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胶质瘤内肿瘤相关巨噬细胞的缺氧转录表型及细胞超微结构改变
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作者 范海珍 王丽霞 +9 位作者 程玥 王路静 阮潜瑛 吉佳乐 王梦茹 秦榛 张艺 何志承 平轶芳 时雨 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第9期904-911,共8页
目的探讨缺氧对胶质瘤内肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)转录表型及细胞超微结构的影响。方法从陆军军医大学第一附属医院血库的健康人外周血样本中分离CD14阳性单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)... 目的探讨缺氧对胶质瘤内肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)转录表型及细胞超微结构的影响。方法从陆军军医大学第一附属医院血库的健康人外周血样本中分离CD14阳性单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),并在人胶质瘤细胞上清共培养的条件下使其分化为TAM。使用不同浓度(50~400μmol/L)的氯化钴(cobalt chloride hexahydrate,CoCl_(2))或缺氧条件(1%、5%、10%O_(2))处理48 h后诱导为TAM缺氧细胞模型,同时在相同时间下采用21%O_(2)处理为TAM常氧细胞模型。使用RT-q PCR和转录组测序技术,检测常氧组和缺氧组TAM的转录表型改变。通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)比较常氧组及缺氧组TAM中血管生成、糖酵解等缺氧响应相关通路的差异。利用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)或免疫荧光染色检测常氧组TAM和缺氧组TAM(1%O_(2))的细胞骨架、内质网与线粒体的超微结构改变。结果与常氧组TAM相比,缺氧组TAM内参与氧气运输、糖酵解代谢、促血管生成相关的缺氧响应标志物的转录表达增加,且与缺氧程度相关(P<0.05)。GSEA结果显示,与常氧组TAM相比,缺氧组TAM的缺氧、血管生成调控、糖酵解与糖异生、饥饿应激通路上调(P<0.05);而先天免疫调控、巨噬细胞活化、细胞骨架与蛋白成熟通路显著下调(P<0.05)。TEM及免疫荧光染色结果提示,缺氧组TAM细胞骨架、粗面内质网、线粒体的超微结构明显改变,包括:细胞骨架排列紊乱和断裂;粗面内质网变短,表面附着核糖体减少;线粒体水肿且内嵴破环,与粗面内质网的接触减少。结论CoCl_(2)以及缺氧处理诱导TAM呈现缺氧转录表型,可能与细胞骨架、内质网和线粒体的超微结构改变有关。 展开更多
关键词 胶质瘤 缺氧 肿瘤相关巨噬细胞 超微结构
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急性髓系白血病干细胞源性巨噬样细胞生物学特性的研究 被引量:2
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作者 刘嘉 杨超 +4 位作者 杨世杰 张曦 余时沧 段江洁 高蕾 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第15期1350-1356,共7页
目的探讨急性髓系白血病干细胞(acute myeloid leukemia stem cells,AML LSCs)分化成AML LSCs源性巨噬样细胞的生物学现象、生物学特点及潜在的病理学意义。方法分选AML细胞系Kasumi-3中AML LSCs,在巨噬细胞条件培养基中培养14 d,从形... 目的探讨急性髓系白血病干细胞(acute myeloid leukemia stem cells,AML LSCs)分化成AML LSCs源性巨噬样细胞的生物学现象、生物学特点及潜在的病理学意义。方法分选AML细胞系Kasumi-3中AML LSCs,在巨噬细胞条件培养基中培养14 d,从形态学、免疫表型、分泌细胞因子、吞噬功能等角度鉴定获得的贴壁细胞,明确AML LSCs源性巨噬样细胞的基本生物学特点。检测与AML LSCs源性巨噬样细胞共培养的Kasumi-3细胞表面耐药蛋白水平、胞内化疗药物浓度和对柔红霉素(DNR)的摄药量,初步评价AML LSCs源性巨噬样细胞促进白血病耐药的作用及可能机制。结果培养获得的AML LSCs源性巨噬样细胞呈多形性,以多角形和椭圆形贴壁细胞为主,透射电镜观察发现细胞呈椭圆形,胞浆丰富,有较多空泡;近胞核处高尔基体富集;包膜绒毛丰富且较长。AML LSCs源性巨噬样细胞特异性表达CD11b、CD163、CD206,分泌一定水平IL-10和IL-13。细菌吞噬实验证明其可吞噬大量呈绿色杆状荧光的E.coli菌,随着孵育时间的延长,吞噬数量逐渐增多。激光共聚焦显微镜观察发现与AML LSCs源性巨噬样细胞共培养的Kasumi-3细胞表面ABC转运蛋白表达明显强于对照组,DNR摄药量低于悬浮培养Kasumi-3细胞(54.75±4.28 vs 93.84±3.93,P<0.01),对DNR、阿霉素(ADM)、阿糖胞苷(Ara-C)和足叶乙甙(VP-16)均有一定的耐药性。结论 AML LSCs在特定条件下可以分化成为AML LSCs源性巨噬样细胞,后者有类似巨噬细胞的生物学特性,参与白血病耐药的形成。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 白血病干细胞 巨噬细胞 造血微环境 耐药
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基于多转录组测序的胶质母细胞瘤间质样肿瘤亚群缺氧特征及预后研究
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作者 陈涛 杨帆 +9 位作者 王帅 罗敏 颜泽萱 唐采蝶 甯芸 杨思思 曹若菲 李政波 方煊宇 姚小红 《陆军军医大学学报》 2025年第16期1904-1912,共9页
