高原低氧改善肿瘤免疫微环境并抑制结直肠癌皮下肿瘤生长 被引量：1

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作者 赵思洁 王猛 +3 位作者 高源 杨芳 胡绍凡 缪洪明 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第1期38-50,共13页

目的探究高原低氧环境对结直肠癌体内生长及肿瘤微环境的影响。方法采用随机数字表法将雄性6周龄BALB/C与C57BL/6小鼠(体质量18~20 g)各自分为2组,分别置于低压氧仓(10%氧气,海拔约5600 m,高原低氧组)和SPF级动物实验中心(21%O_(2),海拔... 目的探究高原低氧环境对结直肠癌体内生长及肿瘤微环境的影响。方法采用随机数字表法将雄性6周龄BALB/C与C57BL/6小鼠(体质量18~20 g)各自分为2组,分别置于低压氧仓(10%氧气,海拔约5600 m,高原低氧组)和SPF级动物实验中心(21%O_(2),海拔约300 m,平原常氧组)饲养,C57BL/6小鼠每组8只,BALB/C小鼠每组7只。对C57BL/6小鼠皮下接种MC38、对BALB/C小鼠皮下接种CT26以构建结直肠癌皮下肿瘤模型。观察C57BL/6与BALB/C小鼠肿瘤大小并统计肿瘤质量。收集C57BL/6小鼠的肿瘤、外周血以及脾脏中的免疫细胞,流式细胞术对巨噬细胞、T淋巴细胞、IFN-γ^(+)T淋巴细胞以及髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)进行检测,分析这些免疫细胞在平原常氧和高原低氧环境下的变化情况。结果与平原常氧组C57BL/6与BALB/C小鼠相比,高原低氧组2种小鼠皮下肿瘤生长都被显著抑制(0.17 vs 0.09 g,1.38 vs 0.51 g,P<0.01)与平原常氧组C57BL/6小鼠相比,高原低氧组C57BL/6小鼠肿瘤微环境中的M2巨噬细胞比例显著降低(22.13%vs 15.90%,P<0.05);MDSC比例减少(2.06%vs 1.05%,P<0.01),其中单核性MDSC(M-MDSC:Ly6C^(+))亚群比例显著降低(60.97%vs 41.13%,P<0.01),而粒性MDSC(PMN-MDSC:Ly6G^(+))比例无显著差异(10.97%vs 9.70%,P>0.05);CD8^(+)T细胞比例显著升高(41.25%vs 51.18%,P<0.01),CD4^(+)T细胞比例降低(48.70%vs 41.93%,P<0.05);IFN-γ^(+)T、IFN-γ^(+)CD4^(+)T、IFN-γ^(+)CD8^(+)T细胞比例均显著增高(28.58%vs 59.65%,23.33%vs 53.65%,36.9%vs 66.48%,P<0.01);外周血中CD4^(+)T淋巴细胞和M1巨噬细胞比例都降低(84.98%vs 78.43%,5.86%vs 4.01%,P<0.01),MDSC及PMN-MDSC(Ly6G^(+))比例增高(4.47%vs 16.43%,36.56%vs 62.97%,P<0.01);脾脏中CD8^(+)T淋巴细胞比例和IFN-γ^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例都显著降低(33.05%vs 27.68%,5.13%vs 1.58%,P<0.01)。结论高原低氧可以增强肿瘤微环境内免疫应答并抑制结直肠癌皮下肿瘤的生长,但却抑制全身性免疫应答。 展开更多

关键词 高原 低氧 肿瘤微环境 结直肠癌 免疫应答

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塞来昔布通过提高12,13-diHOME水平改善急性高原缺氧小鼠右心功能

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作者 张炜 包鑫余 +9 位作者 赖晓玥 万小勤 谭燕 尹鸿钧 蔡筱诗 田丁元 汪紫阳 郑攀 邓芳 张志辉 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第19期2289-2301,共13页

