WT1多肽乳佐剂疫苗的免疫增强效应及其对急性髓系白血病抗肿瘤效应研究 被引量：2

1

作者 叶演 张泽珑 +8 位作者 朱宝行 刘姝琳 宋振 袁庆鹏 杨赟 李海波 邹全明 曾浩 孙红武 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1024-1033,共10页

目的 评价Wilm瘤基因1(Wilms’ tumor gene1, WT1)多肽联合AddaVax^(TM)乳佐剂疫苗的稳定性、安全性、免疫增强效应及其对急性髓系白血病抗肿瘤效应。方法 用MALDI-TOF-MS飞行时间质谱评价该佐剂疫苗中WT1多肽的稳定性;将C57BL/6雌性小... 目的 评价Wilm瘤基因1(Wilms’ tumor gene1, WT1)多肽联合AddaVax^(TM)乳佐剂疫苗的稳定性、安全性、免疫增强效应及其对急性髓系白血病抗肿瘤效应。方法 用MALDI-TOF-MS飞行时间质谱评价该佐剂疫苗中WT1多肽的稳定性;将C57BL/6雌性小鼠按照随机数字表法分成3组:PBS组、WT1组和WT1+AddaVax^(TM)组,使用免疫剂量为抗原50μg/只、佐剂50μg/只,按照第0、14、28天肌肉注射免疫程序进行免疫。用HE染色评价疫苗肌肉注射小鼠脏器组织毒性;用ELISA检测细胞因子水平;ELISpot检测脾细胞分泌IFN-γ细胞数量;流式细胞术检测疫苗促体外骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs)成熟和促淋巴细胞活化及H-2Db WT1四聚体检测特异性CD8+T细胞比例;用C1498-mWT1稳转细胞株构建小鼠白血病肿瘤模型后,评价其预防与治疗的抗肿瘤效应。结果 WT1多肽可在疫苗中稳定存在,对小鼠肌肉注射未发生明显的脏器组织变化;对小鼠肌肉注射WT1+AddaVax^(TM)疫苗后,与WT1组相比,WT1+AddaVax^(TM)组可诱导高水平的Th1细胞免疫应答γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及其Th17免疫应答白介素17A(IL-17A)(P<0.05);与WT1组相比,WT1+AddaVax^(TM)组促进脾淋巴细胞分泌IFN-γ的细胞数量增加(P<0.01),促进BMDCs成熟的标志物CD40^(+)/CD11c^(+)、CD86^(+)CD80^(+)/CD11c^(+)细胞比例增加(P<0.05),促进淋巴细胞中CD4^(+)/CD3^(+)T、CD69^(+)/CD8^(+)T细胞比例增加(P<0.05)及其特异性CD8+T细胞比例增加(P<0.05);利用C1498-mWT1小鼠急性髓系白血病皮下荷瘤模型的抗肿瘤效应中,WT1+AddaVax^(TM)组中位生存期相比于WT1组小鼠延长了6 d。在第50天时,WT1多肽+AddaVax^(TM)组小鼠生存率为28.5%,其他组小鼠全部死亡(P<0.05)。结论 WT1多肽联合AddaVax^(TM)乳佐剂疫苗具有良好的免疫学和明显抗肿瘤效果。 展开更多

关键词 WT1多肽 AddaVax^(TM)乳佐剂 急性髓系白血病 免疫应答 抗肿瘤效应

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金黄色葡萄球菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系的构建

2

作者 石姚佳 田湉 +3 位作者 熊廷蓉 王于 张笑恺 邹全明 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期815-821,共7页

目的建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)巨噬细胞胞内感染状态下分泌蛋白高通量筛选体系,探索金葡菌胞内生存所需关键分泌蛋白。方法利用课题组建立的金葡菌分泌蛋白真核系统表达载体库,通过DNA转染表达技术,得到能够... 目的建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)巨噬细胞胞内感染状态下分泌蛋白高通量筛选体系,探索金葡菌胞内生存所需关键分泌蛋白。方法利用课题组建立的金葡菌分泌蛋白真核系统表达载体库,通过DNA转染表达技术,得到能够在细胞内表达金葡菌分泌蛋白的RAW264.7巨噬细胞阵列。金葡菌感染RAW264.7后,清除胞外菌,观察金葡菌胞内生存情况。最后通过构建相应分泌蛋白的过表达及敲除金葡菌验证筛选结果。结果通过探索RAW264.7质粒转染剂量、金葡菌感染复数(multiplicity of infection,MOI)以及感染时间,确立筛选体系的最优质粒转染剂量为1.0μg/孔、MOI为1.0、感染时间为4 h。筛选结果结合相应分泌蛋白过表达和敲除菌株验证,成功筛选出hypothetical protein、Serine protease E等分泌蛋白具有促进胞内金葡菌生存功能。结论成功构建金葡菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 巨噬细胞 胞内感染 分泌蛋白

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植物源性免疫刺激分子麦冬皂苷的免疫增强效应及初步机制 被引量：2

3

作者 刘姝琳 魏静 +8 位作者 朱宝行 叶演 潘佳乐 赵安妮 宋振 彭六生 李海波 孙红武 邹全明 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第4期350-359,共10页

