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低氧对小鼠生精小管的损伤作用及对精母细胞凋亡的诱导作用 被引量：1
1
作者 殷骏 柳君泽 +7 位作者 倪兵 唐中伟 高志奇 赵力 张梦洁 陈德伟 何文娟 廖卫公 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期576-582,共7页
目的探讨低氧暴露下小鼠生精小管病理损伤情况以及低氧对小鼠精母细胞(GC-2spd,GC-2)细胞凋亡的影响。方法40只3周龄雄性Balb/c小鼠按照Excel Random函数随机分为常氧组、低氧15、30、60 d组,低氧各组小鼠分别暴露于模拟海拔6000 m低压... 目的探讨低氧暴露下小鼠生精小管病理损伤情况以及低氧对小鼠精母细胞(GC-2spd,GC-2)细胞凋亡的影响。方法40只3周龄雄性Balb/c小鼠按照Excel Random函数随机分为常氧组、低氧15、30、60 d组,低氧各组小鼠分别暴露于模拟海拔6000 m低压舱中减压15、30、60 d,常氧组在平原(海拔300 m)喂养,减压结束后取睾丸组织,HE和TUNEL染色检测睾丸生精小管的病理损伤;将体外培养的GC-2spd细胞,随机分为低氧组和常氧组,低氧组细胞置1%氧和5%二氧化碳低氧培养箱中培养48、60和72 h,常氧组置21%氧和5%二氧化碳培养箱中培养48、60和72 h。采用流式细胞技术、TUNEL检测法、培养液上清乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性测定和培养液caspase-3/8/9活性测定等方法来检测GC-2细胞凋亡情况。结果低氧15、30、60 d组小鼠睾丸生精小管生精细胞凋亡率分别为(37.2±5.4)%、(66.3±6.4)%、(73.5±8.2)%,均显著高于常氧组凋亡率(4.6±1.4)%,P<0.01,流式细胞术检测低张性缺氧(低氧)48、60、72 h组细胞凋亡率为(15.43±1.47)%、(44.10±14.10)%、(63.36±12.74)%,显著高于常氧48、60、72 h组细胞的凋亡率(4.18±1.40)%、(5.45%±2.30)%、(14.47±8.21)%,(P<0.01),TUNEL法显示低氧48、60、72 h组凋亡细胞数/视野(200×)为22±3、55±5、82±12,显著高于常氧48、60、72 h组5±1、8±2、15±4(P<0.01),低氧48 h组LDH值(1.28±0.18)U/mL显著高于常氧48 h组(0.48±0.09)U/mL(P<0.01),低氧48 h组caspase-3/8/9值分别为12.20±0.42、2.73±0.60、10.90±0.40,显著高于常氧48 h组7.67±0.45、16.20±0.56、7.03±0.25,(P<0.01)。结论低氧对小鼠生精小管的损伤可能是通过诱导精母细胞凋亡产生。 展开更多
关键词 凋亡 低氧 精母细胞
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丁酸对缺氧血管内皮细胞一氧化氮分泌的影响及机制研究 被引量：2
2
作者 杨诚忠 冯岚 +3 位作者 陈德伟 张钢 高钰琪 谭小玲 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期639-645,共7页
目的研究缺氧血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)下降的机制,探讨丁酸的干预作用。方法人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分为常氧组(21%O2,N)、缺氧组(1%O2,H)、缺氧+溶剂对照组(H+D)、缺氧+丁酸组(H+B)、缺... 目的研究缺氧血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)下降的机制,探讨丁酸的干预作用。方法人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分为常氧组(21%O2,N)、缺氧组(1%O2,H)、缺氧+溶剂对照组(H+D)、缺氧+丁酸组(H+B)、缺氧+干扰对照组(H+Ci)和缺氧+siRNA干扰组(H+Si)。硝酸还原法检测HUVECs培养上清液NO水平;荧光定量PCR检测一氧化氮合酶(eNOS)的mRNA水平,Western blot检测eNOS蛋白水平、乙酰化水平以及组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)蛋白水平。免疫共沉淀技术检测HDAC3和eNOS的相互作用。结果缺氧6 h后,HUVECs培养上清中NO水平降低,与常氧组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);缺氧组HUVECs中eNOS蛋白水平降低,但eNOS的mRNA水平没有明显变化。与常氧组相比,缺氧组HUVECs中,HDAC3的蛋白表达没有变化,但HDAC3与eNOS的结合增加,eNOS的乙酰化水平下降。与缺氧+干扰对照组相比,缺氧+siRNA干扰组细胞中eNOS的蛋白水平显著升高。缺氧+丁酸(4 mmol/L)处理组HUVECs培养上清中NO水平升高,与缺氧+溶剂对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);同时,缺氧+丁酸(4 mmol/L)处理组HUVECs细胞中eNOS蛋白水平升高。缺氧+丁酸(4 mmol/L)处理组HUVECs中HDAC3与eNOS的结合减少,eNOS乙酰化水平降低。结论缺氧促进HDAC3和eNOS结合,抑制eNOS的乙酰化,可能通过降低eNOS蛋白的稳定性,抑制NO分泌,而丁酸可以抑制这一过程。 展开更多
关键词 NO ENOS HDAC3 丁酸 缺氧
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DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用及机制研究
3
作者 耿建慧 陈建 +6 位作者 张二龙 阳一栋 陈德伟 吴刚 王羽 赵文琦 高钰琪 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期731-739,共9页
目的 探讨DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells, RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法 培养原代RPASMCs,采用3%O;缺氧处理细胞构建缺氧诱导细胞增殖模型。采用小干扰RNA(small interfering... 目的 探讨DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells, RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法 培养原代RPASMCs,采用3%O;缺氧处理细胞构建缺氧诱导细胞增殖模型。采用小干扰RNA(small interfering RNA sequence, siRNA)敲低Dnase2a的表达,采用质粒过表达上调细胞中Dnase2a和Hif1a的表达。采用外源性加入线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)诱导细胞增殖,使用脯氨酸羟化酶抑制剂ROXA作为HIF-1α激动剂上调细胞中HIF-1α的表达。采用MTS法检测各组细胞增殖能力,实时荧光定量PCR法检测Dnase2a的mRNA表达,Western blot法检测DNase 2α、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和细胞周期蛋白(cell cycle protein D1,Cyclin D1)的表达。结果 缺氧可诱导RPASMCs增殖,并上调DNase 2α的表达(P<0.05)。siRNA可显著降低RPASMCs中Dnase2a的表达(P<0.05),并显著增强缺氧诱导的RPASMCs增殖(P<0.05),同时显著上调PCNA和Cyclin D1的蛋白表达(P<0.05)。过表达Dnase2a可显著上调RPASMCs中DNase 2α的表达(P<0.05),并显著抑制缺氧诱导RPASMCs增殖(P<0.05)。外源性加入mtDNA可诱导RPASMCs增殖,而过表达Dnase2a可显著抑制mtDNA诱导的RPASMCs增殖(P<0.05)。过表达Hif1a或使用脯氨酸羟化酶抑制剂ROXA可显著上调HIF-1α表达,并显著上调DNase 2α的蛋白表达(P<0.05)。结论 DNase 2α可抑制缺氧或线粒体DNA诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,缺氧诱导的DNase 2α表达上调与HIF-1α有关。 展开更多
关键词 DNase 2α 线粒体DNA 大鼠肺动脉平滑肌细胞 缺氧 增殖
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