目的评估塞来昔布(Celecoxib)对急性高原缺氧小鼠右心功能的影响并探究其作用机制。方法将7周龄C57BL/6J雄性小鼠置于模拟5800 m海拔低压氧仓饲养2 d以构建急性高原缺氧动物模型。①将18只小鼠按随机数字表法分为平原组(P+S)、高原组(H... 目的评估塞来昔布(Celecoxib)对急性高原缺氧小鼠右心功能的影响并探究其作用机制。方法将7周龄C57BL/6J雄性小鼠置于模拟5800 m海拔低压氧仓饲养2 d以构建急性高原缺氧动物模型。①将18只小鼠按随机数字表法分为平原组(P+S)、高原组(H+S)和高原给塞来昔布组(H+Cel),检测体质量和血常规,小动物超声心动图测量心率(heart rate,HR)、肺动脉加速时间与射血时间比(pulmonary artery acceleration time/ejection time,AT/ET)、三尖瓣环收缩期位移(tricuspid annular plane systolic excursion,TAPSE)、三尖瓣环收缩期峰值速度(tricuspid annular systolic velocity,S’)、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,EF)和左室缩短分数(left ventricular fractional shortening,FS),靶向代谢组测序检测小鼠心脏花生四烯酸代谢,ELISA检测小鼠心脏、肝脏、棕色脂肪和血浆的12,13-二羟基-9-氧杂十八碳二烯酸(12,13-Dihydroxy-9Z-octadecenoic acid,12,13-diHOME)水平。②将18只小鼠随机分为平原组(P+S)、高原组(H+S)和高原给12,13-diHOME组(H+di),同前检测小鼠体质量、血常规和心脏超声。③将32只小鼠随机分为高原组(H+S)、高原给塞来昔布组(H+Cel)、高原给可溶性环氧化物水解酶抑制剂(soluble epoxide hydrolase inhibitor,sEHI)组(H+sEHI)和高原同时给sEHI和塞来昔布组(H+sEHI+Cel),同前检测体质量、血常规和心脏超声,ELISA检测小鼠心脏和血浆的12,13-diHOME和环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs)水平。结果①与P+S组比较,H+S组心脏中的12,13-diHOME水平显著下降(P<0.001),白细胞(white blood cell,WBC)和中性粒细胞(neutrophil,NEUT)数量显著上升(P<0.01),TAPSE、S’和AT/ET的静息水平和负荷水平均显著降低(P<0.01,P<0.001);与H+S组比较,H+Cel组心脏中的12,13-diHOME水平显著提高(P<0.05)、白细胞和淋巴细胞(Lymphocyte,LYM)数量显著下降(P<0.01,P<0.05),TAPSE和S’的负荷水平和储备均显著提高(P<0.01,P<0.001)。②与H+S组比较,H+di组TAPSE的静息水平和负荷水平均显著提高(P<0.001),其储备也有提高趋势(P=0.0532),白细胞和中性粒细胞水平没有改变。③与H+Cel组比较,H+sEHI和H+sEHI+Cel组心脏中的12,13-diHOME水平显著下降(P<0.01,P<0.05),心功能无显著改变;与H+S组比较,H+Cel组,H+sEHI组和H+sEHI+Cel组小鼠白细胞和淋巴细胞数量均显著下降(P<0.01,P<0.001),血清中的EETs水平显著提高(P<0.01,P<0.001)。结论塞来昔布通过CYP450-sEH代谢途径提升急性高原缺氧小鼠心脏中12,13-diHOME水平并显著改善了急性高原缺氧小鼠的右心功能。 展开更多

关键词 塞来昔布 高原 缺氧 右心功能 12 13-diHOME

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FDFT1抑制巨噬细胞M1极化促进小鼠结直肠癌进展

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作者 高源 黄玉兰 +2 位作者 赵昆 时荣臣 缪洪明 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第3期205-215,共11页

目的筛选出结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞中抑制巨噬细胞向M1方向极化的胆固醇合成途径代谢酶相关靶点,并验证干预效果及其作用机制。方法将小鼠CRC细胞株(MC38)分为对照(si-NC)组和多个胆固醇合成途径相关代谢酶表达干扰(siRNA... 目的筛选出结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞中抑制巨噬细胞向M1方向极化的胆固醇合成途径代谢酶相关靶点,并验证干预效果及其作用机制。方法将小鼠CRC细胞株(MC38)分为对照(si-NC)组和多个胆固醇合成途径相关代谢酶表达干扰(siRNA干扰相应靶点)组,RT-qPCR检测转染后MC38细胞相应干扰靶点的mRNA水平;6周龄C57BL/6雄性小鼠(体质量13~18 g)提取原代腹腔巨噬细胞,利用siRNA转染后MC38细胞的条件培养基处理巨噬细胞,RT-qPCR检测巨噬细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平以评估对其M1方向极化的影响。将MC38细胞分为对照组(OE-NC和sh-NC组)、法尼基焦磷酸转移酶1(farnesyl-diphosphate farnesyltransferase 1,FDFT1)过表达组(OE-FDFT1组)和FDFT1敲低组(sh-FDFT1组),RT-qPCR检测FDFT1的mRNA水平,Western blot检测FDFT1蛋白水平;将C57BL/6小鼠通过随机数字表法按照细胞分组方式分别构建皮下荷瘤模型(n=5)、腹腔种植转移瘤模型(n=5),对肿瘤质量进行检测;流式细胞术检测肿瘤细胞增殖和凋亡情况;Transwell实验检测肿瘤细胞迁移能力变化;将C57BL/6巨噬细胞清除鼠(氯膦酸盐脂质体悬液尾静脉注射)通过随机数字表法按照细胞分组方式构建腹腔种植转移瘤模型(n=5),对肿瘤质量进行检测。结果与si-NC组MC38细胞相比,各胆固醇合成途径相关代谢酶表达干扰组中MC38细胞对应靶点的mRNA水平显著下调(P均<0.05);与si-NC组巨噬细胞相比,FDFT1表达干扰组巨噬细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平显著上调(P均<0.05)。相比于OE-NC组MC38细胞,OE-FDFT1组MC38细胞的增殖、凋亡和迁移能力未发生显著变化;相比于sh-NC组MC38细胞,sh-FDFT1组MC38细胞的增殖、凋亡和迁移能力未发生显著变化。在野生型C57BL/6小鼠皮下荷瘤模型、腹腔种植转移瘤模型中,与OE-NC组相比,OE-FDFT1组肿瘤质量显著上调(P均<0.01);而与sh-NC组相比,sh-FDFT1组肿瘤质量显著下调(P均<0.01)。在巨噬细胞清除小鼠肿瘤模型中,与OE-NC组相比,OE-FDFT1组肿瘤质量未发生显著变化;与sh-NC组相比,sh-FDFT1组肿瘤质量未发生显著变化。结论CRC肿瘤细胞中胆固醇合成途径代谢酶FDFT1是靶向巨噬细胞的肿瘤免疫治疗潜在靶点,通过调控巨噬细胞促进肿瘤进展。 展开更多