目的探究植物源性免疫刺激分子麦冬皂苷对以冠状病毒刺突蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)为抗原的亚单位疫苗的免疫应答增强效应及初步机制。方法用CCK-8法评价麦冬皂苷D’(ophiopogonin D’,OPD’)对骨髓来源的树突状细胞... 目的探究植物源性免疫刺激分子麦冬皂苷对以冠状病毒刺突蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)为抗原的亚单位疫苗的免疫应答增强效应及初步机制。方法用CCK-8法评价麦冬皂苷D’(ophiopogonin D’,OPD’)对骨髓来源的树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cell,BMDCs)的细胞毒性;将Balb/c雌性小鼠按照随机数字表法分成4组:Control组、RBD组、RBD/OPD’组、RBD/Alum组,使用免疫剂量为抗原5μg/只、佐剂100μg/只,按照第0、21、42天肌肉注射免疫程序进行免疫;监测小鼠体质量、生化指标等评价其体内安全性;用ELISA检测特异性IgG及其亚型抗体滴度;用ELISA试剂盒检测脾细胞上清中细胞因子水平;ELISpot检测脾细胞分泌γ干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)的细胞数量;用激光共聚焦显微镜观察BMDCs对抗原的摄取;流式细胞术定量分析BMDCs对抗原的吞噬能力;用转录组学技术结合生物信息学研究方法,初步探究其增强免疫效应的机制。结果当OPD’浓度<5μg/mL时BMDCs存活率为100%;小鼠单次肌肉注射后除体质量略有下降外,生化指标结果均处于正常范围;疫苗肌肉注射免疫后,RBD/OPD’组血清特异性IgG、IgG1和IgG2a滴度与RBD组相比均显著升高(P<0.05);与RBD组相比,RBD/OPD’组Th1细胞免疫应答的细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ显著增高(P<0.01),促进淋巴细胞分泌IFN-γ的细胞数量显著增加(P<0.001);激光共聚焦显微镜发现,OPD’处理后的BMDCs能摄取更多抗原,流式细胞术定量分析结果显示OPD’能显著提高BMDCs的抗原摄取率(P<0.01);转录组学结果显示,与RBD组相比RBD/OPD’组PPAR信号通路显著富集。结论麦冬皂苷D’可有效增强RBD亚单位疫苗的免疫应答水平,且其作用机制可能与激活PPAR信号通路有关。 展开更多

关键词 麦冬皂苷 佐剂 免疫应答 蛋白疫苗

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土贝母皂苷丙纳米乳的构建及其佐剂效应评价

4

作者 魏静 刘姝琳 +6 位作者 叶演 徐铭琦 宋振 邓炎 孙红武 马雷 李海波 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第8期784-793,共10页

目的 制备土贝母皂苷丙纳米乳(tubeimoside Ⅲ nanoemulsion,TBMⅢ-NE),并评价其疫苗佐剂效应。方法 利用低能乳化法制备TBMⅢ-NE,采用动态光散射法表征TBMⅢ-NE的粒径和平均分散系数,透射电镜观察TBMⅢ-NE的形态,CCK-8法检测TBMⅢ-NE... 目的 制备土贝母皂苷丙纳米乳(tubeimoside Ⅲ nanoemulsion,TBMⅢ-NE),并评价其疫苗佐剂效应。方法 利用低能乳化法制备TBMⅢ-NE,采用动态光散射法表征TBMⅢ-NE的粒径和平均分散系数,透射电镜观察TBMⅢ-NE的形态,CCK-8法检测TBMⅢ-NE对骨髓来源的树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)的细胞毒性;红细胞溶血实验评价TBMⅢ-NE的体外安全性;激光共聚焦显微镜观察TBMⅢ-NE促进DC2.4对抗原的吞噬作用;TBMⅢ-NE与BMDCs共孵育后,利用流式细胞术检测BMDCs表面CD40、CD86、MHC-Ⅰ和CCR7的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测BMDCs上清中细胞因子的表达水平;新冠病毒抗原RBD与TBMⅢ-NE联用免疫小鼠,ELISA测定小鼠血清中特异性IgG、IgG2a、IgG1抗体水平,酶联免疫斑点(ELISpot)法检测小鼠脾淋巴细胞中特异性分泌γ干扰素(IFN-γ)的细胞数量。结果 制备的空白纳米乳(blank nanoemulsion,BNE)和TBMⅢ-NE的平均粒径分别为25.46 nm和25.89 nm,平均多分散系数分别为0.214和0.125,透射电镜观察TBMⅢ-NE呈均匀“球型”且分散性良好;当TBMⅢ-NE佐剂稀释400倍时,BMDCs存活率约为86%;与游离土贝母皂苷丙(TBMⅢ)相比,TBMⅢ-NE的溶血毒性显著降低(P<0.01);TBMⅢ-NE可促进DC2.4对抗原的吞噬,并显著提高BMDCs表面CCR7的表达水平(P<0.05),具有促进树突状细胞向淋巴结迁移的潜力;TBMⅢ-NE还可促进BMDCs培养上清中IL-6和IL-1β的表达(P<0.05);与RBD联用,TBMⅢ-NE可显著提升小鼠血清中特异性IgG、IgG2a、IgG1抗体的水平(P<0.01),并促进脾淋巴细胞中特异性IFN-γ的分泌(P<0.01),提示TBMⅢ-NE可以增强特异性T细胞免疫应答。结论 成功构建出质量稳定、具有高效诱导体液和细胞免疫应答的TBMⅢ-NE。 展开更多

关键词 土贝母皂苷丙 纳米乳 疫苗佐剂 免疫效应

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大黄素抑制MRSA生物膜活性及其作用机制研究 被引量：12

5

作者 刘婧怡 蔡仑 +3 位作者 段浩 刘畅 李海波 刘明 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期684-690,共7页

