目的探究线粒体自噬在胰腺癌恶病质肌肉萎缩中的作用及其潜在机制。方法采用随机数字表法将8周龄雄性C57BL/6J小鼠(n=6,体质量20~30 g)分为对照组(n=3,胰腺原位注射生理盐水)和恶病质组(n=3,胰腺原位注射KPC1199细胞,建立胰腺癌模型)。...目的探究线粒体自噬在胰腺癌恶病质肌肉萎缩中的作用及其潜在机制。方法采用随机数字表法将8周龄雄性C57BL/6J小鼠(n=6,体质量20~30 g)分为对照组(n=3,胰腺原位注射生理盐水)和恶病质组(n=3,胰腺原位注射KPC1199细胞,建立胰腺癌模型)。建模完成后,采集2组小鼠的腓肠肌组织,使用透射电镜观察线粒体超微结构;通过Western blot检测线粒体呼吸链复合体Ⅰ-Ⅳ及自噬相关蛋白的表达,免疫荧光染色观察腓肠肌中线粒体溶酶体共定位。细胞实验中,将C2C12成肌细胞诱导分化为肌管后,分为对照组(常规培养)和恶病质组(通过共培养小室与KPC1199细胞共培养48 h)。通过免疫荧光染色及Western blot分别观察线粒体溶酶体共定位和线粒体自噬相关蛋白的表达。在共培养体系中加入线粒体分裂抑制剂,通过免疫荧光染色评估肌管直径。结果与对照组比较,恶病质组小鼠腓肠肌线粒体肿胀、嵴减少,线粒体溶酶体共定位显著增多。Western blot检测显示,与对照组比较,线粒体呼吸链复合体Ⅰ(1.00±0.04 vs 0.51±0.04,P<0.05)、复合体Ⅱ(1.00±0.13 vs 0.73±0.15,P<0.05)、复合体Ⅲ(1.00±0.20 vs 0.64±0.01,P<0.05)、复合体Ⅳ(1.06±0.06 vs 0.65±0.02,P<0.05)和PGC-1α(1.00±0.03 vs 0.62±0.06,P<0.05)表达降低,线粒体自噬标志物LC3-Ⅰ/Ⅱ(1.00±0.14 vs 1.65±0.25,P<0.05)、PINK1(1.00±0.11 vs 1.51±0.05,P<0.05)和BNIP3(1.00±0.22 vs 2.02±0.10,P<0.05)表达升高。在C2C12肌管模型中,肿瘤细胞共培养组线粒体溶酶体共定位较对照组增多,线粒体自噬相关蛋白表达增高,变化趋势与动物模型一致。加入20μmol/L线粒体分裂抑制剂干预后,肌管直径从(220.6±35.5)μm增至(315.0±39.1)μm(R²=0.6665,P<0.05)。结论胰腺癌恶病质萎缩肌肉中线粒体自噬激活,体外抑制线粒体自噬可有效减缓肿瘤诱导的肌管萎缩。展开更多
目的探讨人乙醛脱氢酶家族1成员A3(aldehyde dehydrogenase 1 family member A3,ALDH1A3)在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达情况,并研究其对胰腺癌侵袭的调控及可能的机制。方法利用癌症和肿瘤基因图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数...目的探讨人乙醛脱氢酶家族1成员A3(aldehyde dehydrogenase 1 family member A3,ALDH1A3)在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达情况,并研究其对胰腺癌侵袭的调控及可能的机制。方法利用癌症和肿瘤基因图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中胰腺癌患者数据集、基因组织表达项目(Genotype-Tissue Expression Project,GTEx)中正常胰腺组织基因表达谱数据和肿瘤细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)数据库中胰腺癌细胞系的基因表达谱矩阵,分析ALDH家族各亚型的表达情况;Transwell实验检测敲低ALDH1A3对胰腺癌细胞侵袭能力的影响;基因富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探讨ALDH1A3与JAK/STAT3通路活化的关系。结果 ALDH1A3在胰腺癌组织中的表达高于正常胰腺组织;在胰腺癌细胞系中的表达高于其他ALDH亚型;下调ALDH1A3可以降低胰腺癌细胞系的侵袭能力;JAK/STAT3通路在ALDH1A3高表达胰腺癌患者中显著富集;下调ALDH1A3可抑制STAT3的磷酸化。结论 ALDH1A3参与调控胰腺癌细胞的侵袭,其机制可能与JAK/STAT3通路的活化有关。展开更多