关键词 结直肠癌 胆固醇代谢 法尼基焦磷酸转移酶1 巨噬细胞 M1极化

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麝香酮通过促进VEGF表达介导的微血管生成改善冠状动脉微血管疾病

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作者 汪紫阳 田丁元 +4 位作者 郑攀 陈铭 郑紫梦 邓芳 张志辉 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第19期2374-2384,共11页

目的探讨麝香保心丸(shexiang baoxin pill,SXBXP)对冠状动脉微血管疾病(coronary microvascular disease,CMD)的影响以及麝香酮(Muscone)作为SXBXP中的有效成分对CMD的作用及机制。方法8周龄的ob/ob小鼠按照每天10 mg/kg SXBXP(SXBXP组... 目的探讨麝香保心丸(shexiang baoxin pill,SXBXP)对冠状动脉微血管疾病(coronary microvascular disease,CMD)的影响以及麝香酮(Muscone)作为SXBXP中的有效成分对CMD的作用及机制。方法8周龄的ob/ob小鼠按照每天10 mg/kg SXBXP(SXBXP组)或无菌PBS(Ctl组)进行灌胃,同背景野生型小鼠(WT组)作为阴性对照;以缺血缺氧干预小鼠冠脉微血管内皮细胞(mouse coronary microvascular endothelial cell,MCMEC)构建CMD细胞模型(HI组),并以20μg/mL浓度的SXBXP(HI+SX)和30μmol/L浓度的Muscone(HI+Muscone)分别进行药物干预。通过心脏超声动态评估冠状动脉血流储备(coronary flow reserve,CFR)水平和左心室功能,激光散斑成像评估心肌血流量(myocardial blood flow,MBF)水平。通过CD31免疫荧光染色评估小鼠心脏微血管密度。通过免疫荧光染色和Western blot检测心脏微血管内皮细胞的血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达。5-乙炔基-2-脱氧嘧啶核苷染色、血管生成实验检测MCMEC的增殖能力和成管能力。结果ob/ob-Control组小鼠CFR、MBF水平和心脏微血管密度均比WT组小鼠显著降低(P<0.01),ob/ob-SXBXP组小鼠的上述指标均显著高于ob/ob对照组(P<0.05),表明SXBXP对CMD表型具有改善作用。ob/ob-Control组小鼠心脏微血管内皮细胞VEGF表达水平比WT组小鼠显著降低(P<0.05),而ob/ob-SXBXP组小鼠心脏微血管内皮细胞VEGF表达水平显著高于ob/ob-Control组(P<0.05),SXBXP可能通过VEGF介导的微血管生成改善CMD。体外实验进一步显示,缺血缺氧组(HI)组的VEGF表达水平及MCMEC的增殖和成管能力均显著低于常氧培养(Ctl组)(P<0.05),缺血缺氧SXBXP干预组(HI+SX)和缺血缺氧Muscone干预组(HI+Muscone)上述指标均显著高于HI组(P<0.05),Muscone作为SXBXP的活性物质通过VEGF介导的微血管生成改善CMD。结论SXBXP对CMD具有改善作用;Muscone作为SXBXP中的主要成分通过诱导VEGF的表达促进冠状动脉微血管生成,增加心肌灌注水平从而改善CMD。 展开更多