目的探究大黄素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜作用及其机制。方法微量肉汤稀释法测定大黄素对MRSA标准株及5种不同地区临床分离株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentrat... 目的探究大黄素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜作用及其机制。方法微量肉汤稀释法测定大黄素对MRSA标准株及5种不同地区临床分离株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC),绘制抑菌曲线评估其动态抑菌效果;结晶紫染色测定大黄素抑制MRSA生物膜的作用,扫描电镜和激光共聚焦显微镜观察其对MRSA生物膜形态的影响;荧光定量PCR检测ica操纵子基因的表达。结果大黄素对不同MRSA菌株的MIC为2~8μg/mL,MBC为4~16μg/mL;大黄素可显著抑制MRSA生物膜的形成,并呈剂量依赖关系;大黄素对生物膜结构具有破坏作用,且显著增加了生物膜内死细菌的比例;荧光定量PCR结果提示大黄素显著下调了ica操纵子基因的表达。结论大黄素具有抑制MRSA生物膜的作用,并可能通过下调ica操纵子基因的表达抑制细菌生物膜的形成。 展开更多

关键词 大黄素 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 生物膜 ICA

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肿瘤相关成纤维细胞促胃癌类器官增殖与耐药的初步研究

6

作者 张媛媛 段振铨 +6 位作者 李雨贤 黄梦秋 朱宝行 邱远 邹全明 彭六生 马代远 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第5期453-461,共9页

目的体外构建胃癌类器官与肿瘤相关成纤维细胞的共培养模型,利用该模型探究肿瘤相关成纤维细胞对胃癌类器官增殖与化疗耐药的影响。方法收集于2023年2月至2024年3月在陆军军医大学第二附属医院普外科接受手术切除的12例胃癌患者的肿瘤... 目的体外构建胃癌类器官与肿瘤相关成纤维细胞的共培养模型,利用该模型探究肿瘤相关成纤维细胞对胃癌类器官增殖与化疗耐药的影响。方法收集于2023年2月至2024年3月在陆军军医大学第二附属医院普外科接受手术切除的12例胃癌患者的肿瘤组织。采用体外三维构建胃癌类器官;通过HE染色进行形态学分析,采用免疫组织化学染色检测细胞角蛋白CK7、癌胚抗原CEA和增殖相关因子Ki-67的表达。培养同一患者来源的肿瘤相关成纤维细胞,通过光镜观察分析其形态;采用流式细胞染色检测其表型。将胃癌类器官与肿瘤相关成纤维细胞按1∶1比例共培养,相差显微镜下观察胃癌类器官的生长情况并分析其数量、平均直径与总面积。将单独培养的类器官设置为对照组,在对照组和共培养组中加入化疗药物5-氟尿嘧啶和奥沙利铂处理48 h,利用CellTiter-Glo^(R)3D试剂盒和CellEvent^(TM)Caspase 3/7分别检测类器官的细胞活力与凋亡情况。结果成功构建出10例患者来源的胃癌类器官与肿瘤相关成纤维细胞,胃癌类器官表现出与原发肿瘤一致的形态学特征并在CK7、CEA与Ki-67的表达上具有相似性。肿瘤相关成纤维细胞呈现出典型的梭状及CD326^(-)、CD45^(-)、CD31^(-)、α-SMA^(+)、CD73^(+)、CD90^(+)、CD105^(+)表型特征。与单独培养的类器官对照组比较,与肿瘤相关成纤维细胞共培养组的类器官形成数量更多、平均直径更长且总面积更大(P<0.05)。在化疗药物5-氟尿嘧啶和奥沙利铂处理下,对照组的半数抑制浓度分别为10.66和3.26μmol/L,而共培养组则分别为46.23和91.11μmol/L;与类器官单独培养的对照组比较,共培养组中类器官的CellEvent?Caspase 3/7阳性凋亡细胞明显减少。结论与单独培养的类器官比较,肿瘤相关成纤维细胞共培养模型能更好地模拟体内肿瘤微环境的促瘤增殖与耐药效应。 展开更多

关键词 胃癌 类器官 成纤维细胞 共培养模型 药物敏感检测

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创伤弧菌致死性感染小鼠模型的组织病理改变及其在疫苗中的应用初探

7

作者 朱宝行 潘佳乐 +7 位作者 刘姝琳 叶演 宋振 李雨贤 杨赟 孙红武 邹全明 彭六生 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第7期656-663,共8页

目的建立创伤弧菌最低致死剂量感染小鼠模型,评估创伤弧菌灭活全菌疫苗的免疫保护效果。方法采用不同剂量的创伤弧菌腹腔注射小鼠,确定感染的最低致死剂量;采用组织匀浆涂板检测脏器的细菌定植量,组织切片染色分析脏器的病理改变;将肝... 目的建立创伤弧菌最低致死剂量感染小鼠模型,评估创伤弧菌灭活全菌疫苗的免疫保护效果。方法采用不同剂量的创伤弧菌腹腔注射小鼠,确定感染的最低致死剂量;采用组织匀浆涂板检测脏器的细菌定植量,组织切片染色分析脏器的病理改变;将肝脏消化成单细胞悬液,采用流式细胞术检测免疫细胞的应答变化;制备创伤弧菌灭活全菌疫苗,采用不同途径免疫小鼠,观察疫苗的保护效果。结果成功确定了创伤弧菌腹腔感染的最低致死剂量为1×10^(6)CFU,创伤弧菌感染后主要定植在小鼠的肝脏,并造成了肝脏的严重病理损伤;与未感染组小鼠相比,感染组小鼠肝脏中的中性粒细胞比例显著增加,而B细胞和T细胞的比例则相应的显著下降(P<0.05);小鼠经肌肉或腹腔单次注射灭活全菌疫苗7 d后即可有效抵抗创伤弧菌的致死性感染(P<0.01),但血清IgG抗体的水平并未明显升高。结论成功确定了创伤弧菌最低致死剂量感染小鼠模型及其组织病理学应答特征,灭活全菌疫苗可能通过IgG抗体非依赖的方式介导对该创伤弧菌感染小鼠的快速免疫保护。 展开更多

