连继勤
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第12期1415-1420,共6页
目的探讨丙戊酸钠(VPA)对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24 h,采用定量PCR分析VPA处理对ATG...
目的探讨丙戊酸钠(VPA)对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24 h,采用定量PCR分析VPA处理对ATG4B m RNA与miR-34c-5p表达的影响,免疫印迹法分析VPA处理对ATG4B蛋白表达的影响,将含ATG4B启动子片段的报告质粒转染SH-SY5Y细胞,然后通过荧光素酶报告基因系统分析VPA处理对ATG4B启动子活性的影响,用VPA单独或联合转录抑制剂放线菌素D分别处理SH-SY5Y细胞不同时间,定量PCR分析检测不同处理对ATG4B mRNA稳定性的影响,用VPA单独或联合miR-34c-5p抑制剂处理细胞24 h,通过检测不同处理对ATG4B表达变化的影响,进而判断miR-34c-5p在VPA下调ATG4B表达中的作用,同时通过Western blot检测不同处理对LC3-II表达的影响,分析细胞自噬水平变化。结果 VPA可剂量依赖性降低SH-SY5Y细胞中ATG4B的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。VPA处理不影响SHSY5Y细胞中ATG4B的启动子活性(P>0.05),但显著下调其mRNA的稳定性(P<0.05)。同时,VPA处理明显增强SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p的表达水平(P<0.05)。使用miR-34c-5p抑制剂与VPA联合处理SH-SY5Y细胞,可逆转VPA对ATG4B表达的下调作用。VPA处理还下调了SH-SY5Y细胞中LC3-II的表达水平(P<0.05)。结论 VPA可能通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路而抑制SH-SY5Y细胞自噬。
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关键词
丙戊酸钠
SH-SY5Y细胞
ATG4B
miR-34c-5p
自噬
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题名
丙戊酸钠通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路抑制SH-SY5Y细胞自噬
被引量：
1
1
作者
戴旭芳
闫小晶
谢鹏
连继勤
机构
重庆市特殊儿童心理诊断与教育技术重点实验室
重庆师范
大学
教育科学
学院
特殊教育系
陆军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第12期1415-1420,共6页
基金
国家自然科学基金青年科学基金(31201068)
重庆市特殊儿童心理诊断与教育技术实验室重点项目(201711000251)~~
文摘
目的探讨丙戊酸钠(VPA)对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24 h,采用定量PCR分析VPA处理对ATG4B m RNA与miR-34c-5p表达的影响,免疫印迹法分析VPA处理对ATG4B蛋白表达的影响,将含ATG4B启动子片段的报告质粒转染SH-SY5Y细胞,然后通过荧光素酶报告基因系统分析VPA处理对ATG4B启动子活性的影响,用VPA单独或联合转录抑制剂放线菌素D分别处理SH-SY5Y细胞不同时间,定量PCR分析检测不同处理对ATG4B mRNA稳定性的影响,用VPA单独或联合miR-34c-5p抑制剂处理细胞24 h,通过检测不同处理对ATG4B表达变化的影响,进而判断miR-34c-5p在VPA下调ATG4B表达中的作用,同时通过Western blot检测不同处理对LC3-II表达的影响,分析细胞自噬水平变化。结果 VPA可剂量依赖性降低SH-SY5Y细胞中ATG4B的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。VPA处理不影响SHSY5Y细胞中ATG4B的启动子活性(P>0.05),但显著下调其mRNA的稳定性(P<0.05)。同时,VPA处理明显增强SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p的表达水平(P<0.05)。使用miR-34c-5p抑制剂与VPA联合处理SH-SY5Y细胞,可逆转VPA对ATG4B表达的下调作用。VPA处理还下调了SH-SY5Y细胞中LC3-II的表达水平(P<0.05)。结论 VPA可能通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路而抑制SH-SY5Y细胞自噬。
关键词
丙戊酸钠
SH-SY5Y细胞
ATG4B
miR-34c-5p
自噬
Keywords
sodium valproate
SH-SY5Y cells
ATG4B
miR-34c-5p
autophagy
分类号
R96 [医药卫生—药理学]
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作者
出处
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1
丙戊酸钠通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路抑制SH-SY5Y细胞自噬
戴旭芳
闫小晶
谢鹏
连继勤
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
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