关键词 冠状动脉微血管疾病 麝香酮 麝香保心丸 微血管生成 血管内皮生长因子

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缺氧通过TAZ-H2A.Z轴调控H2A.Z染色质沉积促进肺泡上皮细胞增殖的研究

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作者 刘派予 张梦洁 +1 位作者 曾继涛 倪兵 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第6期498-505,共8页

目的本研究旨在探讨转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)与组蛋白H2A(histone H2A,H2A)的一种组蛋白变体H2A.Z,在缺氧诱导的肺损伤后修复中的作用及其潜在机制。方法利用缺氧模拟仓(5800 m)处理4 d... 目的本研究旨在探讨转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)与组蛋白H2A(histone H2A,H2A)的一种组蛋白变体H2A.Z,在缺氧诱导的肺损伤后修复中的作用及其潜在机制。方法利用缺氧模拟仓(5800 m)处理4 d后,构建小鼠缺氧肺损伤模型,肺组织切片HE染色评估肺损伤程度。利用缺氧工作站(1%O_(2)浓度)处理小鼠肺泡上皮细胞系(murine lung epithelial-12,MLE12)24 h,构建MLE12缺氧细胞模型,Western blot分析检测TAZ表达。CCK-8实验评价肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cells,AECs)增殖。免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)实验验证TAZ与H2A.Z二者之间的相互作用。靶向剪切及转座酶标记技术(cleavage under targets and tagmentation,CUT&Tag)测序分析TAZ影响H2A.Z在染色质沉积情况。结果缺氧显著诱导小鼠肺组织肺泡萎缩及炎症浸润(P<0.01)。缺氧培养显著上调MLE12细胞中TAZ蛋白表达(P<0.05)。CCK-8实验发现,敲低TAZ后AECs增殖能力显著下降(P<0.01)。Co-IP证实TAZ与H2A.Z存在物理相互作用。靶向剪切及转座酶标记技术(cleavage under targets and tagmentation,CUT&Tag)测序显示缺氧促进H2A.Z在染色质上的沉积(常氧结合位点31817,缺氧结合位点44078),而TAZ敲低部分逆转此现象(结合位点37840)。结论缺氧显著上调TAZ表达,后者与H2A.Z的结合并促进H2A.Z在染色质上的沉积,增强AECs增殖以应对缺氧损伤。 展开更多

关键词 缺氧 肺泡上皮细胞 TAZ H2A.Z 增殖

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Perilipin 2在小鼠肝脏CGI-58特异性敲除所致肝脏微泡型脂肪变性中的作用

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作者 张艺馨 李杰 +7 位作者 万小勤 蒋孝清 陈江慧 邓芳 李旻典 张倩 包鑫余 张志辉 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期1701-1712,共12页

目的探究Perilipin 2(Plin2)在肝脏CGI-58特异性敲除所致脂肪肝的作用,并比较Plin2和Plin3在脂滴生成和脂质蓄积的作用效能。方法将20只7周龄CGI-58^(Flox/Flox)小鼠(雄鼠10只,雌鼠10只)根据性别采用完全随机分组法分为对照组(NC组,n=5... 目的探究Perilipin 2(Plin2)在肝脏CGI-58特异性敲除所致脂肪肝的作用,并比较Plin2和Plin3在脂滴生成和脂质蓄积的作用效能。方法将20只7周龄CGI-58^(Flox/Flox)小鼠(雄鼠10只,雌鼠10只)根据性别采用完全随机分组法分为对照组(NC组,n=5,注射靶向肝脏实现过表达Cre蛋白及对照Micro-RNA的腺相关病毒)和实验组(Mi-KD组,n=5,注射靶向肝脏实现过表达Cre蛋白及靶向Plin2的Micro-RNA的腺相关病毒),记录小鼠体质量变化,检测小鼠代谢相关表型和肝脏病理学的差异,RT-qPCR检测小鼠肝脏脂质代谢和胆固醇代谢相关基因的改变;以AML-12小鼠肝细胞作为细胞模型,构建SiRNA实现AML-12细胞Plin2/Plin3敲低,Bodipy染色和酶比色法检测对比正常培养和OA诱导下Plin2/Plin3敲低后AML-12细胞脂滴生成和脂质蓄积。结果Mi-KD小鼠肝脏中的PLIN2蛋白水平降低了99%以上;Mi-KD缓解了CGI-58特异性敲除雌鼠的肝肿大(P=0.0195)和肝细胞损伤(P=0.0004),降低了组织学NAS评分(P=0.0002)和肝脏甘油三酯含量(P=0.0166),显著改善了肝脏CGI-58特异性敲除所致的肝脏微泡型脂肪变性;敲低Plin2使AML-12细胞内甘油三酯含量呈下降趋势,敲低Plin3显著降低AML-12细胞内甘油三酯含量(P=0.0014);在OA诱导下,Plin2/Plin3敲低均显著降低OA诱导的AML-12细胞内甘油三酯的蓄积(P<0.05)。结论肝脏Plin2在CGI-58敲除所致的微泡型脂肪变性的发展过程中至关重要,Plin2和Plin3均参与肝细胞脂滴生成与脂质蓄积,且Plin3的作用强于Plin2。 展开更多