关键词 创伤弧菌 小鼠模型 肝损伤 灭活全菌疫苗

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新型抗菌化合物HL-J6与金黄色葡萄球菌PBP1的相互作用研究

8

作者 徐铭琦 史祥睿 +6 位作者 刘威 段浩 魏静 邓炎 江悦 高英英 李海波 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第9期912-921,共10页

目的 探究新型抗菌化合物HL-J6与金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白1(penicillinbinding protein 1, PBP1)的相互作用。方法 以MRSA252基因组DNA为模板,PBP1F/R为上下游引物,以Nde I/Xho I为酶切位点构建表达质粒pET30a-pbp1-39-608。将质... 目的 探究新型抗菌化合物HL-J6与金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白1(penicillinbinding protein 1, PBP1)的相互作用。方法 以MRSA252基因组DNA为模板,PBP1F/R为上下游引物,以Nde I/Xho I为酶切位点构建表达质粒pET30a-pbp1-39-608。将质粒转入大肠杆菌中进行表达并通过亲和层析纯化获得PBP1-39-608蛋白;利用肽聚糖侧链主干肽的硫酯类似物S2d作为底物,测定HL-J6对PBP1-39-608转肽酶活性的抑制作用;用微量热泳动技术(microscale thermophoresis,MST)检测HL-J6与PBP1-39-608的亲和力,并通过细胞热转移实验(cell thermal shift assay,CETSA)确证结合作用;分别利用AutoDock Vina和Desmond软件进行分子对接和动力学模拟,明确HL-J6与PBP1-39-608蛋白的结合模式和关键氨基酸残基。结果 成功构建pET30a-pbp1-39-608重组质粒,诱导表达后,经纯化获得相对分子质量约为65×103的PBP1-39-608蛋白;HL-J6可呈时间依赖性抑制PBP1-39-608的转肽酶活性(P<0.001);HL-J6与PBP1-39-608的结合解离常数Kd约为64.92μmol/L;分子对接结果显示HL-J6通过与ILE-348、ASN-370、THR-516、PHE-423等主要氨基酸残基相互作用结合在PBP1-39-608的活性口袋,结合评分为-8.38 kcal/mol(<-5.00 kcal/mol);动力学模拟结果显示二者结合后50 ns趋于稳定。结论 HL-J6可显著抑制金黄色葡萄球菌PBP1的转肽酶活性,并与其存在稳定的相互作用。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 青霉素结合蛋白 HL-J6 重组蛋白:相互作用

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TLR2/TLR9激动剂对鲍曼不动杆菌肺部感染的保护作用 被引量：6

9

作者 程浩 杨赟 +6 位作者 孙红武 邓炎 李郭成 曹静文 魏静 迟宇 李海波 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期829-836,共8页

目的评价toll-like receptor(TLR)2/TLR9激动剂对肺部感染鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)小鼠的保护作用。方法将6~8周龄雌性C57小鼠分为PBS组、Pam_(2)CSK_(4)(Pam)组、CpG ODN(CpG)组和Pam+CpG组,以不同剂量滴鼻免疫后24 ... 目的评价toll-like receptor(TLR)2/TLR9激动剂对肺部感染鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)小鼠的保护作用。方法将6~8周龄雌性C57小鼠分为PBS组、Pam_(2)CSK_(4)(Pam)组、CpG ODN(CpG)组和Pam+CpG组,以不同剂量滴鼻免疫后24 h进行Ab肺部致死性感染,观察小鼠生存率。构建亚致死剂量Ab肺部感染模型,测定感染后小鼠血液、肺脏、肝脏、肾脏和脾脏的细菌定植量,并取小鼠肺脏和肾脏进行HE染色,分析病理损伤程度。探索免疫1、3、7 d后对小鼠Ab感染的保护作用,明确保护时间窗。Pam+CpG体外刺激A549上皮细胞和RAW264.7细胞,考察两种细胞对Ab的杀伤或吞噬作用。结果与PBS组比较,Pam+CpG组能显著提高Ab致死感染小鼠的生存率(P<0.05,P<0.01),降低亚致死感染后小鼠血液(P<0.01)、肺脏(P<0.01)、肝脏(P<0.05)、肾脏(P<0.01)和脾脏(P<0.01)的细菌定植量,减轻感染导致的病理损伤;在感染之前1 d或3 d免疫均可显著提高小鼠的生存率(P<0.05),其中免疫后3 d保护效果最好。与PBS、Pam、CpG组比较,Pam+CpG组可以显著促进A549上皮细胞和R AW264.7细胞对Ab的杀伤或吞噬作用(P<0.01)。结论TLR2/TLR9激动剂合用对Ab致死和亚致死感染均具有显著的保护作用,可能的机制是其促进了肺上皮细胞和巨噬细胞对Ab的杀伤或吞噬作用。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 TLR2 TLR9 滴鼻免疫 肺部感染