文摘目的探究线粒体自噬在胰腺癌恶病质肌肉萎缩中的作用及其潜在机制。方法采用随机数字表法将8周龄雄性C57BL/6J小鼠(n=6,体质量20~30 g)分为对照组(n=3,胰腺原位注射生理盐水)和恶病质组(n=3,胰腺原位注射KPC1199细胞,建立胰腺癌模型)。建模完成后,采集2组小鼠的腓肠肌组织,使用透射电镜观察线粒体超微结构;通过Western blot检测线粒体呼吸链复合体Ⅰ-Ⅳ及自噬相关蛋白的表达,免疫荧光染色观察腓肠肌中线粒体溶酶体共定位。细胞实验中,将C2C12成肌细胞诱导分化为肌管后,分为对照组(常规培养)和恶病质组(通过共培养小室与KPC1199细胞共培养48 h)。通过免疫荧光染色及Western blot分别观察线粒体溶酶体共定位和线粒体自噬相关蛋白的表达。在共培养体系中加入线粒体分裂抑制剂,通过免疫荧光染色评估肌管直径。结果与对照组比较,恶病质组小鼠腓肠肌线粒体肿胀、嵴减少,线粒体溶酶体共定位显著增多。Western blot检测显示,与对照组比较,线粒体呼吸链复合体Ⅰ(1.00±0.04 vs 0.51±0.04,P<0.05)、复合体Ⅱ(1.00±0.13 vs 0.73±0.15,P<0.05)、复合体Ⅲ(1.00±0.20 vs 0.64±0.01,P<0.05)、复合体Ⅳ(1.06±0.06 vs 0.65±0.02,P<0.05)和PGC-1α(1.00±0.03 vs 0.62±0.06,P<0.05)表达降低,线粒体自噬标志物LC3-Ⅰ/Ⅱ(1.00±0.14 vs 1.65±0.25,P<0.05)、PINK1(1.00±0.11 vs 1.51±0.05,P<0.05)和BNIP3(1.00±0.22 vs 2.02±0.10,P<0.05)表达升高。在C2C12肌管模型中,肿瘤细胞共培养组线粒体溶酶体共定位较对照组增多,线粒体自噬相关蛋白表达增高,变化趋势与动物模型一致。加入20μmol/L线粒体分裂抑制剂干预后,肌管直径从(220.6±35.5)μm增至(315.0±39.1)μm(R²=0.6665,P<0.05)。结论胰腺癌恶病质萎缩肌肉中线粒体自噬激活,体外抑制线粒体自噬可有效减缓肿瘤诱导的肌管萎缩。
文摘目的探讨人乙醛脱氢酶家族1成员A3(aldehyde dehydrogenase 1 family member A3,ALDH1A3)在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达情况,并研究其对胰腺癌侵袭的调控及可能的机制。方法利用癌症和肿瘤基因图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中胰腺癌患者数据集、基因组织表达项目(Genotype-Tissue Expression Project,GTEx)中正常胰腺组织基因表达谱数据和肿瘤细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)数据库中胰腺癌细胞系的基因表达谱矩阵,分析ALDH家族各亚型的表达情况;Transwell实验检测敲低ALDH1A3对胰腺癌细胞侵袭能力的影响;基因富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探讨ALDH1A3与JAK/STAT3通路活化的关系。结果 ALDH1A3在胰腺癌组织中的表达高于正常胰腺组织;在胰腺癌细胞系中的表达高于其他ALDH亚型;下调ALDH1A3可以降低胰腺癌细胞系的侵袭能力;JAK/STAT3通路在ALDH1A3高表达胰腺癌患者中显著富集;下调ALDH1A3可抑制STAT3的磷酸化。结论 ALDH1A3参与调控胰腺癌细胞的侵袭,其机制可能与JAK/STAT3通路的活化有关。