关键词 肝脏微泡型脂肪变性 围脂滴包被蛋白2 比较鉴定基因-58 钱林-多尔夫曼综合征 脂滴

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7种不同组织来源细胞缺氧损伤效应评价 被引量：3

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作者 冯岚 陈德伟 +8 位作者 高文祥 陈建 徐刚 鄂国基 吴庆 孙滨达 何姝 张二龙 高钰琪 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期570-574,共5页

目的观察缺氧条件下7种不同类型细胞损伤程度,筛选对缺氧损伤敏感的细胞模型。方法选择CCD 841 CoN、GES-1、HUVEC、HEB、HEK-293、HBE和L02等7种不同组织来源的细胞,利用低氧工作站构建不同缺氧浓度(5%O_2和1%O_2)细胞缺氧模型,使用CC... 目的观察缺氧条件下7种不同类型细胞损伤程度,筛选对缺氧损伤敏感的细胞模型。方法选择CCD 841 CoN、GES-1、HUVEC、HEB、HEK-293、HBE和L02等7种不同组织来源的细胞,利用低氧工作站构建不同缺氧浓度(5%O_2和1%O_2)细胞缺氧模型,使用CCK-8和LDH方法检测细胞增殖及损伤情况。并用红景天(0.625μmol/L、2.5 mmol/L)和丁苯酞(1、2μmol/L)于缺氧开始时处理细胞,观察是否可改善缺氧细胞损伤。结果与21%O_2相比,1%O_2处理24 h时,HEB细胞增殖能力显著降低(P<0.05);与21%O_2相比,5%O_2与1%O_2处理24 h HEB、HUVEC、HBE、HEK-293、CCD 841 CoN、GES-1和L02细胞其上清中LDH酶活力均显著升高(P<0.05,P<0.01);在HEB细胞中,红景天(2.5 mmol/L)和丁苯酞(1μmol/L)处理可显著逆转低氧诱导的细胞增殖和细胞活力降低(P<0.05);红景天(2.5 mmol/L)和丁苯酞(1μmol/L)处理可显著逆转低氧诱导的LDH酶活力升高(P<0.05,P<0.01)。结论 HEB细胞对缺氧最为敏感,是较好的抗缺氧损伤药物效应研究细胞的模型。 展开更多

关键词 缺氧 组织细胞 细胞增殖 LDH

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低氧对小鼠生精小管的损伤作用及对精母细胞凋亡的诱导作用 被引量：1

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作者 殷骏 柳君泽 +7 位作者 倪兵 唐中伟 高志奇 赵力 张梦洁 陈德伟 何文娟 廖卫公 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期576-582,共7页

目的探讨低氧暴露下小鼠生精小管病理损伤情况以及低氧对小鼠精母细胞(GC-2spd,GC-2)细胞凋亡的影响。方法40只3周龄雄性Balb/c小鼠按照Excel Random函数随机分为常氧组、低氧15、30、60 d组,低氧各组小鼠分别暴露于模拟海拔6000 m低压... 目的探讨低氧暴露下小鼠生精小管病理损伤情况以及低氧对小鼠精母细胞(GC-2spd,GC-2)细胞凋亡的影响。方法40只3周龄雄性Balb/c小鼠按照Excel Random函数随机分为常氧组、低氧15、30、60 d组,低氧各组小鼠分别暴露于模拟海拔6000 m低压舱中减压15、30、60 d,常氧组在平原(海拔300 m)喂养,减压结束后取睾丸组织,HE和TUNEL染色检测睾丸生精小管的病理损伤;将体外培养的GC-2spd细胞,随机分为低氧组和常氧组,低氧组细胞置1%氧和5%二氧化碳低氧培养箱中培养48、60和72 h,常氧组置21%氧和5%二氧化碳培养箱中培养48、60和72 h。采用流式细胞技术、TUNEL检测法、培养液上清乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性测定和培养液caspase-3/8/9活性测定等方法来检测GC-2细胞凋亡情况。结果低氧15、30、60 d组小鼠睾丸生精小管生精细胞凋亡率分别为(37.2±5.4)%、(66.3±6.4)%、(73.5±8.2)%,均显著高于常氧组凋亡率(4.6±1.4)%,P<0.01,流式细胞术检测低张性缺氧(低氧)48、60、72 h组细胞凋亡率为(15.43±1.47)%、(44.10±14.10)%、(63.36±12.74)%,显著高于常氧48、60、72 h组细胞的凋亡率(4.18±1.40)%、(5.45%±2.30)%、(14.47±8.21)%,(P<0.01),TUNEL法显示低氧48、60、72 h组凋亡细胞数/视野(200×)为22±3、55±5、82±12,显著高于常氧48、60、72 h组5±1、8±2、15±4(P<0.01),低氧48 h组LDH值(1.28±0.18)U/mL显著高于常氧48 h组(0.48±0.09)U/mL(P<0.01),低氧48 h组caspase-3/8/9值分别为12.20±0.42、2.73±0.60、10.90±0.40,显著高于常氧48 h组7.67±0.45、16.20±0.56、7.03±0.25,(P<0.01)。结论低氧对小鼠生精小管的损伤可能是通过诱导精母细胞凋亡产生。 展开更多