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以新型脂肽为佐剂的LP-LNP构建及其对mRNA疫苗的增效作用 被引量：1

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作者 曹静文 迟宇 +6 位作者 李郭成 程浩 邓炎 魏静 朱吉 高英英 李海波 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第17期1925-1933,共9页

目的构建以新型脂肽为佐剂的递送系统脂肽-脂质纳米颗粒(lipopeptide-lipid nanoparticle,LP-LNP),初步探究其对mRNA疫苗的增效作用。方法设计并合成2种新型脂肽SS-10和SQ18,微流控技术将编码增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluores... 目的构建以新型脂肽为佐剂的递送系统脂肽-脂质纳米颗粒(lipopeptide-lipid nanoparticle,LP-LNP),初步探究其对mRNA疫苗的增效作用。方法设计并合成2种新型脂肽SS-10和SQ18,微流控技术将编码增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)、萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,F-luc)和卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)的mRNA包载到LP-LNP中,构建以新型脂肽为佐剂的mRNA递送系统;利用动态光散射法表征LP-LNP的粒径、多分散系数;利用HEK-Blue TM mTLR2报告细胞检测其Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)的激活作用,筛选最优脂肽掺入比;将优选的LP-LNP-eGFP-mRNA转染至HEK293T细胞,荧光显微镜观察eGFP的表达;利用活体成像技术考察LP-LNP-F-luc-mRNA在小鼠体内的表达水平;流式细胞术评价LP-LNP-OVA-mRNA免疫小鼠后诱导引流淋巴结中树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟水平以及交叉递呈抗原的能力。结果脂肽SQ18和SS-10分别以0.50%、0.75%的摩尔比掺入后,得到的LP-LNP平均粒径分别为127和121 nm,平均多分散系数分别为0.11和0.08,包封率均在90%以上,且体外安全性好;该配方条件下激活TLR2的能力显著强于阳性对照Pam 2 CSK 4(P<0.01);优选的LP-LNP均可以实现有效的体外转染,其中SQ18以0.50%掺入制备的LP-LNP体内转染效果显著优于传统LNP(P<0.01),且可以显著促进引流淋巴结DCs的成熟以及抗原的交叉递呈(P<0.05)。结论以新型脂肽为佐剂的LP-LNP可以增强mRNA的递送能力,进一步提高mRNA疫苗的免疫效果。 展开更多

关键词 脂质纳米颗粒 mRNA疫苗 佐剂 脂肽

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胃癌患者肿瘤组织中B细胞的浸润及其免疫抑制功能的研究 被引量：1

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作者 李雨贤 段振铨 +7 位作者 王莹 谭雪玲 余小红 张媛媛 朱宝行 邱远 彭六生 邹全明 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1034-1040,共7页

目的 检测B细胞在胃癌患者肿瘤组织和正常胃组织中的分布,分析其表型特征并探究肿瘤组织来源的B细胞对T细胞增殖的影响。方法 采用免疫组织化学染色对33例胃癌患者的肿瘤组织和正常胃组织切片进行B细胞表面标志CD19染色并分析其浸润数目... 目的 检测B细胞在胃癌患者肿瘤组织和正常胃组织中的分布,分析其表型特征并探究肿瘤组织来源的B细胞对T细胞增殖的影响。方法 采用免疫组织化学染色对33例胃癌患者的肿瘤组织和正常胃组织切片进行B细胞表面标志CD19染色并分析其浸润数目,同时采用流式细胞术检测肿瘤组织和正常胃组织中B细胞的趋化因子受体和免疫球蛋白分子表达水平,并通过趋化实验研究CXCL12-CXCR4轴对B细胞的趋化作用,最后分离纯化出肿瘤组织和正常胃组织中的B细胞与自体的外周T细胞共培养,探讨B细胞对T细胞增殖的影响。结果 胃癌患者肿瘤组织中B细胞的浸润数目显著高于正常胃组织(P<0.01);且与正常胃组织来源的B细胞相比,肿瘤组织来源的B细胞高表达趋化因子受体CXCR4(P<0.05);TCGA数据库表明胃癌患者肿瘤组织中CXCL12的表达水平与CD19的表达水平呈正相关(r=0.15,P<0.01),胃癌患者临床样本的肿瘤组织中CXCL12的表达水平与B细胞浸润数目亦呈正相关(r=0.93,P<0.05),趋化实验证实CXCL12-CXCR4轴参与促进B细胞的趋化(P<0.05);尽管B细胞在肿瘤组织和正常胃组织中表达的IgM、IgG和IgA相当,但是体外共培养研究显示,与正常胃组织来源的B细胞相比,肿瘤组织来源的B细胞可显著抑制T细胞的增殖(P<0.01)。结论 B细胞在胃癌组织中的浸润增加,其可能通过CXCL12-CXCR4轴被募集至肿瘤组织,进而抑制T细胞的增殖以参与促进胃癌的进展。 展开更多

关键词 胃癌 B细胞 免疫抑制

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幽门螺杆菌感染胃上皮细胞诱导血管生成素样蛋白4表达的机制及其功能研究 被引量：1

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作者 陈婉燕 岳耕羽 +1 位作者 徐小林 庄园 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期997-1006,共10页