目的通过多转录组测序数据分析,解析胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的肿瘤细胞异质性组成特点和生物学功能,以探究GBM间质样(mesenchymal-like,MES-like)肿瘤亚群的缺氧特点、空间定位特征以及对GBM恶性生物学行为的影响。方法分析公... 目的通过多转录组测序数据分析,解析胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的肿瘤细胞异质性组成特点和生物学功能,以探究GBM间质样(mesenchymal-like,MES-like)肿瘤亚群的缺氧特点、空间定位特征以及对GBM恶性生物学行为的影响。方法分析公共数据库18例GBM单细胞转录组测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)数据,以及GBM普通转录组测序(bulk RNA sequencing,bulk RNA-seq)和空间转录组测序(spatial transcriptomics,ST)数据,通过单细胞转录组定义GBM肿瘤亚群,基因本体论(Gene Ontology,GO)和基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)进行功能富集。使用BayesPrism反卷积方法评估普通转录组的细胞亚群占比和定位,并收集2015年至2023年就诊于西南医院神经外科患者的12例符合胶质母细胞瘤病理学诊断标准的石蜡样本(男性10例,女性2例,平均年龄为53.50岁,中位年龄为54.50岁)进行免疫荧光验证。pySCENIC预测肿瘤细胞亚群特异转录因子。结果GBM肿瘤细胞具有高度异质性,主要分为4种亚群,即星形胶质细胞样(astrocyte-like,AC-like)、神经前体细胞样(neural progenitor-like,NPC-like)、少突前体细胞样(oligodendrocyte progenitor-like,OPC-like)和MES-like肿瘤亚群。差异基因分析发现MES-like肿瘤亚群高表达血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth Factor A,VEGFA)、肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)、N-myc下游调控基因1(N-myc downstream regulated 1,NDRG1)、胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulin like growth factor binding protein 5,IGFBP5)、A-激酶锚定蛋白12(A-kinase anchoring protein 12,AKAP12)(P<0.001)。pySCENIC转录因子预测发现,MES-like肿瘤亚群的高活性转录因子为AT-rich交互域3A(AT-rich interaction domain 3A,ARID3A)、FOS like 2,AP-1转录因子亚基(FOS Like 2,AP-1 transcription factor subunit,FOSL2)、内皮PAS结构域蛋白1(endothelial PAS domain protein 1,EPAS1)、CCAAT增强子结合蛋白Delta(CCAAT enhancer binding protein delta,CEBPD)、CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding protein beta,CEBPB)(P<0.05)。GO和GSEA富集发现,MES-like肿瘤亚群富集于缺氧相关通路,如细胞对低氧水平的反应(NES=2.437,P<0.001)。BayesPrism反卷积显示,MES-like肿瘤亚群主要存在于假栅栏样坏死区和坏死周围。GBM石蜡样本免疫荧光证实CD44+(CD44 antigen,CD44抗原)MES-like肿瘤亚群主要存在于HIF1αhigh(Hypoxia Inducible Factor 1 Subunit Alpha,缺氧诱导因子1α)的缺氧区域(P<0.01)。多因素Cox回归显示MES-like肿瘤亚群与患者不良预后显著相关(HR=1.71,95%CI:1.38~2.11,P<0.001)。结论GBM肿瘤细胞具有高度异质性,主要分为AC-like、NPC-like、OPC-like和MES-like肿瘤亚群,其MES-like肿瘤亚群具有缺氧特点,主要定位于假栅栏样坏死区和坏死周围,具有促进GBM恶性生物学行为的作用。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 缺氧 RNA测序分析
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沉默高迁移率族蛋白B1对胶质母细胞瘤细胞恶性生物学行为的抑制 被引量:2
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作者 李壮 付文娟 +2 位作者 王帅 钮芹 姚小红 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期406-412,共7页
目的探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group proteinB1,HMGB1)在胶质母细胞瘤样本中的高表达对于胶质母细胞瘤侵袭能力及替莫唑胺治疗的影响。方法利用癌症和肿瘤基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中319例样本的HMGB1... 目的探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group proteinB1,HMGB1)在胶质母细胞瘤样本中的高表达对于胶质母细胞瘤侵袭能力及替莫唑胺治疗的影响。方法利用癌症和肿瘤基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中319例样本的HMGB1测序数据进行差异表达及生存分析。采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测HMGB1在本院生物样本库中收集的4例不同WHO分级胶质瘤样本中的表达。3例胶质瘤样本(分别为WHOⅡ、Ⅲ和Ⅳ级)和1例瘤旁脑组织(作为对照,其胶质瘤组织为WHOⅡ级)均来自于陆军军医大学第一附属医院生物样本库(2019年5-10月的男性住院患者,年龄40~88岁,中位年龄58.5岁;患者行胶质瘤组织切除术前未行放化疗,术后标本经病理组织学检查证实为胶质瘤)。采用慢病毒转染法构建沉默HMGB1的细胞株,Western blot检测HMGB1蛋白表达。CCK-8和Transwell检测HMGB1对细胞增殖和侵袭能力的影响。CCK-8检测沉默HMGB1对替莫唑胺的敏感性。替莫唑胺粉末溶于二甲基亚砜中制成100 mmol/L的储存液,使用时终浓度为250、500、1000、1500μmol/L。结果TCGA数据库显示HMGB1 mRNA在肿瘤组织中表达显著上调(P<0.01),且随WHO级别的增加而增加,并与患者的预后显著负相关(P<0.01)。沉默HMGB1的胶质母细胞瘤细胞株增殖能力降低(P<0.05),侵袭能力下降(P<0.01),且对替莫唑胺治疗更敏感(P<0.05)。结论HMGB1在胶质母细胞瘤中显著上调,高表达的HMGB1促进了胶质母细胞瘤细胞的侵袭能力和替莫唑胺耐药。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 高迁移率族蛋白B1 替莫唑胺 耐药 侵袭
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