关键词 凋亡 低氧 精母细胞

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缺氧诱导线粒体DNA释放后激活cGAS-STING通路促进肺动脉平滑肌细胞增殖 被引量：5

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作者 韦汉南 陈德伟 +1 位作者 张二龙 高钰琪 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期117-124,共8页

目的探究线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)释放在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary arterial smooth muscle cells,RPASMCs)增殖中的作用及可能机制。方法①1%O_(2)缺氧处理RPASMCs分3组(n=3):常氧组、缺氧24 h组、缺氧4... 目的探究线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)释放在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary arterial smooth muscle cells,RPASMCs)增殖中的作用及可能机制。方法①1%O_(2)缺氧处理RPASMCs分3组(n=3):常氧组、缺氧24 h组、缺氧48 h组。②环孢素A(CsA)抑制线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)分为3组(n=3):常氧组、缺氧48 h组、缺氧48 h+CsA处理组。③siRNA敲低干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)表达分为3组(n=3):常氧+NC组、缺氧48 h+NC组、缺氧48 h+si-STING组。④采用CCK-8检测细胞增殖,RT-qPCR、Western blot检测环状GMP-AMP合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)、STING、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的基因与蛋白表达,qPCR检测细胞质mtDNA释放,ELISA检测细胞培养上清中CXC趋化因子配体10(C-X-C motif chemokine ligand 10,CXCL10)水平。结果缺氧可诱导RPASMCs释放mtDNA(P<0.01),显著上调cGAS、STING、PCNA的表达(P<0.05),并增强CXCL10的分泌(P<0.01),进而促进RPASMCs增殖(0.44±0.02 vs 0.72±0.03)(P<0.05)。抑制MPTP可阻断mtDNA释放(P<0.01),显著下调cGAS、STING、PCNA的表达(P<0.01),降低CXCL10的分泌水平(P<0.01),并显著抑制缺氧诱导的RPASMCs增殖(0.74±0.12 vs 0.43±0.06)(P<0.01)。敲低STING可显著下调PCNA的表达(P<0.05),降低CXCL10的分泌水平(P<0.01),并显著抑制缺氧诱导的RPASMCs增殖(0.68±0.03 vs 0.58±0.01)(P<0.01)。结论缺氧可诱导平滑肌细胞释放mtDNA,介导缺氧诱导的平滑肌细胞增殖,其机制可能与cGAS-STING通路的激活有关。 展开更多

关键词 mtDNA释放 cGAS-STING通路 肺动脉平滑肌细胞 缺氧 增殖

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丁酸对缺氧血管内皮细胞一氧化氮分泌的影响及机制研究 被引量：2

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作者 杨诚忠 冯岚 +3 位作者 陈德伟 张钢 高钰琪 谭小玲 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期639-645,共7页

目的研究缺氧血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)下降的机制,探讨丁酸的干预作用。方法人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分为常氧组(21%O2,N)、缺氧组(1%O2,H)、缺氧+溶剂对照组(H+D)、缺氧+丁酸组(H+B)、缺... 目的研究缺氧血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)下降的机制,探讨丁酸的干预作用。方法人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分为常氧组(21%O2,N)、缺氧组(1%O2,H)、缺氧+溶剂对照组(H+D)、缺氧+丁酸组(H+B)、缺氧+干扰对照组(H+Ci)和缺氧+siRNA干扰组(H+Si)。硝酸还原法检测HUVECs培养上清液NO水平;荧光定量PCR检测一氧化氮合酶(eNOS)的mRNA水平,Western blot检测eNOS蛋白水平、乙酰化水平以及组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)蛋白水平。免疫共沉淀技术检测HDAC3和eNOS的相互作用。结果缺氧6 h后,HUVECs培养上清中NO水平降低,与常氧组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);缺氧组HUVECs中eNOS蛋白水平降低,但eNOS的mRNA水平没有明显变化。与常氧组相比,缺氧组HUVECs中,HDAC3的蛋白表达没有变化,但HDAC3与eNOS的结合增加,eNOS的乙酰化水平下降。与缺氧+干扰对照组相比,缺氧+siRNA干扰组细胞中eNOS的蛋白水平显著升高。缺氧+丁酸(4 mmol/L)处理组HUVECs培养上清中NO水平升高,与缺氧+溶剂对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);同时,缺氧+丁酸(4 mmol/L)处理组HUVECs细胞中eNOS蛋白水平升高。缺氧+丁酸(4 mmol/L)处理组HUVECs中HDAC3与eNOS的结合减少,eNOS乙酰化水平降低。结论缺氧促进HDAC3和eNOS结合,抑制eNOS的乙酰化,可能通过降低eNOS蛋白的稳定性,抑制NO分泌,而丁酸可以抑制这一过程。 展开更多