目的 探究血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like 4,ANGPTL4)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染的胃上皮细胞中的表达调控及其功能机制。方法 收集2021年11月陆军军医大学第二附属医院消化内科胃镜室H.pylori阳性患者的胃... 目的 探究血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like 4,ANGPTL4)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染的胃上皮细胞中的表达调控及其功能机制。方法 收集2021年11月陆军军医大学第二附属医院消化内科胃镜室H.pylori阳性患者的胃镜标本以及H.pylori感染小鼠的胃组织,利用免疫荧光染色技术检测ANGPTL4在胃组织中的表达部位;用H.pylori感染胃上皮细胞和胃类器官,运用实时荧光定量PCR和Western blot等检测ANGPTL4的表达;探讨H.pylori感染诱导ANGPTL4表达的调控机制;利用ANGPTL4重组蛋白刺激胃上皮细胞,检测其对密封蛋白1 (claudin 1,CLDN1)表达的影响。结果 H.pylori感染能显著诱导胃上皮细胞ANGPTL4表达增加,且具有毒力因子CagA依赖性、细菌浓度依赖性和感染时间依赖性(P<0.05);相对于未感染组和CagA敲除(△cagA)H.pylori感染组,野生型(wild-type, WT)H.pylori感染组的人和小鼠胃类器官ANGPTL4表达显著上调(P<0.05);调控机制方面,阻断信号通路NF-κB可明显抑制胃上皮细胞ANGPTL4表达增加(P<0.05);功能机制方面,ANGPTL4重组蛋白通过激活通路ERK下调胃上皮细胞CLDN1表达(P<0.05)。结论 H.pylori依赖毒力因子CagA通过激活NF-κB信号通路诱导胃上皮细胞表达ANGPTL4;ANGPTL4激活通路ERK下调胃上皮细胞CLDN1表达,从而影响H.pylori感染相关胃部疾病的发展。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 血管生成素样蛋白4 NF-ΚB信号通路 密封蛋白1

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天然植物薰衣草精油对多重耐药鲍曼不动杆菌的抗菌作用及机制研究

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作者 赵曼 吴梓靖 +9 位作者 孙存 叶演 陈婷 刘姝琳 朱宝行 赵安妮 宋振 杨赟 孙红武 曾浩 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第18期2046-2056,共11页

目的探讨天然植物薰衣草精油对多重耐药鲍曼不动杆菌的抗菌作用及初步机制。方法用微量稀释法测定薰衣草精油对多重耐药鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度;用杀菌动力学研究进一步确定其起效和维持时间;用小鼠感染模型评价薰衣... 目的探讨天然植物薰衣草精油对多重耐药鲍曼不动杆菌的抗菌作用及初步机制。方法用微量稀释法测定薰衣草精油对多重耐药鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度;用杀菌动力学研究进一步确定其起效和维持时间;用小鼠感染模型评价薰衣草精油对创口愈合的促进作用;用结晶紫染色定量测定法对其生物膜的抑制和清除作用进行研究;用激光共聚焦显微镜观察生物膜中细菌存活情况;用核酸蛋白测定仪器检测3 mg/mL、6 mg/mL薰衣草精油干预后的细菌DNA核酸和蛋白质泄漏量;用钾离子试剂盒测定钾离子泄漏量,并采用蛋白组学技术结合生物信息学研究方法,初步探究薰衣草精油抗多重耐药鲍曼不动杆菌的作用机制。结果薰衣草精油的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度均为6 mg/mL,在120 min时,该浓度可杀死几乎所有多重耐药鲍曼不动杆菌,且呈现明显的剂量依赖效应和时间依赖效应。整体动物模型评价表明,3 mg/mL和6 mg/mL薰衣草精油均能促进创口愈合,疗效明显。进一步研究发现,3 mg/mL薰衣草精油具有一定的多重耐药鲍曼不动杆菌生物膜抑制作用,且能显著增加DNA核酸和蛋白质的泄漏量,并能促进钾离子外流。同时,6 mg/mL薰衣草精油展现了对多重耐药鲍曼不动杆菌生物膜的清除作用。蛋白组学研究提示,薰衣草精油的抗菌作用可能与影响多重耐药鲍曼不动杆菌的氧化还原酶活性和细胞代谢过程,干扰细胞壁/膜/包膜等结构的生物合成有关。结论薰衣草精油在3 mg/mL时即可发挥对多重耐药鲍曼不动杆菌的抗菌作用,其作用机制可能与破坏细菌生物膜和干扰细菌代谢有关。 展开更多

关键词 薰衣草精油 多重耐药 鲍曼不动杆菌 抗菌作用 作用机制

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新型冠状病毒肺炎治疗药物的研究现状及对策建议 被引量：25

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作者 邹全明 李海波 曾浩 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期861-866,共6页

自新型冠状病毒(SARS-CoV-2)疫情发生以来,国内外多家研究机构投入到抗新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎,coronavirus disease 2019,COVID-19)的药物研发中。目前主要采取老药新用的策略,筛选抗新冠病毒和抑制过度免疫反应的候选药物,相... 自新型冠状病毒(SARS-CoV-2)疫情发生以来,国内外多家研究机构投入到抗新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎,coronavirus disease 2019,COVID-19)的药物研发中。目前主要采取老药新用的策略,筛选抗新冠病毒和抑制过度免疫反应的候选药物,相关研究已经取得了重要进展。本文在综述已经纳入国家卫健委印发的新型冠状病毒肺炎诊疗方案中以及在体外已经证实对新型冠状病毒具有抑制作用的药物研发和临床应用的现状的基础上,对未来新冠肺炎治疗药物的研究对策提出建议:①从"老药新用"策略向创新药物研发转变;②构建可靠的体内外药物筛选模型;③建立新冠肺炎药物研发的协同创新机制;④有序开展新冠肺炎的药物临床试验;⑤建立冠状病毒研发的长效机制。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 新冠病毒肺炎 治疗药物 药物研发

