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Gm49394对胰岛β细胞凋亡的调控及机制研究
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作者 刘东 赵清远 +5 位作者 杨数数 张梦军 黎婕 李雨浩 王莉 吴玉章 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第18期2211-2222,共12页
目的研究功能未知基因Gm49394参与糖尿病背景下胰岛β细胞凋亡的调控及可能机制。方法通过RNA荧光原位杂交技术(RNA fluorescence in situ hybridization,RNA-FISH)、Western blot、免疫荧光染色(immunofluorescence,IF)、实时荧光定量P... 目的研究功能未知基因Gm49394参与糖尿病背景下胰岛β细胞凋亡的调控及可能机制。方法通过RNA荧光原位杂交技术(RNA fluorescence in situ hybridization,RNA-FISH)、Western blot、免疫荧光染色(immunofluorescence,IF)、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测Gm49394在胰岛β细胞系(NIT-1和Min6)及非胰岛β细胞系(293T、3T3L1、B16、LS174T)的表达及翻译活性;通过构建过表达/敲低稳转细胞株(NIT-1/Min6),在稳态以及葡萄糖(30 mmol/L)、单独IFN-γ(10 ng/mL)或联合IL-6(10 ng/mL)、H_(2)O_(2)(100μmol/L)等病理应激条件下,采用流式细胞术和Western blot检测β细胞增殖、凋亡、线粒体功能,及氧化应激和内质网应激标志。结果RNA-FISH和qPCR结果显示基因Gm49394在胰岛β细胞系中特异性表达,并受高糖或炎症因子刺激而上调;IF及Western blot结果显示Gm49394具有蛋白编码活性;流式细胞术和Western blot结果显示Gm49394过表达不影响β细胞增殖,但显著促进稳态和病理应激条件下的β细胞凋亡,并增加活性氧(reactive oxygen species,ROS)及线粒体超氧化物(mitochondrial superoxide,MitoSOX)水平(P<0.05);稳态条件下,Gm49394敲低对β细胞增殖、凋亡、ROS及MitoSOX均无显著影响,但Gm49394敲低能显著抑制病理应激条件下的β细胞凋亡,同时显著抑制氧化应激和内质网应激(P<0.05)。结论基因Gm49394可能通过氧化应激和内质网应激促进胰岛β细胞的凋亡。 展开更多
关键词 糖尿病 胰岛Β细胞 氧化应激 内质网应激 凋亡
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