关键词 NO ENOS HDAC3 丁酸 缺氧

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SOX6-SOCS3通过STAT3信号通路调控缺氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖 被引量：1

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作者 王羽 王授衔 +2 位作者 陈德伟 刘宝 高钰琪 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期295-302,共8页

目的探究SRY盒转录因子6(SRY-Box transcription factor 6,SOX6)-细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)在缺氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth cells, HPASMCs)增殖中的作用... 目的探究SRY盒转录因子6(SRY-Box transcription factor 6,SOX6)-细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)在缺氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth cells, HPASMCs)增殖中的作用及其可能机制。方法 (1)4%O2缺氧处理HPASMCs分为3组:常氧组、缺氧24 h组、缺氧48 h组(n=3)。(2)使用小RNA干扰SOX6或SOCS3表达,干扰SOX6表达分为4组:si-SOX6-NC组、si-SOX6-1组、si-SOX6-2组、si-SOX6-3组(n=3),干扰SOCS3表达分为3组:si-SOCS3-NC组、si-SOCS3-1组、si-SOCS3-2组(n=3)。(3)构建慢病毒过表达SOX6细胞后缺氧处理48 h,分为4组:常氧对照组、过表达SOX6组、缺氧对照组、缺氧+过表达SOX6组(n=3)。(4)采用CCK-8检测各组细胞增殖,RT-qPCR、Western blot检测各组SOX6、SOCS3、磷酸化信号转导与转录激活因子3(phosphorylated-signal transduction and activators of transcription 3,p-STAT3)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果缺氧可降低SOX6和SOCS3的表达(P<0.01),不仅能诱导HPASMCs增殖(P<0.05),还能显著上调p-STAT3、PCNA的表达(P<0.05)。在常氧条件下,干扰SOX6或SOCS3可显著增强HPASMCs的增殖(P<0.05),细胞中p-STAT3、PCNA的表达也显著升高(P<0.01)。在缺氧条件下过表达SOX6可显著抑制缺氧诱导的HPASMCs增殖(P<0.01),并显著降低p-STAT3、PCNA的表达(P<0.01)。结论 SOX6-SOCS3可抑制缺氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞的增殖,其机制可能与抑制STAT3信号通路有关。 展开更多

关键词 SOX6 SOCS3 STAT3 肺动脉平滑肌细胞 缺氧 增殖

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DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用及机制研究

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作者 耿建慧 陈建 +6 位作者 张二龙 阳一栋 陈德伟 吴刚 王羽 赵文琦 高钰琪 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期731-739,共9页

目的 探讨DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells, RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法 培养原代RPASMCs,采用3%O;缺氧处理细胞构建缺氧诱导细胞增殖模型。采用小干扰RNA(small interfering... 目的 探讨DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells, RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法 培养原代RPASMCs,采用3%O;缺氧处理细胞构建缺氧诱导细胞增殖模型。采用小干扰RNA(small interfering RNA sequence, siRNA)敲低Dnase2a的表达,采用质粒过表达上调细胞中Dnase2a和Hif1a的表达。采用外源性加入线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)诱导细胞增殖,使用脯氨酸羟化酶抑制剂ROXA作为HIF-1α激动剂上调细胞中HIF-1α的表达。采用MTS法检测各组细胞增殖能力,实时荧光定量PCR法检测Dnase2a的mRNA表达,Western blot法检测DNase 2α、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和细胞周期蛋白(cell cycle protein D1,Cyclin D1)的表达。结果 缺氧可诱导RPASMCs增殖,并上调DNase 2α的表达(P<0.05)。siRNA可显著降低RPASMCs中Dnase2a的表达(P<0.05),并显著增强缺氧诱导的RPASMCs增殖(P<0.05),同时显著上调PCNA和Cyclin D1的蛋白表达(P<0.05)。过表达Dnase2a可显著上调RPASMCs中DNase 2α的表达(P<0.05),并显著抑制缺氧诱导RPASMCs增殖(P<0.05)。外源性加入mtDNA可诱导RPASMCs增殖,而过表达Dnase2a可显著抑制mtDNA诱导的RPASMCs增殖(P<0.05)。过表达Hif1a或使用脯氨酸羟化酶抑制剂ROXA可显著上调HIF-1α表达,并显著上调DNase 2α的蛋白表达(P<0.05)。结论 DNase 2α可抑制缺氧或线粒体DNA诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,缺氧诱导的DNase 2α表达上调与HIF-1α有关。 展开更多