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超级细菌疫苗研究的挑战与策略 被引量：10

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作者 邹全明 曾浩 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期1823-1825,1827,共4页

超级细菌(superbugs)泛指那些对多种抗生素具有耐药性的细菌,专业术语是'多重耐药性细菌'。2017年,WHO列出严重威胁人类的12种耐药细菌清单,金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌在清单中分别位列G^+菌首... 超级细菌(superbugs)泛指那些对多种抗生素具有耐药性的细菌,专业术语是'多重耐药性细菌'。2017年,WHO列出严重威胁人类的12种耐药细菌清单,金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌在清单中分别位列G^+菌首位和G^-菌前3位。因现在大部分的抗生素对它们已失去效力,全人类将面临难以承受的巨大挑战与威胁。疫苗是防控致病菌流行感染最佳的科学手段。我国科学家团队已研制国际首个靶标最多、效果最佳的金黄色葡萄球菌疫苗,正开展Ⅱ期临床试验。近20年来,欧美国家先后研发20余种超级细菌疫苗进行临床试验,但尚无一项成功。超级细菌疫苗研究面临巨大的挑战,如超级细菌致病机制不详,超级细菌疫苗如何在易感人群快速起效,超级细菌动物模型、临床流行病学基础数据和临床试验评价的关键技术及标准缺乏等均是目前超级细菌研究亟待解决的难题。我们建议今后的研究围绕以下几个方面进行:①建立保护性抗原表位大数据及高通量筛选新技术;②研究耐药菌疫苗快速起效机制及新技术;③开展超级细菌疫苗使用人群的免疫应答规律及特征研究;④建立成熟、稳定的超级细菌感染动物模型;⑤运用大数据、人工智能、基因组学等建立超级细菌流行病学大数据库和菌种资源库;⑥开展细菌疫苗的免疫保护机制及其核心指标的研究。 展开更多

关键词 超级细菌 耐药菌 疫苗 挑战 策略

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新型冠状病毒疫苗佐剂的研究现状与展望 被引量：5

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作者 李海波 程浩 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第23期2353-2359,共7页

疫苗是预防新冠病毒感染最经济和最有效的手段。佐剂能增强抗原特异性免疫应答,减少抗原剂量和接种次数,重塑适应性免疫反应,对提高新冠病毒疫苗的保护效果至关重要。本文评述了已经授权紧急使用或正在开展临床试验的新冠病毒疫苗所用... 疫苗是预防新冠病毒感染最经济和最有效的手段。佐剂能增强抗原特异性免疫应答,减少抗原剂量和接种次数,重塑适应性免疫反应,对提高新冠病毒疫苗的保护效果至关重要。本文评述了已经授权紧急使用或正在开展临床试验的新冠病毒疫苗所用佐剂及其作用机制和优缺点,分析了新冠病毒疫苗研发中应用佐剂须考虑的问题,并对新冠病毒疫苗佐剂的未来研究方向进行了展望:(1)针对免疫功能不全人群的佐剂;(2)增强T细胞应答的佐剂;(3)新型黏膜免疫佐剂;(4)复合佐剂的合理设计。 展开更多

关键词 新冠病毒 疫苗 佐剂 研究现状 展望

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肾上腺髓质素在幽门螺杆菌感染中的表达调控及其功能的初步研究 被引量：2

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作者 孔辉 庄园 +5 位作者 毛方圆 彭六生 滕永生 刘毓刚 吕一品 郭刚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期183-189,共7页

目的探讨肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)在幽门螺杆菌感染中的表达调控及其对CD3+T细胞增殖的影响。方法建立幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染C57小鼠及胃上皮细胞模型,运用定量PCR、免疫组织化学染色和Western blot检... 目的探讨肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)在幽门螺杆菌感染中的表达调控及其对CD3+T细胞增殖的影响。方法建立幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染C57小鼠及胃上皮细胞模型,运用定量PCR、免疫组织化学染色和Western blot检测ADM的表达;并在细胞模型中探讨H.pylori感染诱导ADM上调的机制;利用ADM刺激CD3+T细胞,检测其对T细胞增殖的影响。结果 H.pylori感染可诱导胃上皮细胞AGS和HGC-27上调ADM的表达,并具有时间和感染菌量依赖性(P<0.05);PI3K/AKT信号通路阻断可显著抑制H.pylori感染诱导的ADM上调表达(P<0.05);相对于未感染组,H.pylori感染小鼠胃组织中的ADM水平也显著增高;而相对于野生型全毒株,敲除cag A基因后,H.pylori感染诱导ADM上调的能力则显著下降(P<0.05);ADM能够以剂量依赖的方式诱导CD3+T细胞的增殖并促进IFN-γ的表达(P<0.05)。结论幽门螺杆菌感染可经PI3K/AKT信号诱导肾上腺髓质素的表达上调,后者则可能通过影响CD3+T细胞的增殖和分化而发挥免疫调节作用。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 肾上腺髓质素 PI3K/AKT信号通路 CD3+T细胞

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CD8^(+)CD103^(+)Trm细胞在胃癌中的分布、表型及其功能下降的机制研究 被引量：1

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作者 沈洋 彭六生 +2 位作者 邱远 邹全明 马代远 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1146-1152,共7页