关键词 DNase 2α 线粒体DNA 大鼠肺动脉平滑肌细胞 缺氧 增殖

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单细胞表观遗传测序技术最新进展 被引量：2

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作者 倪兵 高维武 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期74-78,共5页

单细胞测序技术是目前解码组织、器官、细胞、分子异质性的重要热门工具,其主要基于二代测序技术,根据其检测对象可分为单细胞基因组学测序技术、单细胞表观组学测序技术、单细胞转录组学测序技术,以及可同时解析多个组学的单细胞多组... 单细胞测序技术是目前解码组织、器官、细胞、分子异质性的重要热门工具,其主要基于二代测序技术,根据其检测对象可分为单细胞基因组学测序技术、单细胞表观组学测序技术、单细胞转录组学测序技术,以及可同时解析多个组学的单细胞多组学测序技术。表观遗传学是连接基因组学和细胞表型的重要调控环节,其可通过染色质的可及性、DNA和组蛋白的修饰、核小体的排列、染色质的三维构象等发挥转录调控等作用。目前,已开发了多种检测不同表观层面的单细胞测序新技术,绘制了多种组织、器官、细胞的多个表观层面异质性的图谱,初步阐述了细胞转录异质性的表观决定机制。未来的新技术和新算法,以及单细胞测序技术在生命科学和医学疾病中的应用,将有望深度解码组织、器官、细胞、分子的异质性以及异质性的调控机制。 展开更多

关键词 单细胞测序 表观组学 转录组学 二代测序 异质性

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小鼠THBS1基因敲除改善内脏脂肪免疫微环境并抑制结直肠癌腹腔种植转移 被引量：1

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作者 汪腾 高源 +2 位作者 赵昆 向远彩 缪洪明 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第18期1907-1915,共9页

目的探究血小板反应蛋白1(thrombospondin-1,THBS1)基因敲除对结直肠癌免疫微环境与肿瘤进展的作用。方法构建THBS1基因敲除小鼠,经PCR、琼脂糖凝胶电泳明确小鼠基因型。用THBS1基因野生型(THBS1^(+/+))与THBS1基因敲除(THBS1^(-/-))小... 目的探究血小板反应蛋白1(thrombospondin-1,THBS1)基因敲除对结直肠癌免疫微环境与肿瘤进展的作用。方法构建THBS1基因敲除小鼠,经PCR、琼脂糖凝胶电泳明确小鼠基因型。用THBS1基因野生型(THBS1^(+/+))与THBS1基因敲除(THBS1^(-/-))小鼠构建结直肠癌皮下荷瘤与腹腔种植转移模型,观察THBS1基因敲除对小鼠肿瘤生长情况的影响。用流式细胞术检测腹腔种植转移模型中THBS1基因敲除后对结直肠癌附睾脂肪中免疫细胞的变化。结果与THBS1^(+/+)小鼠相比,THBS1^(-/-)小鼠在结肠癌皮下荷瘤模型中肿瘤生长没有差异(P>0.05),而在腹腔种植转移模型中则显著抑制肿瘤生长(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与THBS1^(+/+)小鼠相比,THBS1基因敲除后腹腔种植转移模型小鼠的附睾脂肪组织中总巨噬细胞比例增高(P<0.01),其中M1型(经典型或促炎型)巨噬细胞比例升高(P<0.01)、M2型(替代活化型或抗炎型)巨噬细胞比例下降(P<0.01);髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)比例下降(P<0.05),其中Ly6C亚群(P<0.01)比例升高,Ly6G亚群比例降低(P<0.05);CD8+T细胞比例显著升高(P<0.01)、CD4^(+)T细胞比例降低(P<0.01)。与THBS1^(+/+)小鼠相比,THBS1基因敲除小鼠外周血总巨噬细胞、M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞比例均无变化(P>0.05);MDSC及ly6C亚群比例无变化(P>0.05),ly6G亚群比例降低(P<0.05);CD8^(+)T细胞比例显著降低(P<0.05)、CD4+T细胞比例无变化(P>0.05)。结论THBS1基因敲除通过增强肿瘤免疫抑制结直肠癌细胞腹腔种植转移。 展开更多

关键词 血小板反应蛋白1 结直肠癌 免疫微环境 附睾脂肪

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