目的探讨CD8^(+)CD103^(+)常驻记忆型T(Trm)细胞在胃癌患者组织中的分布情况,并研究其表型特征,分析胃癌组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞功能下降的机制。方法采用免疫组织化学染色检测胃癌患者组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的数目并... 目的探讨CD8^(+)CD103^(+)常驻记忆型T(Trm)细胞在胃癌患者组织中的分布情况,并研究其表型特征,分析胃癌组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞功能下降的机制。方法采用免疫组织化学染色检测胃癌患者组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的数目并分析其与胃癌患者临床分期的相关性;流式细胞术检测胃癌患者组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的比例与数目、表型和功能;体外TGF-β1刺激培养CD8^(+) T细胞,分析其对CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞功能的影响。结果与正常组织相比,胃癌患者肿瘤组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的数目并未明显改变(P>0.05),但其频率显著下降(P<0.05);胃癌组织浸润的CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞主要属于效应记忆型细胞(CD45RA-CCR7-),并高表达CD69和PD-1;然而,其表达的颗粒酶B和穿孔素水平显著下降(P<0.05);体外TGF-β1可诱导CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞下调表达颗粒酶B和穿孔素(P<0.05)。此外,与早期胃癌患者相比,晚期胃癌患者肿瘤组织中浸润的CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞数目显著下降(P<0.05)。结论胃癌组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的浸润水平与疾病的进展成负相关,并呈现出抑制性的表型且抗肿瘤功能下降,从而有助于胃癌的免疫逃逸。 展开更多

关键词 胃癌 CD8^(+)CD103^(+)Trm细胞 TGF-Β1 疾病进展

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CD3^+CD56^+NKT样细胞在胃癌患者外周血中的检测及其功能下降的机制 被引量：2

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作者 余路遥 王辉 彭六生 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1022-1027,共6页

目的分析CD3^+CD56^+NKT细胞在胃癌患者外周血中的应答水平和功能特征,并初步探讨其功能下降的机制。方法采用流式细胞术检测胃癌患者外周血中CD3^+CD56^+NKT样细胞的比例及其功能,同时采用胃癌患者外周血浆刺激单个核细胞并加入抗体阻... 目的分析CD3^+CD56^+NKT细胞在胃癌患者外周血中的应答水平和功能特征,并初步探讨其功能下降的机制。方法采用流式细胞术检测胃癌患者外周血中CD3^+CD56^+NKT样细胞的比例及其功能,同时采用胃癌患者外周血浆刺激单个核细胞并加入抗体阻断,探讨外周血中细胞因子对CD3^+CD56^+NKT样细胞功能的影响,最后分析其功能变化与疾病进展的关联性。结果与正常对照组和胃溃疡患者组相比,胃癌患者外周血中CD3^+CD56^+NKT样细胞的比例无统计学差异;但其表达的INF-γ和TNF-α水平显著下降(P<0.05);体外刺激实验显示,胃癌患者外周血来源的TGF-β1可抑制CD3^+CD56^+NKT样细胞分泌INF-γ和TNF-α(P<0.05);晚期胃癌患者外周血中表达INF-γ和TNF-α的CD3^+CD56^+NKT样细胞水平显著低于早期胃癌患者(P<0.05)。结论胃癌患者外周血中的TGF-β1抑制了CD3^+CD56^+NKT样细胞的抗肿瘤功能,从而导致了胃癌的进展。 展开更多

关键词 胃癌 CD3+CD56+NKT样细胞 TGF-Β1 疾病进展

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不同佐剂对重组鲍曼不动杆菌PKF的免疫效果研究

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作者 张珊珊 李郭成 +6 位作者 冯壤 薛若怡 段浩 曹宇 刘婧怡 李海波 高英英 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期957-963,共7页

目的比较不同免疫方式、不同佐剂对重组鲍曼不动杆菌PKF的免疫效果。方法构建重组质粒,经诱导表达纯化获得重组PKF,分别联合氢氧化铝、AS03肌注(intramuscular,im)免疫以及LTK63、LP1-34滴鼻(intranasally,in)免疫小鼠,共分为7组:PBS组... 目的比较不同免疫方式、不同佐剂对重组鲍曼不动杆菌PKF的免疫效果。方法构建重组质粒,经诱导表达纯化获得重组PKF,分别联合氢氧化铝、AS03肌注(intramuscular,im)免疫以及LTK63、LP1-34滴鼻(intranasally,in)免疫小鼠,共分为7组:PBS组;肌注免疫组:PKF(im)组、PKF+Al(im)组、PKF+AS03(im)组;滴鼻免疫组:PKF(in)组、PKF+LTK63(in)组、PKF+LP1-34(in)组。ELISA检测免疫后小鼠血清中特异性IgG以及黏膜部位sIgA的水平;构建鲍曼不动杆菌肺部感染亚致死模型,测定攻毒后小鼠血液和肺部细菌定植量,评价疫苗保护作用。结果肌注免疫组中,AS03辅助PKF诱导最高的特异性IgG抗体水平(P<0.01);滴鼻免疫组中,LTK63显著提升肺泡灌洗液中特异性sIgA水平(P<0.01);攻毒后细菌定植量检测结果显示,PKF+AS03肌注组细菌定植量与单用PKF组相当,而滴鼻组中LTK63可以显著降低细菌定植量(P<0.01)。结论LTK63可以辅助PKF更好地发挥对鲍曼不动杆菌肺部感染的保护作用,表明疫苗介导的黏膜免疫应答对保护感染可能更加重要。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 佐剂 PKF 免疫效果

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